培养基验收作业标准指导书删减版.doc
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1、培养基质量控制作业指导书1、目标:为加强我微生物试验室工作管理,确保试验室检测质量,特制订此作业指导书;2、范围:本规范适适用于试验室微生物检测中所使用培养基质量控制。3、职责:3.1 检验人员:根据本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制,确保培养基符合相关标准要求。3.2 科室责任人:负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。4、控制方法:41培养基购置和验收4.1.1 培养基购置试剂管理员在接到同意采购信息后,从合格供给商中选择厂商采购,同时要求厂商提供每批培养基批号、使用前pH值、储藏信息、使用期、性能评价统计(包含测试菌株、技术数据清单、质控证书及必需安全危害数据)。4.1.
2、2 培养基验收购置培养基到货后,由试剂管理员和微生物检测人员共同查对生产企业提供资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。同时应填写“培养基验收检验统计单”验收符合要求后,交由检测人员接收保管,填写培养基入库统计和建立试剂台帐。4 2培养基储存干粉培养基应保留在阴凉干燥处,要避免阳光直射;开瓶后干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在使用期或6个月内用完。应每个月对储存中培养基进行常规检验,如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物感官检验,假如培养基发生结块、颜色异常和其它变质迹象就不能再使用。开封脱水培养基,每次使用前应对其质量进行检验,经过粉末流动性、均匀性、结块情况和色泽改变
3、等判定培养基质量改变。若发觉培养基受潮或物理性状发生显著改变则不应再使用。即用性培养基根据产品标识要求进行储存。4 3培养基使用4.3.1 配制培养基用水和玻璃器皿培养基制备用水应使用电阻率大于30万cm蒸馏水或和其同质水,每七天检测电阻率,每三个月检测一次重金属离子含量。制备培养基所用玻璃器皿(如吸管、试管、烧杯等)新玻璃器皿(首次使用)和再次使用玻璃器皿按要求方法洗涤、干燥 4.3.2 称量 称量时要用专用角匙,避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸潮,如房间环境湿度较大时,应提升称量速度,完成后立即盖紧瓶盖。4.3.3 复水 复水时应注意以下事项:a)不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入
4、培养基中,影响微生物生长;b)容器大小需大于复水后培养基总体积2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;c)加热培养基时一定要进行搅拌,尤其是琼脂类培养基;d)为避免烧焦和沸腾溢出,对于少许培养基最好使用沸水浴进行加热;e)含有琼脂粉培养基,在加热溶解之前能够浸泡数分钟; f)对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,最多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完培养基应弃去;g)烧糊培养基营养物质被破坏,并可产生有毒物质,如发觉焦化,或未溶解均匀前培养基有溢出,该培养基即不能使用,应重新制备。4.3.4 灭菌 培养基采取高压蒸汽灭菌(湿热灭菌),通常是12115min,含糖或特
5、殊培养基,根据国家标准或生产商提供说明灭菌。已配制好培养基必需在15分钟内灭菌,避免微生物生长繁殖而消耗养分,改变培养基酸碱度。为避免高温破坏培养基营养成份,降低琼脂凝胶强度,必需严格控制灭菌温度和时间,不可反复灭菌。4.3.5 pH测定 在首次使用每批培养基时,均需随同检测配制一个测试培养基,在灭菌或消毒后应在25温度下采取精密PH 试纸测试PH值,并判定是否符合要求;使用过程中,假如需要调整培养基pH,应用1mol/LNaOH或lmol/LHCL调整,注意不可反复调pH,不然会影响培养基渗透压。 4.3.6 配制好培养基标识和保留 灭菌以后培养基应该快速冷却至所需温度,避免长时间保留在灭菌
6、锅内,造成过分灭菌,影响培养基营养成份或选择性效果。同时填写配制统计。内容:名称、配制量、配方(比)、操作中关键参数(时间、压力、温度)、配制日期、配制者、截止使用日期。在每个已灭菌培养基容器外做好标识,注明名称、配制日期、使用期限和配制人。培养基保留注意事项:1)环境条件:多种培养基均应在洁净一般冰箱内保留,以2-8左右为宜,不得冻结。2)保留时限: 基础培养基应在30天内用完。判别培养基应在21天内用完。选择性分离判别培养基制成平板后当日用完,置保鲜膜(袋)密闭保留期限可延长至一周。从外单位购置培养基保留时限根据产品标注时限实施.44培养基批号管理培养基批号由6位阿拉伯数字组成,批号为年、
7、月、日,各取2位,年份取后2位,月和日不足2位时,分别在数字前加0,表明是本日配制批号。如6月4日配制培养基,批号为040604。 4.5质量检验购置同一批次培养基其质量检验应能经过无菌检验(制备好培养基经3035培养48小时,真菌培养基经2025培养72小时候后,应无菌生长)、新购不一样批次商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,经检验合格该批次培养基方准许使用,不然不准使用,做好检验统计。成品培养培养基质量控制应包含物理指标和微生物指标测试,依据测试结果立即填写“试验室培养基质量控制性能测试统计及评定汇报4.5 培养基性能测试 新购不一样批次商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,包含
8、物理指标和微生物指标测试,依据测试结果立即填写“试验室培养基质量控制性能测试统计及评定汇报,菌株选择参考SN/T 1538.2-培养基制备指南 第2部分:培养基性能测试实用指南。 451物理指标控制1) 测试2025pH值2)琼脂层厚度;色泽;透明度和(或)是否存在肉眼可见杂质;452微生物污染控制从每批制备好培养基中选择最少一个(或1%)平板或试管,置于35-37或按特定标准中要求温度培养48h应无菌生长,真菌培养基经2025培养72小时候后,应无菌生长。 453微生物学指标控制可依据要求选择定量方法、半定量方法或定性方法(详见表1-表)对培养基性能进行测试,具体操作方法以下:(1)生长率将
9、适量测试菌株工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中,每种培养基上菌株生长率应达要求最低限值。1)定量方法生长率PR计算: PR = NS/NONS:从一个或多个待测培养基平板上得到菌落总数。N0:从一个或多个要求参考培养基平板上取得菌落总数(该菌落总数应100cfu )。要求:非选择性培养基上目标菌生长率最低应为0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌生长率最低应为0.1;每平板(或每试管)接种水平为10CFU100CFU。2) 半定量方法半定量方法采取生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分总和即为生长指数G,G值不应超出标准要求许可范围。3) 定性方法定性方法采
10、取划线法观察。选择性将浓度为104CFU/mL106CFU/mL非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中,培养基选择性应达成要求值。定量方法选择因子SF: SF = DO - DSDO:能在参考培养基上生长最少10个菌落最高稀释度DS:能在测试培养基上显示生长最高稀释度 要求:非目标菌在选择性培养基上SF最少为2 ;半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制。生理生化特征(选择性和特异性)要求培养基基础特征,使用一套合适测试菌株对培养基上目标菌生理生化特征(菌落形态、大小等)和非目标菌被抑制程度进行测试。(2)性能评价和结果解释根据要求得到全部测试菌株性能均符合要求,则该批培养基
11、品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合要求,则该批培养基可被接收。表1 计数用选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应Baird-ParkerS生长率3724-48h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR0.5黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外有透明带选择性3748h大肠杆菌ATCC25922/8739定性全部抑制特异性3724-48h表皮葡萄球菌ATCC12228定性黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外无透明带MYPS生长率3024-48h腊样芽胞杆菌ATCC11778TSA定量PR0.7具沉淀带粉色菌落选择性3748h大肠杆菌ATCC2
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