生物技术制药乙肝疫苗制备.pptx
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1、生物技生物技术制制药乙肝疫苗制乙肝疫苗制备乙型病毒性肝炎乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主,并可引起多器官损害的一种疾病。乙肝广泛流行于世界各国,主要侵犯儿童及青壮年,少数患者可转化为肝硬化或肝癌。因此,它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病,也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种疾病。乙型病毒性肝炎无一定的流行期,一年四季均可发病,但多属散发。近年来乙肝发病率呈明显增高的趋势。乙肝疫苗的应用是预防和控制乙型肝炎的根本措施。乙肝疫苗的概念乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗接种后,可刺激免疫系统产生保护性抗体,这种抗体存在于人的体液之中,乙肝病毒一旦出现,抗体
2、会立即作用,将其清除,阻止感染,并不会伤害肝脏,从而使人体具有了预防乙肝的免疫力,从而达到预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝疫苗的发展史乙肝疫苗形成于1986年,为了得到乙肝疫苗,研究人员从研究复试病毒,到酵母,并研究纯化的蛋白质序列。并经过了大量的诱导免疫反应。1991年,疫苗被应用于高危险人群。主要是一些儿童,因为儿童的感染率极高。2005年,美国推行常规的疫苗注射。给所有未注射过乙肝疫苗的儿童注射。治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中,通过诱导特异性的免疫应答,达到治疗或防止疾病恶化的天然、人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品疫苗
3、的组成疫苗的组成抗原抗原免疫佐剂免疫佐剂乙肝疫苗的制备目前使用的乙肝疫苗是基因工程疫苗-重组酵母乙肝疫苗和重组CHO乙肝疫苗,其主要成分是乙肝病毒的表面抗原,即一种乙肝病毒外衣壳蛋白,并非完整病毒。这种表面抗原不含有病毒遗传物质,不具备感染性和致病性,但保留了免疫原性,即刺激机体产生保护性抗体的能力。乙肝表面抗原曾经是从乙肝病毒携带者的血液,经纯化灭活等严格工序制备而来,即血源性疫苗,该疫苗由于安全、来源和成本等原因已被淘汰(如,有引起血源性疾病的嫌疑和浪费大量的血)基因工程乙肝疫苗是采用基因工程技术生产的,即构建含有乙肝表面抗原基因的重组质粒,然后转染相应的宿主细胞,如酵母、CHO细胞,生产
4、乙肝表面抗原蛋白。利用重组酵母生产的叫重组酵母乙肝疫苗,利用CHO细胞生产的叫重组CHO乙肝疫苗,剂量为每支5微克。它们都可以用于预防所有已知亚型的乙肝病毒感,都可以放心选用。乙肝病毒病理切片目的基因的目的基因的 分离分离培养酵母细培养酵母细胞(增)胞(增)检测正确表达目的产物检测正确表达目的产物的酵母(检)的酵母(检)0.0重组酵母构建重组质粒的构重组质粒的构建(切,接)建(切,接)导入酵母细导入酵母细胞(转胞(转)转转细胞转化手段将细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞重组分子导入酵母细胞内。内。增增短时间培养转化酵短时间培养转化酵母细胞,以扩母细胞,以扩DNA重组分子。重组分子。检检检
5、检接接用用DNA连接酶将含有外连接酶将含有外源基因的源基因的DNA片段连接片段连接到质粒分子上,构成到质粒分子上,构成DNA重组分子。重组分子。根据已经测定的编码乙肝病根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列,毒表面抗原决定簇基因序列,用化学合成法直接合成目的用化学合成法直接合成目的基因。基因。用识别相同黏性末端的限制用识别相同黏性末端的限制性内切酶将外源性内切酶将外源DNA和质粒和质粒分子切开。分子切开。切切筛选和鉴定经转化处理筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞,获得外源的酵母细胞,获得外源基因高效表达的基因工基因高效表达的基因工程菌程菌菌种制备和发酵用成功构造的基因工程菌进行扩大培养,
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