一种全自动药敏系统检测念珠菌抗真菌药物敏感性的应用评价.pdf
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1、论著一种全自动药敏系统检测念珠菌抗真菌药物敏感性的应用评价田瑞卿1,2 王琦琦1 万喆1 李若瑜1 刘伟1(1.北京大学第一医院皮肤性病科,北京大学真菌和真菌病研究中心,北京 1 0 0 0 3 4;2.保定市第一医院检验科,保定 0 7 1 0 0 0)【摘要】目的 评价一种全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属对常用抗真菌药物体外敏感性的临床应用价值。方法 利用微量肉汤稀释法C L S I M 2 7-A 4和全自动真菌药敏系统检测1 0 0株念珠菌对9种抗真菌药物的敏感性,对两种方法的一致性进行分析。结果 两种方法的一致性与所检测的念珠菌属及抗真菌药物种类有关,检测白念珠菌时,卡泊芬净的基本
2、一致性为7 5%,检测光滑念珠菌时,卡泊芬净和伏立康唑的分类一致性分别为6 1.1%和6 6.7%,其他基本一致性和分类一致性为8 3%1 0 0%;两种方法测定1 0 0株念珠菌对9种抗真菌药物总的基本一致性在8 9%以上,总的分类一致性在9 1%以上。结论 全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属体外药物的敏感性与C L S I方法一致性较好,具有快速和自动的优势,在临床微生物实验室具有很好的应用价值。【关键词】念珠菌属;抗真菌药物敏感性试验;微量肉汤稀释法;全自动真菌药敏【中图分类号】R 9 7 8.5 R 3 7 9.4 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0
3、2 3)1 8-0 5 0 1-0 6A p p l i c a t i o n e v a l u a t i o n o f a n a u t o m a t i c d r u g s u s c e p t i b i l i t y s y s t e m f o r a n t i f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f C a n-d i d aT I AN R u i q i n g1,2,WANG Q i q i1,WAN Z h e1,L I R u o y u1,L I U W e i1(1.D
4、 e p a r t m e n t o f D e r m a t o l o g y,P e k i n g U n i v e r s i t y F i r s t H o s p i t a l a n d R e s e a r c h C e n t e r f o r M e d i c a l M y c o l o g y,P e k i n g U-n i v e r s i t y,B e i j i n g 1 0 0 0 3 4,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f L a b o r a t o r y,B a o d i n g
5、 NO.1 H o s p i t a l,B a o d i n g 0 7 1 0 0 0,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o e v a l u a t e t h e c l i n i c a l v a l u e o f a f u l l y a u t o m a t i c f u n g a l d r u g s u s c e p t i b i l i t y a n a l y s i s s y s t e m f o r i n v i t r o a n t i f u n g a l s u s
6、 c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f C a n d i d a t o c o mm o n a n t i f u n g a l d r u g s.M e t h o d s T h e s u s c e p t i b i l i t i e s o f 1 0 0 s t r a i n s o f C a n d i d a t o 9 a n t i f u n g a l d r u g s w e r e d e t e c t e d b y b r o t h m i c r o d i l u t i o n C L S
7、I M 2 7-A 4 a n d a u t o m a t i c f u n g a l d r u g s u s c e p t i b i l i t y s y s t e m,a n d t h e a g r e e m e n t o f t h e t w o m e t h o d s w a s a n a l y z e d.R e s u l t s T h e a g r e e m e n t o f t h e t w o m e t h o d s i s r e l a t e d t o t h e s p e c i e s o f C a n d
8、i d a a n d a n t i f u n g a l d r u g s.W h e n C a n d i d a a l b i c a n s w e r e d e t e c t e d,t h e e s s e n t i a l a g r e e m e n t o f c a s p o f u n g i n w a s 7 5%.F o r C a n d i d a g l a b r a t a,t h e c a t e g o r i c a l a g r e e m e n t o f c a s p o f u n g i n a n d v o
9、 r i c o n a z o l e w a s 6 1.1%a n d 6 6.7%,r e s p e c t i v e-l y,a n d o t h e r s w e r e 8 3%1 0 0%.T h e t o t a l e s s e n t i a l a g r e e m e n t o f 1 0 0 C a n d i d a t o 9 a n t i f u n g a l d r u g s d e t e r m i n e d b y t h e t w o m e t h o d s w a s m o r e t h a n 8 9%,a n
10、d t h e t o t a l c a t e g o r i c a l a g r e e m e n t w a s o v e r 9 1%.C o n c l u s i o n T h e s u s c e p t i b i l i t y o f a u t o m a t-i c f u n g a l d r u g s u s c e p t i b i l i t y a n a l y s i s s y s t e m f o r C a n d i d a i n v i t r o i s c o n s i s t e n t w i t h C L S
11、 I,w h i c h h a s t h e a d v a n t a g e o f r a p i d i-t y a n d a u t o m a t i o n,a n d h a s a g o o d a p p l i c a t i o n v a l u e i n c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y l a b o r a t o r y.【K e y w o r d s】C a n d i d a;a n t i f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t;b r o
12、t h m i c r o d i l u t i o n;f u l l y a u t o m a t i c f u n g a l d r u g s u s c e p t i b i l i t yC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(6):5 0 1-5 0 6作者简介:田瑞卿,女(汉族),硕士,副主任检验师.E-m a i l:t r q 1 0 2 41 6 3.c o m通信作者:刘伟,E-m a i l:l i u w e i b j m u.e d u.c n 近年来,随着肿瘤放化疗、器官移植、介入操作、糖皮质激素及广谱抗菌药物的广泛应用,侵袭
13、性真菌病的发病率和死亡率逐年升高。在侵袭性真菌感染中侵袭性念珠菌病最常见,且病死率最105 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 高1。多项研究显示念珠菌对抗真菌药物的耐药发生率呈逐年上升趋势,念珠菌的耐药问题受到人们越来越多的关注2-3。因此,对病原真菌进行体外抗真菌药物敏感试验也显得尤为重要。目前,真菌药敏试验方法以手工法或半自动的方法为主,随着真菌检出率的不断提高,临床实验室急需引入全自动的真菌药敏试验方法以提高工作效率。本研究以C L S I
14、M 2 7-A 4微量肉汤稀释法为参考方法,探讨一种全自动真菌药敏分析系统对念珠菌属体外药物敏感性的检测能力。1 材料与方法1.1 菌株来源全部受试菌株分离自临床各类标本,保藏于北京大学真菌和真菌病研究中心,包括白念珠菌4 0株、近平滑念珠菌2 0株(含2株似平滑念珠菌)、光滑念珠菌1 8株、热带念珠菌1 8株、克柔念珠菌2株、葡萄牙念珠菌1株、季也蒙念珠菌1株;质控菌株为近 平 滑 念 珠 菌AT C C 2 2 0 1 9和 克 柔 念 珠 菌AT C C 6 2 5 8。所有菌株经显色培养基传代培养进行初步鉴定,纯培养物使用布鲁克质谱仪进行准确鉴定,可信度低者或显色表型与质谱鉴定不一致的
15、菌株采用I T S区序列分析准确定种。所有菌株从-7 0 保藏冰箱取出后,在3 5 下沙堡弱琼脂斜面培养基上连续传代2次,以保证受试菌株的纯度和活力。1.2 仪器和试剂全自动药敏系统,包括全自动药敏仪、真菌药敏盘、培养液等由复星诊断科技(上海)有限公司提供;U型9 6孔药敏板购自江苏世泰实验器材有限公司;沙堡弱培养基购自江门市凯林贸易有限公司;R PM I-1 6 4 0粉为美国G i b c o公司产品;两性霉素B购自华北制药股份有限公司,其他抗真菌药物购自华中海威(北京)基因科技有限公司。1.3 微量肉汤稀释法肉汤培养基和梯度浓度药敏板的制备以及菌悬液的制备和接种均按照美国临床实验室标准化
16、协会(C L S I)M 2 7-A 4进行4。接种后的药敏板于3 5 培养箱中孵育约2 4 h,两性霉素B读取生长完全(1 0 0%)抑制的最小抑菌浓度(M I C),其他药物读取相对于阳性对照孔5 0%抑制的药物浓度。每个受试菌株进行两次重复检测,读取M I C结果时由23人共同完成。1.4 全自动真菌药敏按照复星诊断真菌药敏试剂盒的操作说明进行操作,约2 4 h后仪器自动读取M I C值并判读结果。1.5 质量控制每次试验用上述两种方法平行测试质控菌株AT C C 2 2 0 1 9和AT C C 6 2 5 8,所测结果均应在规定的M I C范围内。1.6 数据分析基本一致性(e s
17、s e n t i a l a g r e e m e n t,E A),试验方法与参考方法的M I C结果相差在两个倍比稀释度之内的样本比率5;分类一致性(c a t e g o r i c a l a-g r e e m e n t,C A),试验方法与参考方法敏感性一致的样本比率6,以2 0 2 0版C L S I文件M 5 9 3 r d e d i-t i o n和M 6 0 2 n d e d i t i o n折点和流行病学界值(e p i-d e m i o l o g i c a l c u t o f f v a l u e,E C V)作为C A分类的判断 标 准7-8。
18、极 严 重 错 误(v e r y m a j o r e r r o r,VM E):试验方法检测结果为敏感,参考方法为耐药;严重错误(m a j o r e r r o r,M E):试验方法检测结果为耐药,参考方法为敏感;一般错误(M i E):试验方法检测结果为中介,参考方法为耐药或敏感;或者参考方法的检测结果为中介,试验方法为耐药或敏感。2 结 果2.1 全自动真菌药敏与C L S I M 2 7-A 4检测念珠菌属对抗真菌药物的敏感性结果表1列出了两种方法测定白念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌和热带念珠菌对9种抗真菌药物的M I C范围,以及5 0%和9 0%菌株生长受抑制时的M
19、I C值(分别表示为M I C5 0和M I C9 0)。总的来说,全自动方法测得的M I C与C L S I方法相比,相同或偏高。在检测白念珠菌对两性霉素B,近平滑念珠菌对阿尼芬净,光滑念珠菌和热带念珠菌时对泊沙康唑时,全自动方法测定的M I C略低于微量肉汤稀释法。2.2 全自动真菌药敏与C L S I M 2 7-A 4检测念珠菌抗真菌药物敏感性的一致性评估如表2所示,对于4 0株白念珠菌而言,其中1 0株白念珠菌,全自动方法测得的M I C高于C L S I两个稀释度以上,白念珠菌的卡泊芬净基本一致性为7 5%,但根据折点判断后,分类一致性为1 0 0%。其他药物的基本一致性和分类一致
20、性均在8 5.5%以上。205 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 表1 两种方法测定9种抗真菌药物对念珠菌的最小抑菌浓度(M I C)T a b.1 T h e M I C o f 9 a n t i f u n g a l d r u g s o n C a n d i d a b y t w o m e t h o d s(g/m L)菌种(株数)抗真菌药物方法M I C范围M I C5 0M I C9 0白念珠菌(4 0株)两性霉素B全自动0
21、.0 610.50.5C L S I0.2 5111氟胞嘧啶全自动0.0 66 40.0 60.5C L S I0.0 66 40.0 60.2 5氟康唑全自动0.2 540.51C L S I0.1 280.2 51伊曲康唑全自动0.0 30.50.0 60.1 2C L S I0.0 30.50.0 60.1 2伏立康唑全自动0.0 1 60.50.0 30.0 6C L S I0.0 1 50.50.0 30.0 3泊沙康唑全自动0.0 30.2 50.0 30.0 6C L S I0.0 0 30.1 20.0 30.0 6阿尼芬净全自动0.0 1 60.50.0 60.2 5C L
22、S I0.0 1 50.1 20.0 1 50.1 2米卡芬净全自动0.0 30.0 60.0 30.0 6C L S I0.0 1 50.0 30.0 1 50.0 1 5卡泊芬净全自动0.0 30.2 50.1 20.2 5C L S I0.0 1 50.2 50.0 1 50.1 2近平滑念珠菌(2 0株)两性霉素B全自动0.2 520.51C L S I0.50.50.50.5氟胞嘧啶全自动0.0 60.1 20.0 60.0 6C L S I0.0 60.1 20.0 60.1 2氟康唑全自动0.5812C L S I0.2 580.51伊曲康唑全自动0.0 60.2 50.0 60
23、.1 2C L S I0.0 1 50.1 20.1 20.1 2伏立康唑全自动0.0 30.2 50.0 60.1 2C L S I0.0 30.1 20.0 30.0 3泊沙康唑全自动0.0 30.2 50.0 60.1 2C L S I0.0 30.2 50.0 60.0 6阿尼芬净全自动0.1 210.50.5C L S I0.2 5212米卡芬净全自动0.2 540.52C L S I0.2 5212卡泊芬净全自动0.1 210.50.5C L S I0.1 210.51光滑念珠菌(1 8株)两性霉素B全自动0.5211C L S I0.2 510.51305 中国真菌学杂志 2 0
24、 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6(续表)菌种(株数)抗真菌药物方法M I C r a n g eM I C5 0M I C9 0氟胞嘧啶全自动0.0 60.0 60.0 6C L S I0.0 30.0 60.0 60.0 6氟康唑全自动43 241 6C L S I26 441 6伊曲康唑全自动0.1 240.2 50.5C L S I0.0 610.50.5伏立康唑全自动0.1 210.2 51C L S I0.0 620.0 60.2 5泊沙康唑全自动0.1 22
25、0.2 52C L S I0.540.51阿尼芬净全自动0.0 1 60.50.1 20.2 5C L S I0.0 320.0 60.1 2米卡芬净全自动0.0 320.0 30.0 3C L S I0.0 1 540.0 1 50.0 1 5卡泊芬净全自动0.0 320.1 20.2 5C L S I0.0 680.1 20.2 5热带念珠菌(1 8株)两性霉素B全自动0.2 5111C L S I0.2 5211氟胞嘧啶全自动0.0 60.1 20.0 60.1 2C L S I0.0 30.2 50.0 60.1 2氟康唑全自动0.52 5 622 5 6C L S I0.1 26 4
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