行为试验室管理制度.doc

中 科 院 神 经 所 编号：AF-SOP-2-1
行为实验室管理制度

一、 目的：严格控制动物实验环境不受病源微生物的危害；保护动物的福利；维持环境的生物洁净度；确保动物实验环境的一致性。规范使用操作，更好发挥公共平台功能。
二 、参考文件：《实验动物管理条例》（中华人民共和国国家科学技术委员会令第588号，2011），《实验动物 环境及设施》（中华人民共和国国家标准，GB 14925-2010/XG1-2011）。
三、规章制度
1.人员管理
1.1门禁系统只对登记过的合格人员开放，动物实验人员须经培训后方可进入屏障系统工作。
1.2与动物实验无关人员以及外来人员，如需进入，须由该设施管理人员陪同进入。
1.3人员进出屏障系统请严格遵守《行为鼠房人员进出流程》。
1.4在屏障系统内，人员应注意保持安静。人员从一开始进入行为实验室的更衣室到离开行为实验室，均禁止高声交谈。
1.5 禁止在屏障系统内使用手机。
1.6在屏障系统内，人员进出时不能同时开启两扇门，并做到随手关门。
1.7 人员进行实验请严格遵守《行为实验规程》。
1.8实验人员禁止更改行为实验室内空调设置、小鼠饲养间照明开关和各种时控开关等。
1.9 实验人员不得拆卸或移动仪器设备的硬件设施，不得更改仪器设备的固定参数设置。禁止移动房间内的仪器设备，未经允许不得将外面的仪器设备带入实验室内，个人的仪器设备不得占用公用仪器设备空间。
1.10 实验人员应爱护动物实验室的仪器设备，实验时如发生仪器设备故障或损坏等意外情况，请在实验登记本上填写，并及时通知管理人员。
1.11 在屏障系统内进行实验操作，应注意无菌操作，谨防病原传播。
2、物品管理：
2.1与实验无关的物品(如手机、U盘等)，不准带入屏障系统。
2.2动物房负责统一提供笔、纸张、脱脂棉等易耗品。除此之外，个人实验所需的耐高温高压灭菌的物品，统一交给动物房，经121℃、30分钟的高温高压灭菌处理，并确认灭菌指示纸达到安全状态后，才可进入行为室内。
2.3不耐高温高压灭菌的物品，如果可以浸泡处理的，须将物品交给工作人员，在指定消毒液中浸泡半个小时后，方可进入行为室。如不能浸泡处理的，须将物体表面用消毒液擦拭干净，并用消毒液喷雾消毒，放在传递窗中紫外灯照射30分钟后，从传递窗内侧带入屏障系统。
2.4更换下来的笼具、饮水瓶等物品放到传递窗，关好传递窗的门，人员出去后，从外面打开传递窗，取出物品，放到清洗间内。
2.5使用过的废弃针头、刀片等尖锐物体请放到利器盒内，针筒请扔到普通垃圾筒中，由动物房工作人员统一处理，严禁随意丢弃！
3、实验动物管理：
3.1进行行为实验的小鼠必须是通过神经所动物房定购的，或者来自神经所屏障系统动物房，禁止将其他来源的小鼠带入行为室。
3.2未经检疫的小鼠或者清洁级以下的小鼠不得进入六楼行为实验室内。
3.3不得将大鼠或其他实验动物带入六楼行为实验室内。
3.4实验动物传递为单向传递（如下图所示）：
屏障系统
隔离1周
动物房购买的小鼠

行为
实验室
普通级
鼠房

屏障系统
内小鼠

其他实验处理或者安乐死

3.5禁止将行为实验室的小鼠再放回屏障系统动物房内饲养，已经拿出行为室的动物严禁再次返回；
3.6实验人员应经常（每周不少于2次）查看自己的实验小鼠。
3.7 每笼动物数不得超过5只，对于挂红牌的笼盒必须及时分笼，避免影响动物健康；
3.8不准虐待动物；不准在行为实验室内处死动物。
3.9工作人员或实验人员如发现有动物死亡时，应立即取出动物尸体，用塑料袋包装，在标签牌及动物死亡记录表中登记动物死亡数、日期，并及时更换该鼠笼、笼盖、饲料及饮水瓶，最后离开时将动物尸体一并带出；
3.9逃逸鼠的处理：
取放小鼠要小心，用完后一定要将盖子盖紧，不要留有缝隙，以免小鼠逃逸。工作人员或实验人员一旦发现逃逸鼠，应立即处死。
3.10动物尸体用塑料袋包装后放入指定冰柜，集中焚烧处理。
3.11实验结束后小鼠的处理：
行为实验结束后，请及时将小鼠移出行为实验室，并完成行为实验使用申请表。
如连续四周没有进行过任何实验的小鼠，并未作说明的，工作人员有权对小鼠做出处理。
动物行为平台内的小鼠房是专门用来暂时放置即将进行行为实验小鼠的场所，禁止用于长期饲养或繁殖小鼠。每次实验后，实验者应该尽快对小鼠房进行清理（例如：不应该将鼠笼放在地上）。对于某些实验者在动物行为平台小鼠房内繁殖小鼠的现象，一经发现，将进行通报批评，并且取消2个月的动物行为平台使用资格。
4、行为实验预约管理
4.1严格执行预约制度，每次实验前必须提前登陆中科院预约系统进行预约。
4.2提前一周预约。如果将要进行对动物年龄有严格要求的实验，提前两周预约。
4.3没有预约禁止进行实验！如果你没有提前预约，但是正好当天临时要做实验，即使房间是空闲的，在实验开始前也一定要在网上预约登记，以免发生时间冲突。
4.4实行优先权制度: 每次所预约的时间不得超过10天。10天后的时间，如果无人预约，则可以继续预约。如果10天后有其他人预约，则其他人有优先权。
4.5预约时间超过10天的需要提前跟工作人员申请，工作人员根据实验安排情况安排实验时间。
4.6 如果单个实验室占用时间很长，其他人员可根据需求申请更改。
4.7实验计划有变动时，请及时在网上更改预约时间。
4.8严格按照预约时间进行实验。
4.9对于预约后不用（网上预约记录和实验登记不符合），或者没有预约就进行实验者，一经发现，动物管理委员会将对其进行通报批评，并且取消其预约权力2个月。

行为实验室人员进出流程

1. 人员进行为室流程：
将外套挂在六楼大厅衣架上→签写人员进入动物设施通用登记表 / 实验动物领用登记表 → 门禁刷卡→ 将自己的鞋放在门口赤脚进入更衣间→戴手套→戴口罩→打开一套无菌服→将无菌服袋子放在架子底层的笼子内→穿戴无菌服上衣→将头发包裹在无菌服帽子内→穿戴裤子→将上衣收进裤腰内，并将裤子上的带子收紧→穿鞋套→75%乙醇喷雾净手→打开风淋室门→启动按钮→关闭进口门→全身转动风淋30秒→打开出口门进入工作走廊→右转到出口处更换行为室内拖鞋→开始工作或实验。

2. 人员离开行为室流程：
实验/饲养工作完毕后整理工作台面 →打扫实验室内卫生，保持清洁→关闭实验室内照明（严禁关闭小鼠饲养间照明开关）→关闭房间门→将实验废弃物放至传递窗内→将传递窗关好→将拖鞋放回鞋架上→进入出口间→关闭内走廊门→按出口开关→从出口离开→将废弃饲养笼具放至清洗间→将更换下的无菌服放在指定收集箱内，手套、口罩等物品放入垃圾桶内 → 穿好自己的鞋离开动物房；

行为实验流程
1.开始实验前需填写《行为实验室使用申请表》进行登记。
2. 网上预约实验。
3. 提前两周从公司订购动物放至六楼屏障系统内，一周检疫合格后将动物转移至行为实验室内；或提前一周将屏障系统内动物转移至行为实验室内，转移方法请参照《行为室实验动物转移规程》。
4. 将动物在行为室内饲养三天以上再开始行为实验。
5. 实验开始前将实验动物转移至实验间适应至少半个小时。
6. 严格按照预约时间段开始实验并填写实验记录。
7.实验开始前在每个房间门口的登记本上登记，并将门上的牌子翻至 实验中 请勿进入， 结束时间一开始不要填写，请结束时再填写，以便大家了解当时实验室的实时使用状态。
8. 根据仪器使用说明进行实验。
9. 实验人员在实验结束后应立即关闭仪器电源，随后再清除仪器内外各种实验污垢，并按照要求对仪器进行清洗消毒，谨防病原传播，并延长仪器使用寿命。
10.清理实验台及地面，将垃圾带出房间。
11. 关闭实验房间照明，关闭房门，将牌子翻至 实验结束。 
12. 将实验小鼠放回饲养间原位。 
13. 实验数据请放至桌面animal>公共使用里面，然后到神经楼517自带U盘将数据拷走，禁止将U盘带入屏障系统内。

行为实验人员操作规程

1. 超净台使用规程：
打开电源 → 75%酒精喷雾工作台面 → 无菌操作 → 结束后消毒液喷雾并擦拭台面、整理相应物品 → 关闭电源；
2. EVC使用规程：
2.1取下的笼盒必须在超净台内完成实验操作，严禁在地面上操
2.2结束后将笼盒放回原位并插紧，检查笼盒位置防止动物窒息死亡；
2.3每笼动物数不得超过5只，对于挂红牌的笼盒必须及时分笼，避免影响动物健康；
2.4禁止在EVC及普通笼盒上用记号笔书写信息，这样在更换笼盒后容易造成信息误导，而且请统一使用标签卡片；
2.5动物标签卡片只能保留一张，严禁多张叠放避免混淆；
2.6饲养室超净台顶部严禁堆放各种物品。
3. 动物标签的使用规程：
3.1标签卡槽内只允许摆放最新的标签，保证每盒一张避免混淆；
3.2每个实验笼的卡片上请填写实验小鼠的名称、数量、日期；使用者姓名的全称、使用者所在课题组组长姓名的中文全称； 需要特殊饲养要求的，请将要求写在另一块卡片上，挂在笼子上。
3.3转基因动物的标签信息按照命名要求规范书写；
4. 传递窗使用规程：
4.1任何物品进入传递窗前必须用消毒液表面喷雾；
4.2严禁传递密封的盒子或容器，如一定要使用必须先喷雾消毒再完全打开后放入传递窗紫外消毒；
4.3由于紫外灯灭菌效果局限，各组将实验记录本上的重要信息写在纸上再通过传递窗；
4.4动物传递紫外照射时间15分钟，其余物品一律30分钟；
4.5依据传递窗内放置的时钟算好灭菌时间，并严格按物品内容填写传递窗使用登记表；
5. 动物安乐死流程：
将待处理动物放入容器内并盖紧 → 打开CO2钢瓶旋钮约30秒 （小鼠），60秒（大鼠） → 观察并确认动物死亡状态 → 关闭钢瓶旋钮打开笼盖取出动物尸体 → 专用垃圾袋打包后放入指定冰柜中；
注意事项：禁止旋拧压力表上已经设置好的旋钮；

使用者应认真遵守以上规则，如发现有违规操作者，第一次给本人及研究组组长发信警告，并取消预约权利一周，第二次交动物管理委员会警告批评，并取消预约权利两周，第三次全所通报批评，并取消预约权利两个月。
中科院神经科学研究所
二〇一二年三月

行为鼠房饲养规程
1. 将EVC笼盒在超净台内打开→使用消毒好的镊子轻轻抓取小鼠→将小鼠轻轻放至新的EVC笼盒内完成更换。
2. 根据饲养笼位数量制定换笼、添水、加料、消毒等工作时间，每周更换垫料、水瓶一次。
3. 禁止更改每笼小鼠的更换垫料时间。
4. 工作时请尽量轻拿轻放，减少噪音产生。
5. 每日工作结束后用消毒液擦拭架子表面、桌面及拖擦饲养室地面、公共走廊及出入口，喷雾消毒并做好工作记录；
6. 每周四上午8：00-10:00对整个屏障系统喷雾消毒，并用消毒液拖擦墙面、门缝、天花板和高效出风口，各房间回风口过滤网用消毒液清洗干净；
7. 两周更换食槽、笼盖一次，两周清理EVC回风口一次。
8. 更换的笼盖、笼盒如有多余必须归还到饲养室存放架上，禁止随手丢在超净台内或饲养室地面上；
9. 根据动物数适量添加饲料，防止添加过多影响饲料品质和笼盒内环境，怀孕母鼠可适量投放葵瓜子、大麦、鸡蛋等增加营养；
10. 纯水若少于饮水瓶容量的1/3时需更换，发现漏水瓶及时更换；
11. 损坏笼具请及时处理。
12.笼盒的清洗以四角不留污垢为标准，晾干后装填垫料待高压；
13.每笼盒添加垫料一碗，结束后必须将储存箱盖好；

行为室实验动物转移规程

屏障系统内小鼠转移到行为实验室方法
在屏障系统内将小鼠IVC笼盒放入传递窗（禁止打开笼盖），人员出屏障系统取出笼盒再放至行为实验室传递窗内，消毒液喷雾笼盒表面，紫外线照射15分钟后，在实验室内将笼盖打开，将小鼠放入预先准备好的笼盒内。

注：
EVC小鼠饲养间照明程序为： 早上5:00-下午5:00 照明
下午5:00-早上5:00 黑暗
饲养一房间（EVC）垫料更换表： 每周一上午8:00-10:00 1号笼架
每周二上午8:00-10:00 2号笼架
饲养二房间（平板架）垫料更换表： 每周二上午10:00-11:00

每周四上午8：00-10：00消毒时间，请大家安排实验时避开此时段。

从公司购买的小鼠需要先放到神经楼6楼IVC鼠房隔离一周，并抽取2%的小鼠进行检疫，检疫合格后才能转移至行为实验室。

因此请在实验开始前两周订购SPF级动物，并且订购时请多订购2%的动物用于检疫。
Behavior Lab
Room 7
Room 1
Room 6
Animal Room 1
entrance
air shower
entrance
1m
exit
door
Transfer window

Room 3
Room 2
Room 4
Room 5
Surgery
Room 2
2
1
Animal Room 2

Room 1： Social Behavior; Novel Object Recognition; Locomotion
Room 2： Fear Conditioning; Prepulse Inhibition of startle (PPI), Fear-potentiated startle (FPS); Passive and Active Avoidance
Room 3： Conditioned Place Preference； Tail Flick；Von Frey Hairs； Hargreaves Test； Formalin Test; Footprint Pattern; Hot Cold Plate;
Room 4： Water Maze; Rotarod; Von Frey Hairs；
Room 5： Open Field; Forced Swimming Test; Tail Suspention Test; Light-Dark Exploration; Elevated Plus Maze; Novelty Suppressed Feeding Test; Balance- Beam Test ;
Room 6：Tube Test
Room 7: EEG; Epilepsya (Kindling); 24h Home Cage Video Recording
Surgery Room
Animal Room 1: 200 cages
Animal Room 2: 40 cages