土培和水培条件下两种党参有效成分含量的比较.pdf
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1、西 北 师 范 大 学 学 报(自然科学版)第6 0卷2 0 2 4年第2期 J o u r n a l o f N o r t h w e s t N o r m a l U n i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e)V o l.6 0 2 0 2 4 N o.2 D O I:1 0.1 6 7 8 3/j.c n k i.n w n u z.2 0 2 4.0 2.0 1 4收稿日期:2 0 2 3 1 0 2 8;修改稿收到日期:2 0 2 3 1 2 2 8基金项目:国家自然科学基金资助项目(3 1 0 6 0 0 3 3);甘肃省高校
2、产业支撑项目(2 0 2 2 C Y Z C-1 4);兰州市科技人才创新创业项目(2 0 2 3-R C-3 7)作者简介:张辉(1 9 7 3),男,甘肃天水人,副教授,博士,硕士研究生导师.主要研究方向为中草药种质保育.E m a i l:z h a n g h u i n w n u.e d u.c n土培和水培条件下两种党参有效成分含量的比较张 辉,石少明,王志奇,杨璐洁,张欣欣(西北师范大学 生命科学学院,甘肃 兰州 7 3 0 0 7 0)摘要:采用反相高效液相色谱(R P-H P L C)法测定了室内土培和水培条件下渭党和纹党中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯 3种活性成分的含量,
3、以期比较室内不同栽养方式对2种党参有效成分积累水平的影响.色谱流动相采用乙腈(A)-0.3%磷酸水溶液(B),体积流量为1 m Lm i n-1,检测波长为2 2 0 n m,柱温为3 0.结果表明,3种受测成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(R20.9 9 9 8),土培纹党中紫丁香苷、苍术内酯含量较高,分别为0.0 2 5,0.0 2 0 m gg-1;水培渭党中党参炔苷含量较高,为3.9 4 4 m gg-1.实验重复性和稳定性良好,精密度和准确性可靠.2种栽养条件下,纹党和渭党中3种活性成分含量差异显著,研究结果可为党参栽培方式的选择和优良品种的筛选提供数据参考.关键词:土培;水培;
4、纹党;渭党;H P L C;有效成分中图分类号:O 6 5 7.6 3;R 2 8 6.0 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 1-9 8 8(2 0 2 4)0 2-0 0 8 6-0 7C o n t e n t c o m p a r i s o n o f e f f e c t i v e c o m p o n e n t s f o r t w o k i n d s o fC o d o n o p s i s p i l o s u l a c u l t i v a t e d i n s o i l a n d h y d r o p o n i c s c o n d
5、 i t i o n sZ HANG H u i,S H I S h a o-m i n g,WANG Z h i-q i,YANG L u-j i e,Z HANG X i n-x i n(C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s,N o r t h w e s t N o r m a l U n i v e r s i t y,L a n z h o u 7 3 0 0 7 0,G a n s u,C h i n a)A b s t r a c t:R P-H P L C w a s a p p l i e d t o m e a s u r e
6、t h e q u a n t i t y o f s y r i n g i n,l o b e t y o l i n a n d a t r a c t y l e n o l i d e i n C o d o n o p s i s p i l o s u l a N a n n f.v a r.M o d e s t a(C p m)a n d C.p i l o s u l a(C p)u n d e r t w o c o n d i t i o n s o f s o i l c u l t u r e a n d h y d r o c u l t u r e t o a
7、n a l y z e t h e t h r e e c o m p o n e n t s d i f f e r e n c e s o f t h e t w o t a x a b e t w e e n t w o c u l t i v a t i o n m e t h o d s.T h e c h r o m a t o g r a p h y s y s t e m i n c l u d e d t h a t m o b i l e p h a s e i s a c e t o n i t r i l e(A)-0.3%p h o s p h o r i c a c
8、 i d a q u e o u s s o l u t i o n(B),t h e f l o w r a t e i s 1 m Lm i n-1,t h e d e t e c t i o n w a v e l e n g t h i s 2 2 0 n m,a n d t h e c o l u m n t e m p e r a t u r e i s 3 0.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e l i n e a r r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e t h r e e
9、 c o m p o n e n t s i s q u i t e w e l l(R20.9 9 9 8),a n d t h e c o n t e n t s o f s y r i n g i n a n d a t r a c t y l e n o l i d e i n s o i l c u l t u r e o f C p m a r e h i g h e r t h a n o t h e r s,w h i c h i s 0.0 2 5 a n d 0.0 2 0 m gg-1,r e s p e c t i v e l y.T h e h i g h e r c
10、 o n t e n t o f l o b e t y o l i n i s 3.9 4 4 m gg-1 i n h y d r o p o n i c C p.T h e e x p e r i m e n t h a s g o o d r e p e a t a b i l i t y a n d s t a b i l i t y,a s w e l l a s r e l i a b l e p r e c i s i o n a n d a c c u r a c y.T h e c o n t e n t s o f t h r e e a c t i v e i n g
11、r e d i e n t s i n C p m a n d C p a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t u n d e r t h e t w o c u l t i v a t i o n c o n d i t i o n s.T h e r e s u l t s m a y p r o v i d e d a t a r e f e r e n c e f o r t h e s e l e c t i o n o f c u l t i v a t i o n m e t h o d s a n d s e l e
12、c t i v e b r e e d i n g o f e x c e l l e n t v a r i e t i e s.K e y w o r d s:s o i l c u l t u r e;h y d r o p o n i c s;C o d o n o p s i s p i l o s u l a N a n n f.v a r.m o d e s t a;C.p i l o s u l a;H P L C;a c t i v e i n g r e d i e n t68 2 0 2 4年第2期 张 辉等:土培和水培条件下两种党参有效成分含量的比较 2 0 2 4 N
13、 o.2 C o n t e n t c o m p a r i s o n o f e f f e c t i v e c o m p o n e n t s f o r t w o k i n d s o f C o d o n o p s i s p i l o s u l a c u l t i v a t e d i n s o i l a n d h y d r o p o n i c i s c o n d i t i o n s 中 药 党 参 为 桔 梗 科 植 物 党 参C o d o n o p s i s p i l o s u l a(F r a n c h.)N a
14、 n n f.,素 花 党 参C o d o n o p s i s p i l o s u l a N a n n f.v a r.m o d e s t a(N a n n f.)L.T.S h e n和川党参C o d o n o p s i s t a n g s h e n O l i v.的干燥根1.甘肃党参占全国党参种植面积的6 0%以上,以党参为代表的陇药产业是甘肃支柱产业之一2.现甘肃地产党参主要是党参和素花党参,栽培于甘肃渭源县的党参,商品名为“渭党”3;栽培于甘肃文县的素花党参,商品名为“纹党”4.现代药理学研究表明,党参具备调节内分泌系统、抗炎、抗肿瘤、延缓衰老以及增强
15、免疫力等多重功能.党参内含丰富的化学成分,包括糖类、苷类、多炔类、生物碱类、萜类、苯丙素类、甾体类、黄酮类、木脂素类及酸类等5.众多国内外学者针对党参中的三种主要活性成分 紫丁香苷6-1 0、党参炔苷1 1-1 3、苍术内酯1 4-1 8进行了广泛而深入的研究.同时,部分学者通过化学计量学方法探寻了党参的标志性化合物,并明确了紫丁香苷1 9、党参炔苷2 0-2 1、苍术内酯2 2-2 3等可用于党参的质量评价和道地性研究.杨静等2 4比较了不同产地党参苍术内酯和党参炔苷的含量,发现苍术内酯可代表潞党的道地性,党参炔苷在不同产地也有很好的专属性特征,可作为指标性成分来评价不同产地党参的质量.胡春
16、阳等2 5以紫丁香苷为指标性成分用于鉴别纹党和白条党,研究发现紫丁香苷具有抗疲劳和增强适应性等功效2 6-2 7.已有的研究都是直接测定来源地采收党参中的活性成分,黄延盛等2 8利用H P L C法测定了不同产地党参中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯的含量,发现位于甘肃文县不同村落的纹党所含紫丁香苷含量为0.0 2 0 80.0 4 9 5 m gg-1,党参炔苷含量为0.3 1 3 60.6 6 4 4 m gg-1,苍术内酯含量为0.1 7 8 8 m gg-1;位于甘肃渭源县不同村落的渭党中3种化合物含量为(0.0 1 2 50.0 9 0 1,0.2 4 8 1 0.7 7 1 1,0.0
17、 4 1 90.0 8 8 5 m gg-1.靳贵林2 9利用H P L C法测定了不同采收时期纹党所含紫丁香苷和党参炔苷的含量,发现位于甘肃文县的纹党中紫丁香苷和党参炔苷含量随季节的变迁而变化.关琳静3 0通过对党参栽培种的植物化学比较研究发现,从山西引种移植后白条党的党参炔苷和苍术内酯等有效成分含量比原产地潞党有明显降低,而纹党的苍术内酯明显高于白条党.由此可见,田间采收党参因品种、产地、季节和栽培方式等的不同,其活性成分含量存在显著差异.为了增强党参种质创新过程中有效成分含量评价的可比性,减少外界环境条件带来的影响,本实验比较研究了室内土培和水培2种栽养方式对甘肃两种党参中紫丁香苷、党参
18、炔苷、苍术内酯等3种活性成分含量的影响.1 材料与仪器1.1 材料分别从定西市渭源县和陇南市文县采集渭党和纹党种子,实验室萌发后在同一时间使用土培和水培2种方式进行室内移栽,栽养8个月后收集党参根部,5 0 干燥2 4 h后研磨粉碎,过4 0目筛,室温密封备用.紫 丁 香 苷 对 照 品(9 8%,批 号Y 1 4 N 1 1 H 1 3 1 1 9 5)、党参炔苷对照品(9 8%,批号S 2 8 H B 1 9 6 4 4 3)购自上海源叶生物科技有限公司;苍术内酯对照品(9 8%,批号D S T D B 0 0 1 6 0 1)购自成都德思特生物技术有限公司;甲醇为色谱纯,购自山东禹王和天
19、下新材料有限公司;乙腈为色谱纯,购自天津市马克科技发展有限公司;磷酸为分析纯,购自天津市百世化工有限公司.1.2 仪器e 2 6 9 5高效液相色谱仪(美国W a t e r s公司);S i l v e r s i l C 1 8色谱柱(2 5 0 mm4.6 mm,5 m);KQ-2 5 0 D E型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);恒温鼓风干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司);P T X-F A 2 1 0 5电子天平(美国康州H Z电子有限公司).1.3 土培与水培的试验方法挑选苗期长势良好一致的纹党和渭党幼嫩植株转入土培和水培.土培的基质为营养土,其配比为:蛭石1 5%,
20、泥炭土4 0%,珍珠岩1 5%,椰糠3 0%.静止水培时先用蒸馏水冲洗根系,清洗干净的党参用固根海绵和固根器固定后置于霍格兰营养液中培养,A/B营养液E C值为2 0 0 0 m sc m-1.培养条件为温度2 02 5,湿度6 0%6 5%,光照1 6 h黑暗8 h交替进行.1.4 党参根部性状测定随机选择土培纹党、土培渭党、水培纹党和水培渭党各1 0株,测定其单株根根长、根粗、根鲜重、主根数、根侧支数以及毛细根数2 1-3 3.78西 北 师 范 大 学 学 报(自然科学版)第6 0卷 J o u r n a l o f N o r t h w e s t N o r m a l U n
21、i v e r s i t y(N a t u r a l S c i e n c e)V o l.6 0 1.5 党参中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯的含量测定方法3 4-3 61.5.1 色谱条件 色谱柱:S i l v e r s i l C 1 8柱;柱温:3 0;检测波长:2 2 0 n m;流动相:A相为乙腈,B相为0.3%磷酸水溶液;梯度洗脱见表1;流速:1 m Lm i n-1;进样量:1 0 L.表1 梯度洗脱程序T a b 1 G r a d i e n t e l u t i o n p r o g r a m时间/m i nA相/%B相/%01 09 01 02 57 5
22、3 06 04 03 51 09 04 01 09 01.5.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯适量,用7 5%甲醇溶解,分别转移至2 5 m L干燥洁净容量瓶中定容,摇匀,得到3种单一对照品溶液.适量移取各对照品溶液于同一容量瓶中,7 5%甲醇稀释定容,配制成对照品混合液.该混合液中,各对照品质量浓度分别 为:紫 丁 香 苷0.0 4 m gm L-1,党 参 炔 苷0.1 2 2 m gm L-1,苍术内酯 0.0 4 4 m gm L-1.1.5.3 供试品溶液的制备 精密称取土培纹党、水培纹党、土培渭党、水培渭党粉末材料各0.5 g,置具塞锥形瓶中,精密加
23、入7 5%甲醇水溶液2 5 m L,密塞,称 定 重 量 后,超 声 处 理2 h,隔3 0 m i n摇匀一次.处理完毕后放冷,再次称重,用7 5%甲醇溶液补重,摇匀.使用0.4 5 m有机相针式过滤器过滤,摇匀待测.1.5.4 方法学考察 将1.5.2对照品混合液逐级稀释1.5倍后分别进样1 0 L,以1.5.1的色谱条件进行分析.以峰面积(V/S)为横坐标,质量浓度(m gm L-1)为纵坐标,建立标准曲线,得回归方程.精密吸取1.5.2混合对照品溶液和1.5.3党参供试品溶液各1 0 L,以1.5.1的色谱条件进行测定,以评价系统适应性.精密称取相同处理条件下土培纹党样品6份,以1.5
24、.3的方法制备供试品溶液,以1.5.1的色谱条件分别进样,记录峰面积,考察其重复性.精密称取同一水培纹党样品6份,以1.5.3的方法制备供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,1 0,1 2 h时以1.5.1的色谱条件进样,记录峰面积,考察其稳定性.精密吸取1.5.2同一混合对照品溶液1 0 L,以1.5.1的色谱条件连续进样6次,记录峰面积,考察精密度.取土培渭党粉末0.1 g,水培纹党粉末0.1 g,精密称取6份,依法制备供试品溶液,分别精密加入各对照品适量,以1.5.1的色谱条件进样测定,并计算紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯的加样回收率.1.5.5 样品含量测定 分别取土培纹党、土培渭党、水
25、培纹党、水培渭党过筛粉末各0.5 g,以1.5.3的方法制备供试品溶液,以1.5.1的色谱条件进样测定.1.6 数据统计分析对土培与水培条件下2种党参中所含紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯含量的差异进行相关性分析,所有计算值为平均值标准偏差,图表中不同字母表示同一物质在不同栽养条件下含量的显著性差异(P0.0 5).2 结果与分析2.1 土培、水培条件下两种党参根部形态水培与土培条件下2种党参根部性状见图1所示.可以看出同一种培养方式下纹党和渭党的根部性状差异不大.但不同培养条件下,同一品种党参根部形状差异极显著.相较与水培党参,土培条件下生长的党参根部较粗、长度较短且毛细根数较少(表2).注:1
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