人巨细胞病毒微小RNA UL112调控血管内皮细胞mRNA的研究.pdf
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1、 21 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2人巨细胞病毒微小 RNA UL112 调控血管内皮细胞 mRNA 的研究沈凯.邵满芬.蔡聪慧DOI:10.3969/j.issn.1009-816x.2024.02.005基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(2013LY13H020001);舟山科技计划项目(2012C13024)作者单位:316000 浙江省舟山市妇女儿童医院(舟山市第三人民医院)心血管内科通信作者:沈凯,Email:sk-【摘要】目的 探
2、讨人巨细胞病毒 RNA UL112 对人血管内皮细胞 mRNA 表达的影响。方法 构建人巨细胞病毒微小 RNA UL112 腺病毒过表达载体并使其感染人原代脐静脉内皮细胞作为转染组,感染无义空白腺病毒载体的脐静脉内皮细胞为对照组。检测人巨细胞病毒微小 RNA UL112 对脐静脉内皮细胞 mRNA 表达谱的影响。结果 与对照组相比,转染组 mRNA 存在差异表达基因 365 个,其中表达基因上调 303 个,下调 62 个,差异表达基因富集于丝裂原活化蛋白激酶通路。结论 人巨细胞病毒微小 RNA UL112 影响脐静脉内皮细胞 mRNA 的表达。【关键词】人巨细胞病毒微小 RNA UL112;
3、差异表达;丝裂原活化蛋白激酶通路流行病学调查显示,全球范围内成人巨细胞病毒感染率约为 60%90%,发展中国家尤甚,为80%100%1。人巨细胞病毒感染通常以显性感染和潜伏感染两种状态存在,在受感染的宿主中终生存在,并在某些情况下重新激活。人巨细胞病毒为双链DNA 病毒,通常以血管内皮细胞、血管平滑肌细胞作为潜伏和扩散的载体并诱发慢性免疫炎症反应,影响血管内皮的选择性通透作用及抗促凝血功能2-3。人巨细胞病毒可在人体内编码多种mRNA并生成约750 种 产物4,部分 mRNA 的表达与人体炎症反应激活、血管重塑、动脉粥样硬化和血压升高相关5。人巨细胞病毒微小 RNA UL112 在感染早期即被
4、编码表达,是唯一高表达的循环型 RNA,其表达量与感染时间成正相关6。2011 年我国学者首次提出人巨细胞病毒感染可能与原发性高血压有关,随后有学者提出其通过影响血管内皮功能而致血压上升,机制不明。本研究从分子水平分析人巨细胞病毒微小 RNA UL112 对人脐静脉内皮细胞的影响。1 材料与方法1.1 实验细胞与材料 原代人脐静脉内皮细胞购自美国 ScienCell 公司,在 ECM 培养基(美国 ScienCell公司)中培养。人巨细胞病毒微小 RNA UL112 腺病毒过表达载体购自上海生博医学生物工程科技有限公司,CCK-8 溶液购自碧云天生物技术有限公司,人胚基础研究Study of
5、human cytomegalovirus microRNA UL112 regulating vascular endothelial cell mRNA Shen Kai,Shao Manfen,Cai Conghui.Department of Cardiovascular Medicine,Zhoushan Women and Childrens Hospital(Third Peoples Hospital of Zhoushan),Zhoushan 316000,ChinaCorresponding author:Shen Kai,Email:sk-【Abstract】Object
6、ive To investigate the effect of human cytomegalovirus microRNA UL112(HCMV miR-UL112)on human vascular endothelial.Methods A HCMV miR-UL112 adenovirus overexpression vector was constructed and used to infect human primary umbilical vein endothelial cells(HUVECs)as the transfection group,while HUVECs
7、 infected with an ineffective adenovirus served as the control group.The effect of HCMV miR-UL112 on mRNA expression profile of HUVECs were detected.Results In the transfection group,there were 365 differentially expressed genes compared to the control group,with 303 upregulated genes and 62 downreg
8、ulated genes.The differentially expressed genes were enriched in the mitogen-activated protein kinase(MAPK)signaling pathway.Conclusion HCMV miR-UL112 can affect mRNA expression of HUVECs.【Key words】Human cytomegalovirus microRNA-UL112;Differential expressiom;Mitogen-activated protein kinasesignalin
9、g pathway 22 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2胎肾 293 细胞购自上海宏顺生物科技有限公司,人全基因 444 K 芯片购自美国安捷伦公司,焦炭酸二乙酯购自美国 Invitrogen 公司,总 RNA 提取剂购自美国Life technologies公司,引物、探针购自上海捷瑞公司,T载体购自美国Promega公司。MyCycler 96孔PCR仪、ChemoDoc 凝胶成像系统购自美国 Bio-Rad 公司,RT和 PCR 试剂盒、31
10、30XL 测序仪、7500 实时荧光 PCR仪购自美国 ABI公司。1.2 方法1.2.1 人巨细胞病毒微小 RNA UL112 过表达模型构建 采用 AdMax 腺病毒包装系统,将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染人胚胎肾 293 细胞,利用 Cre/loxP或FLP/frt重组酶系统实现重组,产生重组腺病毒。选取对数生长期的人脐静脉内皮细胞按 1.5105个/孔 接种于 24 孔培养板,次日将人巨细胞病毒微小 RNA UL112 过表达载体及无义空白腺病毒载体加入人脐静脉内皮细胞使之感染,作为转染组和对照组,培养48 h 后收集细胞。1.2.2 基因
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