微小RNA-129-5p和高迁移率族蛋白B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义.pdf
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1、 26 心脑血管病防治 2024 年 1 月第 24 卷第 1 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,January 2024,Vol.24,No.1微小 RNA-129-5p 和高迁移率族蛋白 B1在缺血性脑卒中患者中的表达水平及临床意义任伟曼1.靳丽丽1.夏松云2DOI:10.3969/j.issn.1009-816x.2024.01.007基金项目:河北省 2020 年度医学科学研究课题计划(20200623)作者单位:073000 定州,河北省第七人民医院神经内科1;071000 保定,陆军第八十二集团军医院2通信作者:靳丽丽,Email:【摘要】目的
2、 探讨微小 RNA-129-5p(miR-129-5p)和高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)在缺血性脑卒中(IS)患者中的表达水平及临床意义。方法 选取 2019 年 2 月至 2021 年 2 月河北省第七人民医院收治的 94 例 IS 患者为观察组,另选取 75 例健康体检者为对照组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组 32 例、中度组 43 例、重度组 19 例。根据 90 d 随访的改良 Rankin 量表评分分为预后良好组 65 例,预后不良组 29 例。检测血清 miR-129-5p、HMGB1 水平,并收集观察组临床资料。采用 Pearson
3、 相关性分析血清 miR-129-5p 和 HMGB1的关系。多因素 Logistic 回归分析 IS 患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析 miR-129-5p 和 HMGB1 对 IS 患者预后的预测价值。结果 观察组血清 miR-129-5p 和 HMGB1 水平与对照组相比差异有统计学意义(t=3.038、24.863,P 0.05)。观察组血清 miR-129-5p 水平随神经功能缺损程度的加重而降低,HMGB1 水平随之升高(F=83.466、8.423,P 0.05)。Pearson 相关性分析显示,观察组血清 miR-129-5p 和 HMGB1 水平呈负相关(
4、r=-0.406,P 0.05)。预后良好组和预后不良组的同型半胱氨酸、梗死体积、入院时 NIHSS 评分、发病到入院时间、miR-129-5p 和 HMGB1 水平间差异具有统计学意义(t=4.636、4.034、11.618、19.522、8.063、6.177,P 0.05)。ROC 曲线分析显示,miR-129-5p 和 HMGB1 水平对 IS 患者预后不良预测价值的曲线下面积分别为 0.832、0.859。多因素 Logistic 回归分析显示,患者入院时 NIHSS 评分、发病到入院时间、HMGB1、miR-129-5p 是 IS 患者预后不良的影响因素(OR=5.361、4.4
5、65、7.245、0.806,P 0.05)。结论 IS 患者血清 miR-129-5p 低水平、HMGB1 高水平与神经功能缺损程度有关,且对不良预后有一定的预测价值。【关键词】缺血性脑卒中;微小 RNA-129-5p;高迁移率族蛋白 B1临床研究Expression and clinical significance of microRNA-129-5p and high mobility group box 1 in patients with ischemic stroke Ren Weiman1,Jin Lili1,Xia Songyun2.1Department of Neurol
6、ogy,Hebei Seventh Peoples Hospital,Dingzhou 073000,China;2Army 82nd Group Military Hospital,Baoding 071000,ChinaCorresponding author:Jin Lili,Email:【Abstract】Objective To explore the expression and clinical significance of microRNA(miR)-129-5p and high mobility group box 1(HMGB1)in patients with isc
7、hemic stroke(IS).Methods Ninety-four patients with IS admitted to Hebei Seventh Peoples Hospital from February 2019 to February 2021 were selected as the observation group,and 75 healthy individuals were selected as the control group.Based on the National Institutes of Health Stroke Scale(NIHSS)scor
8、e at admission,the observation group was divided into mild(32 cases),moderate(43 cases),and severe(19 cases)groups.According to the modified Rankin Scale(mRS)score at 90 days of follow-up,the observation group was further divided into good prognosis(65 cases)and poor prognosis(29 cases)groups.Serum
9、levels of miR-129-5p and HMGB1 were measured,and clinical data of the observation group were collected.Pearson correlation 27 心脑血管病防治 2024 年 1 月第 24 卷第 1 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,January 2024,Vol.24,No.1缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是一种最常见的脑卒中类型,因脑部血管阻塞而造成脑组织缺血或缺氧,病死率和致残率高,目前临床上对于急性期时间窗患者主要采用
10、溶栓进行治疗,但部分患者的预后不良1。因此,寻找针对疾病治疗和预后的有效生物标志物有重要意义。微小 RNA(microRNA,miRNA)可与靶基因 3序列特异性结合,发挥调控基因表达的作用,在细胞增殖、分化、凋亡、血管生成和炎症过程中发挥重要作用2。miR-129-5p 是 miRNA 家族中的一员,上调miR-129-5p 水平可以减轻阿尔茨海默病大鼠的神经损伤和炎症反应3。高迁移率族蛋白 B1(high mobility group box 1,HMGB1)在真核细胞中广泛表达,是重要的炎症信号因子,而炎症反应是脑卒中后机体再次发生损伤的重要因素4。炎症反应在 IS 的发展及预后中有重要
11、作用,与继发性损伤关联,miR-129-5p和HMGB1 在急性肾损伤5、神经性疼痛6、胃癌7、支气管疾病8等多种疾病中共同发挥作用。目前miR-129-5p 和 HMGB1 在 IS 中作用的研究较少,本研究探讨 miR-129-5p 和 HMGB1 在 IS 患者中的表达及临床意义。1 资料与方法1.1 一般资料 选取河北省第七人民医院2019年2月 至2021年2月收治的94例IS患者为观察组,男53例,女 41 例,年龄 4269 岁,平均(58.576.61)岁,体质量指数(body mass index,BMI)22.0524.39 kg/m2,平均(23.182.94)kg/m2
12、。纳入标准:(1)均符合 IS的诊断标准9;(2)从发病至入院 0.05)。本研究经河北省第七人民医院伦理委员会批准,入组者均签署知情同意书。1.2 方法 收集观察组患者的性别、年龄、BMI、入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale,NIHSS)评分、发病到入院时间、饮酒史、吸烟史、糖尿病史、高血压史及冠心病史。用全自动生化分析仪(迈瑞 BS-2000M)及配套试剂检测观察组患者空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平。观察组患者入院24
13、 h内通过磁共振扫描仪(Philips lngenia 1.5 T)进行头颅磁共振成像检测,根据患者头部梗死病灶的长径、宽径和层数,通过简易多田公式计算梗死体积。1.2.1 血清标本收集 观察组患者于入院空腹 8 h 后,对照组于健康体检时,采集静脉血 45 mL。血液在室温条件下静置 30 min 后,离心(转速 3 000 r/min),离心10 min后收集上清液,置于EP管内,保存于-80。1.2.2 血清 miR-129-5p 水平检测 取血清标本,加入 Trizol 试剂(merck 公司)进行总 RNA 的提取,analysis was used to assess the re
14、lationship between serum miR-129-5p and HMGB1.Multivariate Logistic regression analysis was performed to identify factors influencing the prognosis of IS patients.Receiver operating characteristic(ROC)curve analysis was conducted to evaluate the predictive value of miR-129-5p and HMGB1 for the progn
15、osis of IS patients.Results Serum levels of miR-129-5p and HMGB1 in the observation group were significantly different from those in the control group(t=3.038,24.863;P 0.05).Serum miR-129-5p level decreased with the aggravation of severity of neurological deficits,while HMGB1 level increased(F=83.46
16、6,8.423;P 0.05).Pearson correlation analysis showed a negative correlation between serum miR-129-5p and HMGB1 in the observation group(r=-0.406,P 0.05).There were statistically significant differences in homocysteine,infarct volume,NIHSS score at admission,onset-to-admission time,miR-129-5p,and HMGB
17、1 levels between the good prognosis and poor prognosis groups(t=4.636,4.034,11.618,19.522,8.063,6.177;P 0.05).ROC curve analysis revealed that the areas under the curve of miR-129-5p and HMGB1 for predicting poor prognosis in IS patients were 0.832 and 0.859,respectively.Multivariate Logistic regres
18、sion analysis showed that NIHSS score at admission,onset-to-admission time,levels of HMGB1 and miR-129-5p were risk factors for poor prognosis of IS patients(OR=5.361,4.465,7.245,0.806;P 0.05).Conclusion Low serum miR-129-5p level and high HMGB1 level in IS patients are associated with the severity
19、of neurological deficit,and have a predictive value for poor prognosis.【Key words】Ischemic stroke;MicroRNA-129-5p;High mobility group box 1 28 心脑血管病防治 2024 年 1 月第 24 卷第 1 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,January 2024,Vol.24,No.1取符合试验标准的总 RNA,按照 RNA 逆转录试剂盒 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 实验步骤将 RNA 逆转录为 cDNA,采用 2S
20、YBR Green PCR Master Mix 试剂盒(上海联迈生物工程有限公司)进行实时荧光定量 PCR,反应条件为:95 3 min,95 30 s,60 30 s,72 30 s,共40个循环。以U6为内参,采用 2 Ct法计算受试者 miR-129-5p 的相对表达水平。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成,引物序列见表 1。表 1 引物序列基因正向引物 5-3反向引物 5-3miR-129-5pGGGGGCTTTTTGCGGTCTGGAGTGCGTGTCGTGGAGTCU6CTCGCTTCGGCAGCACAAACGCTTCACGAATTTGCGT 注:miR-129-5p:微小
21、RNA-129-5p1.2.3 血清 HMGB1 水平检测 采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),严格按照人HMGB1 ELISA试剂盒(上海隆诚生物科技有限公司)操作说明书进行。1.2.4 神经功能缺损评估 观察组神经功能缺损评估以患者入院时 NIHSS 评分为依据10,分为轻度组(20分)19例。1.2.5 近期预后判定 观察组患者通过电话、微信或门诊方式进行随访,按照改良 Rankin 量表(modified Rankin Scale,mRS)进行出院 90 d 患者病情评估,mRS 评分2 分纳入预后良好组(65 例),m
22、RS 评分 2分纳入预后不良组(29例)。1.3 统计学处理 采用 SPSS 23.0 版软件对数据进行分析,以xs 表示计量资料,两组间行独立样本t检验,三组间血清 miR-129-5p、HMGB1 水平比较采用单因素方差分析,有差异时以 SNK-q 检验进行两两比较;计数资料用例(%)表示,采用2检验。Pearson 相关性分析血清 miR-129-5p 和 HMGB1 的关系;IS 患者预后的影响因素以多因素 Logistic 回归进行分析,miR-129-5p 和 HMGB1 对 IS 患者预后的预测价值以受试者工作特征(receiver operating characteristi
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