沃森《基因的分子生物学》与朱玉贤《现代分子生物学》要点合并.doc
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1、(完整word)沃森基因的分子生物学与朱玉贤现代分子生物学要点合并原核真核DNA结构1. 双链,双螺旋(H键,碱基堆积力)2. 碱基互补配对,含T3. 碱基可以外翻进入E的催化部位4. 多为右手螺旋,表面形成大小沟。大沟是Pro结合为点,有丰富化学信息,小沟无此作用5. 加热,极端pH,有机溶剂处理可以变性,只留有一级结构,发生增色效应(吸收峰为260nm,1/2Max处温度为Tm),适当条件下复性. DNA为遗传物质实验1. 肺炎双球杆菌转化实验:将灭火加热的S型菌与R菌共培养,注射入小鼠体内,小鼠死亡,并在其体内分离出有活性的S型菌,后又有实验证明S菌提取物亦有致病性,猜测菌中有转化子可以
2、引起转化。Avery使用专一性E类分别降解DNA,pro,RNA,糖等,发现仅DNA被特异性处理的实验组无转化力2. T2噬菌体标记实验:Hershey分别用32P和35S标记秦代噬菌体的pro和核酸。感染E。coil并经历1-2个周期后,取大肠杆菌培养液高速离心,检测放射性发现:大部分的35S,32P分别位于上清液和底部沉淀。且子代噬菌体中检测出3035P而不足1%32S。3. 烟草TMV重建:TMV1与TMV2的RNA互换,感染烟草叶,发现病斑类型与RNA有关,与蛋白壳无关,说明RNA也是遗传物质(自设计实验:实验组-含抗卡那霉素的F因子转导入感态E.coil中,对照组加入不含致育因子的F
3、因子,将对照组与实验组一起置于含卡那霉素的培养基中培养.结果实验组形成菌落,对照组则没有)DNA拓扑结构连环数=扭转数+缠绕数核小体引进负超螺旋拓扑异构E(I,II)RNA结构1. 含U,单链2. 易折叠成局部双螺旋,形成发夹,茎环,可G:U配对,不适合结合pro3. 可形成复杂的三级结构4. 可以使类RNA功能1. 在某些病毒中,RNA为遗传物质2. mRNA为基因到pro的媒介3. rRNA作为核糖体的一部分是pro合成场所4. tRNA是密码子与Aa间的适配器5. snRNA(小核RNA)是剪接体的一部分,介导mRNA的剪接6. sRNA(反义RNA)包括siRNA和miRNA,通过与m
4、RNA序列互补参与基因沉默7. 有些有E的作用,如RNaseP,介导tRNA剪接8. guideRNA:RNA编辑时指导U的插入与删除9. tmRNA:回收核糖体,除去由此产生的不完全pro10. scRNA(胞质容纳):如信号颗粒中7sRNA11. snoRNA(核仁小RNA):rRNA的甲基化修饰12. 端粒RNA:真核端粒复制的模板染色体形状环状线状染色体特征1. 结构稳定2.能自我复制3.指导pro合成4.可遗传染色体构成无核小体等结构 可能有超螺旋 DNA 组pro 核小体 pro 非组pro HMG DNA结合pro +11bpDNA核小体 核心 2+2+2() 1.8圈146bp
5、DNA染色体压缩核小体念珠状染色质丝-突环玫瑰花结螺线圈染色单体染色体调控 核小体重塑(DNA滑动,从一个 核小体 DNA完整转移到另一个上)修饰 增加肽链末端基团(组pro密码) 核小体定位(被特殊的DNA结合pro或序列限定)甲基化:抑制或增强基因表达乙酰化:提高表达水平磷酸化:募集蛋白复合体到染色质(1和3共同增加DNA活性)基因组1. 结构简练(仅有一个)2. 转录产物多为多顺反子mRNA3. 有重叠基因4. 不与大量pro结合1. 基因组庞大(有多个染色体)2. 存在大量重复序列3. 大部分为非编码序列,含断裂基因,有内含子4. 与大量组pro,非组pro结合5. 转录产物多为单顺反
6、子mRNA6. 存在大量顺式作用元件7. 存在大量DNA多态性8. 有端粒结构DNA序列1.不重复序列2.中度重复序列(rRNA,tRNA等的)3。高度重复序列(卫星DNA)复性动力学可以分类,与基因组复杂性呈正比.C值:单倍体基因组DNA的总量N值:单倍体基因组DNA的数目C值反常:真核生物中C值一般随着生物进化而增加,但某些两栖类的C值比哺乳类还大N值反常:真核生物中N值不与进化程度呈正比的现象基因密度:复杂度高的生物基因密度低复制比较1. 遗传方式相同:均为半保留,半不连续复制2. 都需要多种pro和E的协同参与,都涉及到拓扑异构E,解璇E,单链结合pro,引物合成E,DNA聚合E,连接
7、E等3. 都是从固定点开始以等速双向复制4. 均合成RNA引物1. 每条染色体仅一个起点2. 可连续开始新的复制,一个复制单元可有多复制叉3. 整个细胞周期均可进行4. 起始点为OriC(大肠杆菌)5. 叉速快6. 聚合酶少,以III为主1. 可有多个起点2. 一轮结束前不能开始另一轮,一个复制单元单复制叉3. 只在S期进行4. 起始点为自主复制序列ARS(酵母)5. 叉速慢6. 聚合酶多,有-的切换复制分类环状双链:1. 型:大肠杆菌,双向2. 滚环形:噬菌体,单向3. D环型:线、叶中,单向线性DNA:双向,复制叉处成眼状复制调控复制叉的多少1. 周期水平:期2. 染色体水平:决定染色体上
8、复制起始顺序3. 复制子水平:决定复制与否DNA polPol IV I:生物活性低,有外切E活性 III:主要复制EPol 参与复制引发修复线粒体复制主要复制(切换)修复滑动夹:与pol结合,使其不与DNA分离,大大加深其延长能力滑动夹装载器:催化滑动夹安置在DNA的引物模板接头上复制叉相关pro(拓扑异构E:解开缠绕的超螺旋)解璇E:结合单链单链结合pro:SSB,协同结合,保护单链引物合成E:合成RNA引物,需引发体护送DNA聚合E连接E:链接线段DNA片段间隙(RNaseH:去除RNA引物)DNA复制过程起始起始子pro识别复制器,募集DNA解旋E解链形成复制叉,同多种pro和滑动夹及
9、滑动夹装载器形成复制体,产生DNA单链区最为模板周期中起始多次。复制调节集中在DnaA起始pro对DNA的识别上周期中只起始一次。复制调节集中在解旋E对DNA的识别上延伸:解旋E沿方向移动,分为前导链与后滞链,前导链连续合成,后滞链有冈崎片段的合成终止需拓扑异构E解链端粒问题:端粒E以RNA为模板,不需要引物,逆转录合成端粒DNA,能防止染色体的重组与末端降解E作用,维持染色体稳定复制校正1. 力学校正:DNA E监视下引入的核苷酸形成正确配对的能力,只有经正确碱基配对的核苷酸的端在pol催化下才能形成二酯键2. 核酸外切E校正:当pol引入错误核酸到DNA端时,pol催化速率下降,与pol活
10、性中心亲和力下降,与核酸外切E活性中心亲和力增强,端进入外切E活性中心,错误NTP被切除,正确配对的DNA又进入pol活性中心继续延长3. 错配修复系统(复制完成后):MutS包围着含有扭结的错配DNA。MutS募集MutL和MutH,并由MutS的ATP E活性催化ATP水解,MutH是一种核酸内切E,能在DNA上错配位置上产生一个切口。紧接着,一个外切核酸E消化切口链,向着错配方向移动。最后,产生的单链缺口由DNA聚合E填补从而改正错配。意义:保证DNA作为遗传物质所需的稳定性和极高的保真度。而RNA聚合E没有校正功能.DNA损伤1. 细胞内源性损伤:DNA复制错误;自发损伤包括碱基互变异
11、构,碱基脱氨基(CU,AI)和碱基丢失等;氧化代谢副产物如活性氧物质的攻击等;2. 环境中的损伤因素:1)辐射(含紫外线,X射线)产生胸腺嘧啶二聚体;2)化学致癌物(烷化剂,碱基类似物);3)生物因素:RNA,DNA病毒插入基因引起突变突变类型1. 碱基置换突变2. 移码突变3. 缺失突变4. 插入突变根据突变产生影响分类:1. 同义突变2. 错义突变3. 无义突变4. 终止密码子突变损伤修复1. DNA损伤的直接修复:光激活作用修复紫外线辐射引起的嘧啶二聚体2. 碱基切除修复:糖苷键断裂除去受损碱基,脱碱基戊糖从DNA骨架上去除。DNA聚合E和DNA连接酶修复受损链3. 核苷酸切除修复:在受
12、损两侧切除DNA链,最后由DNA聚合E与DNA链接E修复受损链4. 重组修复:重组修复E通过从未受损的同源DNA链中找回序列信息来修复DNA断裂(真核)5. 非同源末端连接:DSB可以通过直接与断裂末端相连而修复6. 与转录相偶联的DNA修复:当RNA聚合E转录时遇到受损DNA链时,转录E受阻并停止转录,招募核酸切除修复E修复受损位置7. 移损DNA合成:复制时遇到损伤如TT,DNA聚合EIII与其滑动夹一起从DNA链上脱离下来,并由移损聚合E取代,越过TT损伤继续合成,然后换回聚合EIII继续合成。8. SOS修复:差错倾向性修复,准确性差,只在大规模受损时发生分子水平上的同源重组(同源、大
13、范围、对等)发生地点:姐妹染色单体之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合作用:1.修复DSB 2。促进遗传物质交换3。保证染色体减分时正确配对(真)三阶段:前联会体阶段、联会体形成、holliday结构的拆分关键步骤:1. 两个同源DNA分子的联会2. 引入DNA断裂3. 在两条重组DNA分子之间,形成碱基互补的段片段起始区(链入侵)4. 链入侵之后两个DNA分子相互交叉的DNA链连接在一起(重组中间体,分支移位)5. Holliday联结体的断裂(拆分)Pro机器:RecBCD结合断裂且有chi位点的DNA,单链chi处停止,另条继续水解,形成单链DNA,RecA
14、组装于形成单链促进链入侵(在recA蛋白丝里简历新的配对DNA,共三条DNA单链)RuvAB复合体特异性识别holiday联结体并促进分支移位,RuvC剪切位于holliday联结体的特定DNA链从而结束重组。Eg。细菌的转化、接合、转导均为同源重组1)转化、接合为ssDNA与宿主双链间重组,形成异源双链区,是否成功看修复结果2)转导为dsDNA与双链间重组,偶次交换才成功Pro机器: 原 真引入链断裂 无 spo11 HO产生入侵单链 RecBCD MRX联会及链入侵 RecA Rad51,Dcm1分支移位 RuvAB 未知拆分holliday RuvC 未知遗传结果:无论何种序列,只要有足
15、够相似区域,就可以发生在任意两个DNA区间。可引起基因转变,修复。位点特异性重组(CSSR)(同源、小范围、不对等)发生地点:两段特定序列之间,小范围同源序列的联会,但两个DNA分子间并不进行对等的交换,DNA不丢失不合成.效应:1. 特定位点DNA片段的插入2. DNA片段的缺失3. DNA片段的倒位Eg.噬菌体的溶源与激活异常重组(非同源)Eg.复制性转座,只需依赖转座区DNA复制和转座有关的E转座发生地点:特定序列和非特定序列之间,不需要交换染色体片段.作用:1. 引起插入突变,染色体畸变(基因的倒位与缺失,移动与重排)2. 可形成操纵子表达结构,产生新的生物学功能基因和pro3. 调节
16、基因表达(上,下)4. 标记后作为探针分离未知产物基因5. 作为基因工程载体分类:1. DNA转座子两端为反向重复序列,是转座E识别和切除的位点,还含有编码转座E的基因,和赋予宿主特殊遗传性的基因。机制:1.复制型2。非复制型(普通型-断裂需修复,保守型断裂自动连接)2. 类病毒反转录转座子(包括反转录病毒)有长末端重复序列LTR,亦有末端反向重复序列并嵌在LTR中,还含有编码反转录E与整合E的基因。机制:通过RNA中间体进行转座,然后逆转录E以tRNA为引物,反转录出第一条cDNA单链.RnasH降解模板链RNA,在降解时产生第二条cDNA的引物.整个过程有两次引物合成,两次单连交换,以保证
17、反转录出完整的cDNA转座子,最后在整合E辅助下整合进靶位点。3. 聚腺苷酸反转录转座子无末端反向重复序列,两端序列含有完全不同成分,一端称为URT,一端为-URT,带有一串叫聚A序列的A-T碱基对,该转座子还携带有2个基因:ORF1/ORF2,ORF1编码一个RNA结合pro,ORF2编码具有反转录E和核酸内切E的作用.机制:首先转录出一条RNA,RNA离开cell核在质中翻译出ORF1、2,随后两蛋白结合在RNA上,回到cell核,通过多聚A尾定位靶位点多聚T,在ORF2协助下,反转录成DNA,插入靶位点。转座子插入序列(IS)转座子(Tn)Mu噬菌体酵母:Ty系列果蝇:P因子玉米:Ac-
18、Ds体系人:LINE(长散在重复序列)转录步骤起始封闭复合物:RNApol+模板(双链)起始前复合物PIC:RNApol+模板+TFII因子开放复合物:双链变单链三元复合物:结合首个核苷酸起始通过(与启动子强度有关)pol将下游DNA拉向自己合成9核苷酸,离开启动子合成9核苷酸,离开启动子延伸释放因子,TFIIH水解ATP,CTD P化 , RNA延伸校对:1. 焦磷酸化编辑2. 水解编辑模板(DNA)校对:转录偶联修复RNA延伸校对:TFIIH、S转录过程应对组pro:FACT(核小体重塑)移开核小体并在之后复原Pol诱导RNA加工所需蛋白因子:1. 端帽子:pol上S处ser残基P化,激活
19、hsPT5延伸因子并募集加帽E2. 剪切:SR pro 等3。尾巴:CTD尾巴参与募集多聚A化所需的E,导致:1) mRNA切割2) 许多A被加到端3) 由-核酸E进行的对RNA的降解4)转录终止终止共同机制:停顿,脱出1. 依赖因子:有ATP E,解旋E活性,2. 不依赖因子:形成茎环,寡聚U与尾巴加多聚A共同进行启动子-10 TATAA “Pribnow”35 TTGACA 通用启 动子两区最佳距离为1619 bp与Pribnow序列共同性 活性相 关两种常见突变:1。上升突变:增加序列共同性2.下降突变:减少序列共同性25-30 TATA box 精确起始-7078 CAAT box 起
20、始频率80-100 GC box 起始频率UPE=UAS:TATA上游启动元件,即CAAT,GC核心启动子:TFIIB识别元件TATA序列起始子Inr下游启动子元件一同构成起始复合体的调节序列:启动子最近元件,上游激活序列,增强子,沉默子,边界元件,绝缘子增强子功能:1. 远距效应2. 增强效应十分明显3. 效应与位置和取向无关(与绝不同)4. 大多为重复序列5. 一般有组织或cell特异性6. 无基因专一性7. 受外界信号调控通用转录因子(GTF):真中,与启动子,今启动子元件相结合,辅助polII间接结合无TBP:与TATA DNA小沟结合,使DNA扭曲变形,募 集其他GTFTAF:在启动
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