(毕业论文)复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法的研究正文终稿.docx
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1、长春工业大学本科毕业论文 摘 要白芍、葛根、五味子、丹参、甘草是常见的中草药,盛产于中国,对于化学性肝损伤有一定的功效作用。白芍的功效成分为芍药苷,五味子的功效成分为五味子醇甲,丹参的功效成分为丹参酮A和丹酚酸B,葛根的功效成分为葛根素,甘草的功效成分甘草苷。本论文定性和定量的分析了原药材和成品功效成分的含量及检测方法,研究表明用薄层分析法对原药材和成品进行定性分析,用超声提取对成品进行提取,利用紫外分光光度法对原药材和成品进行定量分析,结果表明原药材符合中华人民共和国药典中规定的含量标准,即原药材合格。经测定成品中每100g含芍药苷800mg,葛根素800mg,五味子醇甲300mg。方法学考
2、察表明紫外分光光度法在测定原药材和成品含量时,方法简便,重现性好,结果准确,稳定性好。关键词:保肝;功效成分;紫外分光光度法;薄层分析法;超声波提取法AbstractWhite peony root, kudzu root, Schisandra, red sage root, licorice is a common Chinese herbs,rich in China, the effectiveness of the role of chemical liver injury. The effectiveness of the composition of the white peon
3、y is paeoniflorin, the effectiveness of the composition of the Schisandra is schizandrin, the effectiveness of the composition of the Danshen is Tanshinone A and salvianolic acid B, the effectiveness of the composition of the Pueraria is puerarin, the effectiveness of the composition of the licorice
4、 is liquiritin.In this thesis, both qualitative and quantitative analysis of the content of the raw herbs and finished effectiveness of the composition and detection methods. That the qualitative analysis of raw herbs and finished with thin layer chromatography,ultrasonic extraction to extract the f
5、inished product, quantitative analysis on raw herbs and finished by UV spectrophotometry. The results show that the original ingredients to meet the content standards set forth in the Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China, that is, the original medicinal qualified. The determination of fini
6、shed products: per 100g of paeoniflorin in 800mg,per 100g of puerarin in 800mg, per 100g of schizandrin in 300mg. Methodology investigated shows UV spectrophotometry in the determination of the original ingredients and finished content, the method is simple, reproducible, accurate and good stability
7、.Key words: liver protection; functional components; ultraviolet spectrophotometry; thin layer chromatography; ultrasonic extraction目 录摘 要IAbstractII第一章 前 言1第二章 文献综述22.1 白芍简介22.1.1 白芍的形态特征22.1.2 白芍的功效作用22.1.3 白芍的利用现状32.2 葛根简介42.2.1 葛根的形态特征42.2.2 葛根的功效作用42.2.3 葛根的利用现状52.3五味子简介52.3.1 五味子的形态特征52.3.2 五味
8、子的功效作用62.3.3 五味子的利用现状62.4 丹参简介72.4.1 丹参的形态特征72.4.2 丹参的功效作用72.4.3 丹参的利用现状82.5 甘草简介92.5.1 甘草的形态特征92.5.2 甘草的功效作用92.5.3 甘草的利用现状92.6 本文的研究内容102.7 本文的研究意义10第三章 实验部分113.1 实验原料113.2 实验设备与试剂113.2.1 实验设备113.2.2 试剂113.3 原药材的定性分析123.3.1 白芍123.3.2 葛根123.3.3 五味子133.3.4 丹参133.3.5 甘草143.4 原药材的定量分析143.4.1 白芍中芍药苷的定量分
9、析143.4. 2 葛根中葛根素的定量分析143.4.3 五味子中五味子醇甲的定量分析153.5 利用超声波提取法提取成品中的功效成分I3.6 紫外分光光度法测定成品中有效成分含量163.7 定性分析成品中功效成分173.7.1 丹参酮A173.7.2 丹酚酸B173.7.3 甘草苷173.8 方法学考察173.8.1 加标回收率试验173.8.2 稳定性试验183.8.3 精密度试验183.8.4 重现性试验193.8.5 准确度实验19第四章 结果与讨论204.1 原材料标准曲线的绘制204.1.1 白芍有效成分芍药苷标准曲线的绘制204.1.2 葛根有效成分葛根素标准曲线的绘制214.1
10、.3 五味子有效成分五味子醇甲标准曲线的绘制224.2 成品中标志性成分含量224.3 加标回收率测定结果234.3.1 芍药苷加标回收率测定结果234.3.2 葛根素加标回收率测定结果234.3.3 五味子醇甲加标回收率测定结果234.4 标准溶液稳定性244.5 精密度试验测定结果244.5.1 芍药苷精密度测定结果244.5.2 葛根素精密度测定结果244.5.3 五味子醇甲精密度测定结果254.6 重现性试验测定结果254.6.1 芍药苷重现性试验测定结果254.6.2 葛根素重现性试验测定结果254.6.3 五味子醇甲重现性试验测定结果264.7 准确度实验测定结果264.7.1 芍
11、药苷准确度实验测定结果264.7.2 葛根素准确度实验测定结果264.7.3 五味子醇甲准确度实验测定结果27第五章 结论与展望285.1 结论285.2 展望28致谢29参考文献3034第一章 前 言本文研制出来的颗粒主要针对化学性肝损伤,利用白芍、葛根等五味中草药为原材料,利用白砂糖和麦芽糊精质粒为附加剂制成的颗粒冲剂。化学性肝损伤,是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。 作为人体的重要解毒器官的肝脏,具有肝动脉和肝静脉双重血液供应。化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化,因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。大自然和人类工业生
12、产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质,称为“亲肝毒物”,这些毒物在人群中普遍易感,潜伏期短,病变的过程与感染的剂量直接相关,可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。(1)酒精是肝脏的巨大威胁长期或间断性大量饮酒可引起肝损伤。酒精直接毒害肝细胞,影响其结构及功能,引起代谢紊乱,不能利用或无力贮存营养物质。长期过度饮酒导致酒精性肝炎、脂肪肝,直至肝硬化。(2)污浊的环境损伤肝脏 空气污染、生活环境恶化是现代人都要面对的问题。特别是城市,空气流通速度缓慢,各种工业废气、汽车尾气等令空气中充满了各种各样的化学毒物,损伤肝脏和身体健康。而另一个需要特别关注的是封闭的办公环境。长时间呆在这
13、样的环境中,对健康非常不利,因为封闭的空调房中不是自然风,空气污浊,损伤肝脏。(3)熬夜使受损肝脏难以修复工作繁忙,生活不规律,经常熬夜,睡眠不足,这样都会引起肝脏血流相对不足,影响肝脏细胞的营养滋润,抵抗力下降。一些人原来已经受损的肝细胞将难于修复并加剧恶化。本论文是复方白芍保肝颗粒研究的子项目,通过紫外分光光度法对原药材(白芍、葛根、五味子、丹参和甘草)及成品标志性成分进行含量测定。 紫外分光光度法对测定原药材及成品标志性功效成分具有简便、快速、准确、选择性好、分析成本低、操作简便、快速等优点,适用浓度范围广。通过对复方白芍保肝颗粒标志性成分检测方法的研究为制定企业标准、工艺选择、工业生产
14、奠定了坚实的理论基础。第二章 文献综述2.1 白芍简介2.1.1 白芍的形态特征白芍(Paeonia sterniana Fletcherin Journ)为毛茛科植物芍药的干燥根(如图2-1)。其味苦、酸,性微寒,功能平肝止痛,养血调经,敛阴止汗1 ,我国民间用于治疗胸腹胁肋疼痛、泻痢腹痛、自汗、阴虚发热、月经不调、崩漏、带下。近年来白芍的药理研究已取得显著进展2, 现代药理实验表明,芍药苷具有镇静、解痉镇痛、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、免疫调节、抗肝损伤、免疫性肝纤维化、平肝止痛、养血调 图2-1 白芍 经、敛阴止汗、保肝护肝、心血管调节等功效3 。毫白芍是安徽“四大”名贵道地药材之一
15、,临床广泛用之4。 2.1.2 白芍的功效作用(1)对免疫系统作用白芍水煎剂对巨噬细胞功能有明显的促进作用,白芍水煎剂对细胞免疫功能有一定的调节作用。白芍水煎液可拮抗环磷酰胺对外周血T淋巴细胞的抑制作用,使之恢复正常水平,表明白芍可使处于低下状态的细胞免疫功能恢复正常2。(2)对中枢神经的作用白芍具有明显镇静作用,白芍对戊四氮、士的宁诱发的惊厥均有对抗作用5。 以白芍为主的方剂可治疗包括便秘、腹泻、腹胀、阴寒、脾虚等肠道应激性综合症6,白芍还可在动物模型中对胃肠道电运动有明显的抑制作用,并与中药柴胡相反。这就为解释白芍的“以缓急痛”治疗胃肠痉挛性疼痛的药理作用提供了新的实验数据,也为研究白芍在
16、古代“治肝安胃”疗法中的作用机理提供了新的思路和方法7。(3)对心血管系统作用白芍水溶物可明显延长异丙肾上腺素所致心肌缺氧的存活时间,对抗由垂体后叶素引起的大鼠心电图变化,增加小鼠心肌对86Rb的摄取量,从而增加小鼠心肌的营养性血流量8。(4)抗炎作用 TGP已对类风湿性关节炎动物模型即大鼠佐剂性关节炎的治疗作用和机理进行了研究。50mg/kg.d静脉给药11d,TGP对大鼠多发性关节炎有明显的防治作用9。(5)抗应激作用白芍水溶物腹腔注射可明显延长小鼠的常压耐缺氧存活时间10。通过试验观察了赤芍、白芍及卵叶芍药醇提物对小鼠有滋补强壮作用,且都延长小鼠游泳时间和小鼠缺氧存活时间,有一定的强壮作
17、用,但对幼年小鼠体重增加无影响,对小鼠记忆力有一定的促进作用,但其作用机理有待进一步研究11。(6)抗病原微生物作用白芍具有抗菌作用强、抗菌谱广的特点12,13。TGP促干扰素诱生及抗病毒作用的研究表明:具有直接抗病毒作用,TGP250mg/L能使水泡性口炎病毒效价下降2.22个对数值14。综上所述,白芍是一类具有多种生理与药理活性的中药,其中TGP已在临床上试用于治疗类风湿性关节炎、肝炎老年性疾病等,效果较好2。2.1.3 白芍的利用现状目前白芍多用于保健行业中,具有明显的功效作用,现已有白芍保健酒系列,也有治疗作用的药品,如白芍总苷胶囊,芍药苷为白芍的主要有效成分之一15,所以目前对芍药苷
18、的提取工艺也有许多方法,根据生产规模不同,各有利弊。目前芍药苷的提取方法有很多,常用的方法有:HPLC法,用HPLC法测定白芍中芍药苷的灵敏度高,操作简单。但由于白芍中含有一些极性小的物质在样品测定时不易从色谱柱上洗脱,连续进样易造成芍药苷在色谱柱上的保留时间逐渐缩短,影响其分离效果16。乙醇加热回流法,提取时间长,杂质溶出率较高,并且操作量大,极大程度上影响白芍药品的质量;超声提取,超声提取技术是由声学和中药化学相互交叉及渗透发展而来,应用于医药、化学、食品等各个领域,特别在中药有效成分提取中显现出了其强大的生命力17。利用超声波产生的强烈的空化效应、扰动效应以及乳化、扩散、击碎和搅拌等多种
19、作用,增加物质分子运动的频率和速度、溶剂的穿透力,从而加速目标成分进入溶剂17。中药材成分十分复杂,而且杂质多、干扰大,因此对样品制备、成分提取技术要求很高。制备技术落后已经是制约中药发展的“瓶颈”之一17。超声提取技术可以简化操作流程,缩短处理时间,提高分离效率18;微波提取,微波提取技术以其在提取率溶剂用量生产成本产品质量等方面优于传统提取的特点,将其应用于天然产物所含有效成分的提取和浓缩具有很好的效果19;水煎煮法,本法适用于大量生产中,精密度较低,水煎煮法温度较高,提取时间长,并易发霉变质,但操作简单,成本低。索氏提取法,该法提取率较高,浸液杂质少,但是提取时间较长,溶剂用量较大。2.
20、2 葛根简介2.2.1 葛根的形态特征葛根(如图2-2)为豆科葛属植物,其根为常用,生药味甘,辛性平,具有降低血管阻力,改善心脑血液循环,减慢心率,降低心肌耗氧量等药理作用20,21 葛根主要有效成分为:葛根素、大豆甙元、芒柄花素、大豆甙等23,其中以葛根素含量最高24。葛根具有解肌退热、生津、透疹,升阳止泻之功效25。葛根作为历代药食同源的植物之一,含有丰富的异黄酮类成分,不仅具有保护心血管系统的作用,还有降血糖降血脂改善微循环抑制血小板聚集以及增强免疫力等作用26。 图2-2 葛根作为常用中药,具有调节血压、增加冠脉血流量27 、改善脑循环28 、抑制血小板聚集29 、抗氧化自由基等作用。
21、临床应用于冠心病、脑血栓也取得了明显的疗效。葛根富含黄酮类化合物和淀粉,也是营养丰富的功能食品原料,已被国家卫生部列入药食同源的天然植物名单30。其中葛根素为主要的有效成分,作为治疗心脑血管的主要临床用21,25,3133。2.2.2 葛根的功效作用 (1)对心脑血管系统的作用:降低血压、减慢心率、降低心肌耗氧量34,葛根还具有减慢心率的作用。葛根黄酮和葛根素使正常和心肌缺血狗心率明显减慢35 葛根总黄酮和葛根素引起血压降低,心率减慢,总外围阻力减少,左心室压力和右心室压力上升最大速率降低,从而降低了心肌的氧耗量;同时又使冠脉血管扩张,冠脉血流量增加,阻力降低而增加氧的供给,氧的供求平衡得到改
22、善,临床上用于心绞痛有一定效力36;扩张冠状血管,改善正常和缺血心肌的代谢34,对脑循环、周围血管及微循环的影响35。(2)降血糖降血脂作用:口服葛根素能使高血糖小鼠血糖明显下降,即血清胆固醇含量减少,但当选用最低有效剂量的葛根素和小剂量阿斯匹林组成复方后,其降血糖作用明显加强,可维持24 h以上,并且能明显改善小鼠的糖耐量,对抗肾上腺素的升血糖作用也明显,并且认为葛根素可能是葛根治疗糖尿病的最主要成分。(3)抗氧化作用:体内外实验表明,葛根异黄酮明显抑制小鼠肝、肾组织及大白兔血、脑组织的脂质过氧化产物丙二醛的升高,且对提高血、脑组织中超氧化物歧化酶活性有极显著作用37。葛根能通过清除氧自由基
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