hMLH1及FHIT在食管...组织中的表达及临床病理意义_阿丽米热·库尔班.pdf

基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(81760532，81960498)作者简介:阿丽米热库尔班，女，1994 07 生，在读硕士，E-mail:392390506qq com收稿日期:2022 12 15hMLH1 及 FHIT 在食管鳞癌组织中的表达及临床病理意义阿丽米热库尔班1，2，卡吾力居买3，丹尼尔多里坤4，王黎2，买地尼也提尼亚孜1，2*(1新疆医科大学基础医学院遗传教研室，乌鲁木齐830054;2新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院中亚高发病成因与防治省部共建国家重点实验室;3新疆医科大学第一附属医院胸外科;4新疆医科大学第一附属医院小儿外科;*通讯作者，E-mail:mdnyn foxmailcom)摘要:目的检测食管鳞癌患者癌组织中 hMLH1 与 FHIT 基因的 mNA 及蛋白表达水平，并分析其与临床病理指标和预后之间的关系。方法收集 60 例食管鳞癌患者癌组织和癌旁正常组织标本，采用 qT-PC 法检测癌和癌旁组织中 hMLH1和 FHIT 基因的 mNA 表达情况，免疫组化法检测蛋白表达水平。2检验分析 hMLH1和 FHIT 蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴转移、浸润深度等临床病理指标之间的关系，Spearman 秩相关性分析 hMLH1 蛋白与 FHIT 蛋白表达之间的关系，并用 Kaplan-Meier 单因素和 COX 多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果qT-PC 结果显示，在食管鳞癌组织中 hMLH1、FHIT 基因 mNA 相对表达量显著低于癌旁正常组织(P0 05)。免疫组化结果显示，hMLH1、FHIT 蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁正常组织(P=0 011)。hMLH1 蛋白表达水平与淋巴结转移(P=0 007)、浸润深度(P=0 010)、病理分期(P=0 00)有关，而 FHIT 表达水平仅与浸润深度有关(P=0 013)。食管鳞癌组织中 hMLH1 和 FHIT蛋白表达呈正相关(r=0 339，P=0 008)。Kaplan-Meier 生存分析发现，食管鳞癌中 hMLH1 蛋白表达水平与患者总生存率相关(P=0 017)。COX 多因素分析结果提示，肿瘤分化程度(P=0 00)和临床分期(P=0 001)是食管鳞癌患者不良预后的独立危险因素。结论食管鳞癌组织中 hMLH1 表达下降，这与食管癌患者预后不良有关，hMLH1 与 FHIT 表达在食管癌恶性进展中可能存在协同作用。关键词:食管鳞状细胞癌;突变型的错配修复基因;脆弱的组氨酸三元组;预后;临床病理特征中图分类号:7351文献标志码:A文章编号:1007 6611(2023)04 0425 07DOI:1013753/j issn1007 6611202304003Expression and clinical significance of hMLH1 and FHIT in esophageal squamous cell carcinomaAlimire Kuerban1，2，Kawuli Jumai3，Dannier Duolikun4，WANG Li2，Maidiniyeti Niyazi1，2*(1Department of Genetics，Basic MedicalCollege，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China;2State Key Laboratory of Pathogenesis，Prevention and Treatment of HighIncidence Diseases in Central Asia，Clinical Medicine Institute，First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University;3Department ofThoracic Surgery，First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University;4Department of Pediatric Surgery，First Affiliated Hospital ofXinjiang Medical University;*Corresponding author，E-mail:mdnyn foxmail com)Abstract:ObjectiveTo investigate the mNA and protein expression levels of hMLH1 and FHIT genes in esophageal squamous cellcarcinoma，and explore their correlation with clinicopathological indicators and prognosisMethodsEsophageal squamous cell carci-noma tissues and adjacent normal tissues from 60 patients were collected to detect the mNA and protein expression levels of hMLH1and FHIT genes by T-qPC and immunohistochemistry，respectively 2was used to analyze the relationships between the hMLH1and FHIT protein expression and the clinicopathological indexes of patients such as sex，age，tumor differentiation，lymph metastasis，etc，Spearman rank correlation analysis was used to analyze the correlation between the expression of hMLH1 protein and FHITprotein，and Kaplan-Meier single factor and COX multiple factor analysis were used to analyze the risk factors affecting the prognosis ofesophageal canceresultsT-qPC results showed that the mNA expression of hMLH1 and FHIT in ESCC was significantlylower than that in normal adjacent tissues(P 0 05)IHC results showed that the positive expression rates of hMLH1 and FHITproteins in ESCC were significantly lower than those in normal adjacent tissues(P=0 011)The expression level of hMLH1 protein wasrelated to lymph node metastasis(P=0 007)，depth of invasion(P=0 010)and pathological stage(P=0 00)，but the expressionlevel of FHIT protein was only related to the depth of invasion(P=0 013)The expression level of hMLH1 protein in ESCC waspositively correlated with FHIT(r=0 339，P=0 008)Kaplan-Meier survival analysis showed that the expression of hMLH1 proteinin ESCC was correlated with the overall survival rate of patients(P=0 017)COX multivariate analysis showed that the degree oftumor differentiation(P=000)and the clinical stage(P=0001)were independent risk factors for poor prognosis in patients with ESCC524山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期ConclusionDecreased expression of hMLH1 in esophageal squamous cell carcinoma tissues is associated with poor prognosis inpatients with esophageal cancer There may be a synergistic effect between hMLH1 and FHIT expression in the malignant progression ofesophageal cancerKey words:esophageal squamous cell carcinoma;hMLH1;FHIT;prognosis;clinicopathological features食管癌(esophageal carcinoma，EC)是一种侵袭性恶性肿瘤，发病率高且预后不良1。EC 在组织学上分为腺癌(esophageal adenocarcinoma，EAC)和鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)两大类，ESCC 在东欧和亚洲高发2。我国作为亚洲食管癌高发的国家之一，90%以上为食管鳞状细胞癌，且发病率具有明显的地域差异3。突变型的错配修复基因(human mismatch repair gene，hMLH1)位于 3 号染色体上 p22 2 位点，是 DNA 错配修复系统(mismatch repair，MM)的关键基因，在维持基因组稳定性和减少 DNA 损伤修复方面起着重要作用4。研究者提出不同国家、不同地域hMLH1蛋白在人结直肠癌中表达的比例存在差异5。此外，在乳腺癌6、胰腺癌7、子宫内 膜癌8、结直肠癌9 中的研究发现，hMLH1 表达缺失与不良预后相关。脆性组氨酸三聚体(fragile histi-dine triad，FHIT)是位于3p14 染色体上，具有极高研究价值的肿瘤抑癌基因10，该基因在肿瘤生物学中的确切作用仍然存在一些争议，但多数研究报道FHIT 参与恶性肿瘤的发生发展过程，且该蛋白在癌组织中表达缺失11。研究发现，FHIT 蛋白的低表达与肿瘤进展和生存率降低有关12。近年来，DNA错配修复基因 hMLH1、FHIT 在癌症领域中成为研究焦点，但 hMLH1 与 FHIT 表达之间的关系在新疆地区食管鳞癌中尚未见相关研究报道。本研究将探讨新疆地区 hMLH1 和 FHIT 在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义。1材料与方法1 1病例来源收集 2015 年 1 月至 2017 年 12 月在新疆医科大学第一附属医院收治的 60 例食管鳞癌患者癌组织和癌旁正常组织标本，并选取食管癌患者的病理组织蜡块标本。其中男 41 例，女 19 例;年龄 43 77 岁，中位年龄 61 8 岁。低分化 15 例、中分化 26例、高分化 19 例。淋巴结转移 24 例，无淋巴结转移36 例。根据 AJCC 癌症分期手册第八版进行术后病理学分期13，期 4 例，期 39 例，期 17 例。通过电话随访，随访截至日期为 2020 年 5 月 1 日。本研究经新疆医科大学第一附属医院医学伦理委员会审批通过(伦理文书批号:20180110 02)，并获得患者知情同意书。1 2纳入与排除标准纳入标准:手术前后病理均为鳞癌;切缘病理检查结果为阴性;有明确的病理分期;有完整的随访记录。排除标准:手术前接受化疗、放疗、其他特殊治疗;同时患有其他部位恶性肿瘤。1 3主要试剂反转录和 PC 试剂盒均购自北京聚合酶生物科技有限公司。hMLH1 多克隆抗体购自上海 abcam贸易有限公司，FHIT 小鼠多克隆抗体购自武汉 pro-teintech 生物技术有限公司。兔二步法检测试剂盒(PV6001)及鼠二步法检测试剂盒(PV6000)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1 4qT-PC 检测 hMLH1 和 FHIT 基因 mNA 相对表达量提取食管癌组织和癌旁正常组织的总 NA。按照试剂盒要求的条件反转录成 cDNA，所得的反转录产物进行 PC 扩增，每个样品设置 3 个复孔。PC 反应条件:95 2 min 预变性，95 变性 5 s，60 退火 30 s，共 40 个循环。PC 反应体系:SYB mix 10 l，上下游引物各1 4 l，OX 0 1 l，CDNA 1 l 和 Nase-free Water 7 5 l。FHIT 基因引物序列为:ATCTCATCAAGC CCTCTGTAGT(上游)和 GGACGCAGGTCATGGAAGC(下游)。hMLH1基因引物序列为:GCACGAGGCACTGAGGTGATTG(上游)和 CGTCCAGCCGCCGAATAACC(下游)。-actin 内参照引物序列为:CATGTACGTTGCTATCCAG-GC(上游)和 CTCCTTAATGTCACGCACGAT(下游)。1 5免疫组织化学法检测 hMLH1 和 FHIT 蛋白表达水平将组织切片烤片 1 h，脱蜡和水合，并置于 3%过氧化氢溶液中10 min，以去除内源性过氧化物酶。用柠檬酸缓冲液(pH 7 0)抗原修复 10 min。室温冷却后，滴加一抗(稀释比例 hMLH1 和 FHIT 均为1 200)，并 4 过夜。滴加二抗 37 孵育 25 min。DAB 染色和苏木精复染。阴性对照 PBS 溶液替代一抗。镜检采用双盲法，每张切片均随机观察 5 个624J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4高倍镜视野(400)。阳性细胞按染色强度计分，无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别为 0，1，2，3 分;阳性细胞数 0%，1%25%，26%50%，51%75%，76%100%分别计分为 0，1，2，3，4 分。两个分数相乘，将 0 6 分判定为 hMLH1 阴性(表达缺失)，6 分为阳性表达(无缺失);两个分数相加，将 0 3 分判定为 FHIT 阴性(表达缺失)，3 分为阳性表达(无缺失)14。1 6统计学分析采用 SPSS 26 0 软件进行统计分析。对于计量资料以均数 标准差(?x s)表示，比较采用 t 检验;计数资料用百分率(%)表示，比较采用卡方检验;用 Spearman 秩相关性分析法进行相关性分析，并采用 Kaplan-Meier 单因素法和 COX 多因素回归进行生存分析，以 P 0 05 认为差异有统计学意义。2结果2 1食管鳞癌及其癌旁正常组织中 hMLH1 和FHIT 基因 mNA 的表达情况采用 qT-PC 法检测 60 例食管鳞癌组织及匹配的癌旁正常组织组织中 hMLH1 和 FHIT mNA 的表达情况，结果显示，与癌旁正常组织相比较，食管鳞癌组织中 hMLH1 和 FHIT mNA 表达水平均下降，差异有统计学意义(P 0 05，见图 1)。2 2食管鳞癌及其癌旁正常组织中 hMLH1 和FHIT 蛋白的表达水平免疫组化检测结果显示，hMLH1 蛋白定位于细胞核和细胞质，癌旁正常组织中主要在基底细胞层与癌旁组织比较，*P0 05图 1食管鳞癌和癌旁正常组织中 hMLH1 和 FHIT 的mNA 表达情况Figure 1The mNA expression of hMLH1 and FHIT inESCC and precancerous normal tissues和分化层细胞表达呈现棕褐色，在癌组织中主要在细胞质内(少部分细胞核也有表达)呈现为棕黄色至浅黄色(见图 2)。hMLH1 在癌旁正常组织和食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为 81 7%(49/60)和 48 3%(29/60)。与癌旁正常组织相比，食管鳞癌组织中 hMLH1 阳性表达率降低，差异有统计学意义(P 0 01)。FHIT 蛋白定位于细胞质，其阳性表达的细胞细胞浆内出现淡黄色至棕褐色颗粒(少部分细胞核也有表达)。FHIT 在癌旁正常组织和食管鳞癌组织阳性表达率分别为 83 3%(50/60)和 65 0%(39/60)，与癌旁正常组织比较，食管鳞癌组织中阳性表达率降低，差异有统计学意义(P 0 05)。在食管鳞癌组织中 hMLH1 和 FHIT 蛋白缺失率分别为 51 3%和 35 0%。图 2食管鳞癌组织及癌旁正常组织中 hMLH1 和 FHIT 蛋白的表达Figure 2Protein expression of hMLH1 and FHIT in ESCC and precancerous normal tissues2 3食管鳞癌患者 hMLH1 和 FHIT 的蛋白表达水平与临床特征的关系hMLH1 蛋白表达与淋巴结转移(N 分期)、浸润深度(T 分期)、病理分期有关(P 0 05)，而 FHIT 蛋白表达与肿瘤浸润深度(T 分期)有关(P 0 05)。hMLH1 和 FHIT 蛋白表达缺失与食管鳞癌患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤部位等临床特征均无关(P 0 05，见表 1)。724山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期表 1hMLH1 和 FHIT 蛋白表达与食管鳞癌患者临床病理学特征的关系Table 1Correlation of hMLH1 and FHIT expression with clinopathological characters of ESCC patients分类hMLH1FHITn表达表达缺失2Pn表达表达缺失2P性别0 0100 9190 6170 432男412021411328女1991019811年龄2 4320 1191 4250 233602911182992060311813311219T 分期6 6070 0106 1280 013T1+T227189271413T3+T433112233726N 分期7 3920 0070 2800 597N0372314371225N1 N32361723914分化程度0 8540 3350 5270 468高/中分化502624501931低分化10371028病理分期12 7030 0001 3270 241 4327164317261721517413脉管侵犯0 3920 7340 5390 463有514532无5528275518372 4食管鳞癌组织中 hMLH1 和 FHIT 蛋白表达及其相关性分析结果显示，29 例 hMLH1 表达阳性的食管鳞癌标本中 FHIT 表达阳性 15 例，表达缺失 14 例，阳性率为 51 7%(15/29);在 39 例 FHIT 表达缺失的食管鳞癌标本中 hMLH1 表达缺失 25 例，缺失率为64 1%(25/39)。60 例患者中，hMLH1 和 FHIT 表达相一致的共40 例，占6666%(40/60)，统计学分析发现 hMLH1 表达与 FHIT 表达呈正相关(r=0 339，P=0 008)。2 5食管鳞癌患者 hMLH1 和 FHIT 的蛋白表达水平与患者预后的关系Kaplan-Meier 生存分析结果显示，在食管鳞癌组织中 hMLH1 蛋白表达阳性患者生存率显著高于蛋白表达缺失患者，两组之间比较，差异有统计学意义(P 0 05)。而 FHIT 蛋白阳性表达和表达缺失患者生存率比较，差异无统计学意义(P=0 528，见图 3)。图 3hMLH1 和 FHIT 蛋白表达与食管鳞癌患者生存情况的关系Figure 3Correlation of hMLH1 and FHIT expression with survival of ESCC patients824J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 42 6食管鳞癌患者的单因素和多因素分析单因素生存分析结果显示，T 分期、N 分期、分化程度和临床分期与患者生存率相关(P 0 05，见表 2)。从单因素分析中选出经典的、认为影响预后的因素进一步纳入到 COX 多因素生存分析中，结果显示，肿瘤分化程度和临床分期是食管鳞癌患者不良预后的独立危险因素(P 0 05，见表 2)。表 2食管鳞癌患者预后影响的单因素与多因素 Cox 分析Table 2Univariate and multivariate Cox analysis of the parameters affecting the prognosis of ESCC patients变量单因素多因素95%CI2PH(95%CI)PhMLH15 6580 0190 207阴性17 60 26 061阳性21 60 30 311 655(0 75 3 67)FHIT3 3980 5280 242阴性19 47 26 761阳性19 51 30 781 583(0 73 3 415)性别0 2800 595男18 90 26 70女21 10 30 80T 分期5 9200 0150 535T1+T222 60 31 991T3+T417 06 24 900 752(0 31 1 85)N 分期5 1310 0230 747N022 03 30 061N1 N315 81 24 720 811(0 23 2 89)分化程度28 4600 0000 000高/中分化33 10 36 501低分化10 50 20 004 071(2 180 7 601)临床分期11 5280 0020 010 23 10 30 27112 12 21 052 412(1 232 4 722)3讨论食管癌的发生是多基因参与、多因素作用、多阶段发展的分子生物学过程，涉及到癌基因、抑癌基因、细胞周期调节基因及 DNA 修复基因等的相互作用。DNA 错配修复系统(MM)在细胞核主要扮演DNA 复制和转录的“监督者”的角色，保证 DNA 复制精准度及正确修复。hMLH1 作为 MM 的核心蛋白，表现为肿瘤抑制的作用。其缺失导致基因复制过程中错误的累积过多而细胞发生突变，基因组稳定性遭破坏，细胞的增殖和调控紊乱，直至细胞癌变，而这些变异与环境和生活方式等因素有交互作用15，16。脆弱的组氨酸三元组(FHIT)基因是公认的食管癌易感基因，包含一个活跃的染色体脆弱部位 FA3B，易受环境影响，其与基因组不稳定性、细胞凋亡和 DNA 损伤有关12。研究者认为，MM 蛋白异常表达通过影响原癌基因、抑癌基因的活性而致癌17。Melincovici 等9 在环境致癌因素密切相关的肿瘤中发现 hMLH1 基因表达缺失。常志伟等18 学者在有食管鳞癌家族史患者的癌组织观察到 hMLH1 和 FHIT 蛋白表达降低。此外，丹尼尔等19 研究者发现，错配修复基因 MSH2 与 FHIT 蛋白表达与有正相关性。新疆地区食管鳞癌的发病与环境因素、遗传因素密切相关，且有明显的家族性聚集现象20。借此假设本地区食管鳞癌的发生可能与 hMLH1 和 FHIT 基因的共同起作用相关联。本研究结果显示，与癌旁正常组织相比，食管鳞癌组织中 hMLH1、FHIT 蛋白表达缺失，同时这两个基因 mNA 表达下调趋势与其相关蛋白在癌旁正常组织及癌组织中表达趋势相一致，差异有统计学意义。hMLH1 和 FHIT 蛋白在癌旁正常组织和癌组织中阳性表达率分别为 81 7%，48 3%和 83 3%，924山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期650%，阳性表达率均呈下降趋势，表明这两种基因表达与食管鳞癌发生相关。蛋白表达下调的原因可能是基因突变引起的表达缺失，更多的则是因为启动子区域的甲基化引起21，22。研究显示，hMLH1 表达缺失与食管鳞癌患者淋巴结转移、浸润深度和分化程度等临床病理因素相关23。本研究中，有淋巴结转移、浸润深度较深、病理分期较晚的患者hMLH1表达缺失率更高，同时在浸润深度较深的患者 FHIT蛋白缺失率更高，提示 hMLH1、FHIT 表达缺失与食管鳞癌恶性表型和病理进展有关。因此进一步分析hMLH1 与 FHIT 蛋白表达之间的关系，结果显示，hMLH1 与 FHIT 蛋白的表达呈正相关，此结果与谷建琦等24 与柳立平等25 的研究结论一致，提示了hMLH1 和 FHIT 在食管癌的演变过程中似乎是相互关联的，然而鲜有研究报道食管癌患者 hMLH1 与FHIT 之间的关系26。吴东平等27 研究者提出，hMLH1 甲基化可能是指示预后相对较差的因素。而本次随访结果显示 60例患者中死亡 42 例，生存 18 例。因此推测 hMLH1与 FHIT 蛋白联合检测可能结合其他指标共同用于判断肿瘤进展、预后情况，其表达可能作为判断食管鳞癌预后的生物学检测指标，在生存率的分析中hMLH1 阳性表达的患者生存期明显高于表达缺失的患者，说明 hMLH1 表达与预后正相关，而 FHIT蛋白的表达与食管癌患者总的生存率无相关性。同时多因素分析结果提示肿瘤分化程度和临床分期是其不良预后的独立危险因素。关于 hMLH1、FHIT蛋白表达与食管癌患者预后之间的关系，国内外有不同的研究报告19，28，29，我们考虑研究对象遗传背景及环境暴露因素差异导致实验结果的不同，再次证实了不同人群、不同地域 ESCC 中 hMLH1 蛋白表达情况也存在差异。综上所述，hMLH1 和 FHIT 蛋白在食管鳞癌组织中同时低表达可能是食管癌发生和发展的重要分子基础;且 hMLH1 可能成为预测食管鳞癌患者病程进展及预后判断中具有重要意义的生物标志物之一。今后扩大样本量进一步对其进行临床病理学分析，同时对 hMLH1 和 FHIT 基因表观遗传学变异及其在食管鳞癌不良预后的调控机制层面进行深入研究，为食管鳞癌患者的诊断、治疗以及预后提供更多的循证医学数据。参考文献:1Uhlenhopp DJ，Then EO，Sunkara T，et al Epidemiology ofesophageal cancer:update in global trends，etiology and risk fac-tors J Clin J Gastroenterol，2020，13(6):1010 1021 2Li D，Zhang L，Liu Y，et al Specific DNA methylation markersin the diagnosis and prognosis of esophageal cancerJ Aging(Albany NY)，2019，11(23):11640 11658 3Liao Y，Li C，Xia C，et al Spatial distribution of esophagealcancer mortality in China:a machine learning approachJ IntHealth，2021，13(1):70 79 4Liu K，Wang Y，Zhu Q，et al Aberrantly expressed HOMAD1disrupts nuclear localization of MCM8-MCM9 complex and com-promises DNA mismatch repair in cancer cellsJ Cell DeathDis，2020，11(7):519 534 5陈明枝，兰青，蒋文君 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 在结直肠癌组织中的表达及临床意义J 中国实用医刊，2021，48(15):51 54 6Malik SS，Masood N，Asif M，et al Expressional analysis ofMLH1 and MSH2 in breast cancerJ Curr Prob Cancer，2019，43(2):97 105 7Wang Y，Lin J，Cui J，et al Prognostic value and clinicopatho-logical features of PD-1/PD-L1 expression with mismatch repairstatus and desmoplastic stroma in Chinese patients with pancreaticcancer J Oncotarget，2017，8(6):9354 9365 8Hashmi AA，Mudassir G，Hashmi N Microsatellite Instabilityin endometrial carcinoma by immunohistochemistry，associationwith clinical and histopathologic parametersJ Asian Pac JCancer Prev，2019，20(9):2601 2606 9Melincovici CS，Boca AB，uman S，et al Assessment ofmismatch repair deficiency，CDX2，beta-catenin and E-cadherinexpression in colon cancer:molecular characteristics and impacton prognosis and survival-an immunohistochemical studyJ om J Morphol Embryol，2020，61(3):715 727 10Bellon M，Bialuk I，Galli V，et al Germinal epimutation of fragilehistidine triad(FHIT)gene is associated with progression to acuteand chronic adult T-cell leukemia diseasesJ Mol Cancer，2021，20(1):86 101 11Kiss DL，Waters CE，Ouda IM，et al Identification of Fhit as apost-transcriptional effector of Thymidine Kinase 1 expression J Biochim Biophys Acta Gene egul Mech，2017，1860(3):374 382 12Silveira ZL，Weber MA，Oliveira SA，et al Do FHIT gene alte-rations play a role in human solid tumors?J Asia Pac J ClinOncol，2018，14(5):e214 e223 13Amin MB，Greene FL，Edge SB，et al The eighth edition AJCCcancer staging manual:continuing to build a bridge from a popu-lation-based to a more“personalized”approach to cancer stagingJ CA Cancer J Clin，2017，67(2):93 99 14佘天宇，佘真真，徐海涛，等 P16 及 FHIT 基因异常表达在非小细胞肺癌发病机制中的研究J 实用医院临床杂志，2020，17(5):1 5 15Baretti M，Le DT DNA mismatch repair in cancer J PharmacolTher，2018，189:45 62034J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4 16Peters U，Bien S，Zubair N Genetic architecture of colorectalcancer J Gut，2015，64(10):1623 1636 17Chakraborty U，Alani E Understanding how mismatch repairproteins participate in the repair/anti-recombination decision J FEMS Yeast es，2016，16(6):fow071 104 18Chang Z，Zhang W，Chang Z，et al Expression characteristicsof FHIT，p53，BCA2 and MLH1 in families with a history ofoesophageal cancer in a region with a high incidence of oesopha-geal cancer J Oncol Lett，2015，9(1):430 436 19丹尼尔多里坤，卡吾力居买，张海平，等 哈萨克族食管鳞癌中 hMSH2 及 FHIT 表达的临床病理学意义J 中国医药导报，2021，18(14):13 17 20Ainiwaer J，Tuerhong A，Hasim A，et al Association of theplasma riboflavin levels and riboflavin transporter(C20orf54)gene statuses in Kazak esophageal squamous cell carcinomapatients J Mol Biol ep，2013，40(5):3769 3775 21Jensen LH，asmussen AA，Byriel L，et al egulation ofMLH1 mNA and protein expression by promoter methylation inprimary colorectal cancer:a descriptive and prognostic cancermarker studyJ Cell Oncol(Dordr)，2013，36(5):411 419 22Ma K，Cao B，Guo M The detective，prognostic，and predictivevalue of DNA methylation in human esophageal squamous cellcarcinoma J Clin Epigenetics，2016，22(8):43 52 23陈燕，薛大忠 食管鳞癌中 hMLH1、ECC1 和 Ki67 的表达及临床病理意义J 河北北方学院学报(自然科学版)，2018，34(6):7 11 24谷建琦，董青，关晶，等 脆性组氨酸三聚体基因及错配修复基因 hMLH1、hMSH2 在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义J 实用口腔医学杂志，2009，25(5):689 693 25柳立平，苏彦欣，白文元 散发性大肠癌抑癌基因 FHIT 与错配修