加味苓桂术甘汤对过敏性鼻炎大鼠的疗效及免疫调节机制的研究.pdf
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1、山西卫生健康职业学院学报2 0 2 3年第33卷第3期中医中药加味苓桂术甘汤对过敏性鼻炎大鼠的疗效及免疫调节机制的研究彭晓夏,逮晓青,弓强,王世晖,窦志芳*(山西中医药大学,山西晋中0 30 6 19)摘要目的:探讨加味苓桂术甘汤对过敏性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)大鼠的治疗作用和可能的作用机制。方法:将Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、阳性药物(氯雷他定)治疗组和中药治疗组。除正常组外,其他组大鼠采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏联合滴鼻强化致敏的方法构建AR模型。造模成功后,中药治疗组给予加味苓桂术甘汤灌胃,阳性药物治疗组给予氯雷他定生理盐水灌胃,正常组和模型组给
2、予等体积生理盐水灌胃,处理2 8 d。观察大鼠行为学变化,统计其行为学评分,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清免疫球蛋白E(IgE)、组胺的含量,以及T辅助细胞Th1/Th2相关细胞因子干扰素-(TNF-)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13和肿瘤坏死因子-(TNF-)的水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠行为学评分、血清IgE、组胺、IL-4、I L-5、I L-10、I L-13、T NF-的水平升高,TNF-和IL-2的水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,中药治疗组和阳性药物治疗组大鼠的行为学评分、IgE、组胺、IL-4、IL
3、-5、IL-10、IL-13、T NF-的水平降低,TNF-和 IL-2 的水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:加味苓桂术甘汤能够有效改善AR大鼠的症状,其作用机制可能与调节Th1/Th2细胞免疫平衡有关。关键词加味苓桂术甘汤;大鼠;过敏性鼻炎;免疫调节;辅助性T细胞中图分类号 R-33过敏性鼻炎(AllergicRhinitis,AR)又称变应性鼻炎,是个体接触过敏原后,由免疫球蛋白E(IgE)介导、多种免疫细胞和炎症因子参与的鼻腔黏膜的变态反应性疾病,属于I型变态反应性疾病 。其发病机制尚不十分明确,近年来研究显示辅助性T(T h e l p e r,T h)细胞在 AR 的发
4、病中起到重要作用,Th1/Th2细胞免疫失衡是AR发生、发展的重要因素之一2.3。目前多采用抗组胺药物和鼻内皮质类固醇药物治疗AR,虽有一定疗效,但这些药物的耐药性较强,副作用较大,复发率一直在增加。中医药对AR的防治由来已久,并且具有安全、可靠、疗效稳定、副反应少等优点,成为近年来研究的热点4。加味苓桂术甘汤常用来治疗过敏性鼻炎,疗效显著5。本研究在卵清蛋白诱导的AR模型大鼠上,观察加味苓桂术甘汤对大鼠行为学积分、血清IgE水平、组胺的分泌和Th1/Th2型细胞因子产生的影响,初步探讨加味苓桂术甘汤在防治AR中可能的作用机制。1材料与方法1.1实验动物选SPF级Wistar健康雄性大鼠6 0
5、 只,6 7 周龄,体重20020g,由北京维通力华公司提供。大鼠的饲养:每日定时清洁,饲养温度2 0 2 5,相对湿度50%7 0%,采用标准颗粒饲料饲养,自由饮水。1.2实验药物加味苓桂术甘汤方药组成:茯苓10 g、桂枝10 g、白术10g、炙甘草6 g、苍耳子5g、细辛5g。上述中药均由山西中医药大学附属第一医院药房提供。向每付药中加人10 倍量的水煎煮1.5h,收集滤液;再向药渣中加人水煎煮1.0 h,收集滤液,合并两文献标识码 B文章编号 2 0 9 6-7 56 X(2023)03-0068-03次滤液,浓缩至50 mL,4保存备用。取氯雷他定片(广东逸舒制药股份有限公司,国药准字
6、H20052214),用生理盐水配制成2g/L的药液。1.3试剂与仪器卵白蛋白OVA(美国Sigma公司),氢氧化铝(北京化工厂),生理盐水(恒宁医疗器械有限公司),IgE、组胺、干扰素(IFN-)、白细胞介素(IL)-2、I L-4、I L-5、I L-10、I L-13、肿瘤坏死因子-(T NF-)酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒(上海博士德生物有限公司)。MultiskanSkyHigh酶标仪(上海赛默飞世尔仪器有限公司),HC-2062高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。1.4方法1.4.1动物分组与模型构建选取6 0 只健康成年雄性大鼠,适应性喂养1周,随机分为正常组15
7、只和造模组45只。采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射全身致敏联合滴鼻强化致敏的方法处理造模组大鼠构建AR模型6 :首先进行全身基础致敏,取1gOVA和3gAl(OH);溶于10 0 mL生理盐水中配置成混悬液,取1mL混悬液进行大鼠腹腔注射,隔天1次,共7 次;然后进行鼻部强化致敏,从第15天开始,取0.0 5mL5%0VA混悬液滴人大鼠双侧鼻腔,1次/d,共14次。正常组大鼠基础致敏阶段给予等体积的3%Al(OH),混悬液腹腔注射,鼻部强化致敏阶段给予生理盐水双侧滴鼻。末次滴鼻30 min后观察大鼠抓鼻、打喷嚏和流鼻涕症状,统计行为学评分,具体评分标准如表1所示,若总分5分,则可判定AR模型建立
8、成功。将AR建模成功的40 只大鼠随机分为模型组13只、中药治疗组14只和阳性药物治疗组13【基金项目】山西省自然科学基金面上项目(2 0 2 2 0 30 2 12 112 15);国家自然科学基金面上项目(8 137 350 9);山西中医药大学科技创新能力培育计划“基础研究专项 项目(2 0 2 0 PY-JC(Y)-0 6)。【作者简介】彭晓夏,女,讲师,从事天然产物的结构与功能研究工作通讯作者窦志芳,女,教授,Email:68山西卫生健康职业学院学报2 0 2 3年第33卷第3期Journal of Shanxi Health Vocational College Vol.33 No
9、.3 2023只。1.4.2给药方法造模结束后,中药组大鼠给予加味苓桂术甘汤10 g/(kgd)灌胃(按照人鼠药物剂量换算公式计算给药剂量),阳性药物治疗组给予氯雷他定生理盐水1mg/(kgd)灌胃,正常组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃,1次/d,共2 8 d。1.4.3动物行为学观察向大鼠每侧鼻孔滴50 L卵清蛋白溶液,观察大鼠在3min内挠鼻、打喷嚏的次数和流鼻涕的程度,按照过敏性鼻炎反应行为的评分标准(表1)进行打分。表1过敏性鼻炎反应行为评分标准评分标准项目1分挠鼻(次/3 min)05喷嚏(个/3 min)3流沸情况流沸至鼻孔内流沸出鼻孔外1.4.4血液样本的采集将末次灌胃给药后的
10、大鼠禁食不禁水饲养2 4h后,采集血液样本。采用10 0 g/L水合氯醛腹腔注射处死大鼠,在眼底静脉丛取血,4离心(30 0 0 r/min20min),取上清液,于-8 0 储存、备用。1.4.5OVA-IgE、组胺、Th1和 Th2细胞因子的检测采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中IgE,组胺,Th1型细胞因子IL-2、干扰素-(IFN-)和 Th2型细胞因子IL-4、I L-5、IL-10、I L-13、肿瘤坏死因子-(T NF-)的水平。按照ELISA试剂盒的步骤进行检测。1.4.6统计方法采用SPSS21.0软件进行数据分析,使用OriginPro8.5软件进行作图,实验
11、数据以平均值标准偏差(MeanSD)表示。采用t检验进行组间分析,P0.05表示两组之间具有统计学差异。2结果2.1加味苓桂术甘汤对AR大鼠行为学评分的影响(见表2)表2 大鼠行为学评分比较(xs)组别治疗前症状评分正常组0.45 0.22模型组6.52 0.43 1)阳性药物治疗组6.74 0.831)中药治疗组6.48 0.761)注:1)与正常组相比,P0.05;2)与模型组相比,P0.05组别IFN-正常组8.1220.343模型组3.7250.2381)阳性对照组 6.8440.5502)中药治疗组6.6 7 8 0.6 7 12)注:1)与正常组相比,P0.05;2)与模型组相比,
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