ImageLab中文操作基础手册.doc

Image Lab™
汉字操作手册

Fast and Reliable

Image Lab全自动图像获取和分析软件用于Molecular Imager ChemiDoc™ XRS+、Molecular Imager Gel Doc™ XR+ 和 Criterion Stain FreeTM 成像系统，可应用于凝胶电泳和转印膜数字成像和分析，而自动化工作步骤能加速图像获取步骤及参数优化，并针对调整好凝胶或转印膜影像进行系统性分析，进而得到所需分析数据结果。

一、软件操作界面

开启精灵
程序桌面
主窗口工具列
分析工具列
状态列

1. 主窗口工具列

档案管理 分析数据Results Data

2. 显示工具列
转换3D成模式像
亮度明暗度转换
改变图像色彩
全窗口大小

放大
缩小
图像显示设定
图像信息

3. 分析工具列
（1）图像工具（Image Tools）
（2）泳道及条带工具（Lane and Band Tools）
（3）分子量工具（MW Molecular Weight）
（4）自动定量工具（Quantity Tools）
（5）注释工具（Annotation Tools）
（6）手动定量工具（Volume Tools）

二、使用Image Lab 软件进行化学发光图像获取步骤
1. 建立图像获取程序：
在凝胶成像（Gel Imaging）对话框中选择Chemi（化学发光）应用程序
(1) 在成像区域（Imaging Area）对话框中下拉式选单中选择适宜样品大小（非必需，能够后经过Position Gel选择）
(2) 选择成像曝光（Image Exposure）方法，能够人为评定曝光时间并以手动设定（Manual Exposure），或是使用信号累积模式（Signal Accumulation Mode，SAM）来进行操作。
在建立一个化学发光程序时最难任务就是图像曝光确实定，因为您想取得一个充足利用了相机大动态范围图像。过短图像曝光时间可能使高于膜背景微弱信号不能被识别；过长图像曝光时间能够使得一些条带饱和（也就是说，超出了相机正确汇报信号能力）。假如这是您第一次用ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信号累积模式（SAM）之前决定一个适宜成像时间框架。取得这个信息最好方法是取得一个相对短手工曝光并利用Image Lab里工具估量最适曝光时间。
2. 手动曝光
(1) 选择手动设定曝光时间（Manually set exposure time）并在读秒框中输入10秒。
(2) 选择Highlight saturated pixels 。
(3) 把胶置于透射箱中心位置。
(4) 在程序窗口中点击按钮。
(5) 观察显示器中样品实时图像，打开照胶系统门并移动样品直到在视野中心区域。
(6) 可利用摄影机变焦滑板调整成像区域大小。
(7) 选择按钮取得你第一个图像。
若所需图像出现在计算机显示器上，确定图像中是否包含红色饱和区域。若有饱和区域存在，请重新以较短曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于最暗条带之上，在较低右下角Image Lab窗口中观察信号强度数值。图中显示强度为1994，摄影机能统计最大值32分之一（最大值为65,535）。用你最初10秒曝光再乘以30就可在摄影机最大动态范围周围成像你样品。若你只需针对单一图像成像时间进行评定，可直接在手动曝光区域中输入300。

3. 信号累积模式（Signal Accumulation Mode，SAM）
假如预估方法不足以正确满足您目标，请选择SAM按钮，然后按Setup按钮。一个新对话框会跳出来，其包含有可输入细分成像时间领域。
在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原始300秒曝光估量时间，因为我们有理由相信正确成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要5个成像，推测其中一个将会和最好成像极为靠近。一个您SAM设定图像显示出现在对话框里。
而SAM设定影像显示对话窗口，在您选择按钮后再点选按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取时间。在250秒获取第一个图像，同时一个小缩略图会出现在窗口下方，以这类推整个过程将连续到获取全部图像。

就像前面做过那样，经过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也能够经过使用在程序窗口左边图像转换窗口（Image Transform）中调整划片改变图像表观。在SAM程序中任何地方您全部能经过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求图像时，点击 按钮舍弃其它不适合图像来完成获取图像程序。也可在SAM获取图像过程中或之以后保留需要全部图像，直接点选右键单点缩图窗口内图像即可进行存盘保留下来。在决定获取图像数量时，记住增加SAM图像会造成背景信号平均。当较多图像被取得时，在背景强度水平周围弱信号将会变得难以识别。假如分辨最弱信号很关键，我们推荐在适宜时间下取得单一成像。

三、建立全自动图像获取及分析程序（Creating Protocols）
1. 开启分析精灵窗口 -- STEP 1. GEL IMAGING

（1）根据应用（NucleicAcid/Protein/Blots）选择相关程序（Choose an application）

（2）选择成像区域（Choose the Imaging Area）

（3）选择成像曝光时间（Choose Image Exposure Time）

（4）选择显示设定（ Choose Display Options , Highlight saturated pixels and Image Color）

2. 图像自动分析（Analyze Image）-- STEP 2. DETECT LANES AND BANDS

设定DETECT LANES AND BANDS参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵敏度。

3. 分子量分析（Analyze Molecular Weight ）--STEP 3. ANALYZE MOLECULAR WEIGHT

设定Analyze Molecular Weight Settings分子量标准品（Molecular Weight Standard）类型，全部Bio-Rad各类标准品（包含核酸、蛋白）均已预存。当然，您也能够依据您试验设置您自定义分子量标准品。并同时设定分子量标准品泳道及回归方法。

4. 汇报输出设定（Report Settings）-- STEP 4. SPECIFY CONTENT OF REPORTS

5. 结果（Results Overview）及汇报（Report）

（1）数据显示信息（Displaying Data）

（2）分析表格设定（Analysis Table Options）

（3）Lane 信息（Lane Profile）

（4）标准曲线（Standard Curve）

四、建立图像分析程序（Creating Images Analyzing Protocols）
1. 图像分析（Analyzing Images）
（1）分析工具Analysis Tool Box
（A）自动分析（Auto Analysis）
点选进入Detection Settings窗口

设定Detect lanes and bands参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵敏度），接着再设定 Molecular Weight Analysis SettingsMolecular Weight Standard、Standard Lanes及Regression Method参数。

2. 图像工具（Image Tools）
可进行水平或垂直翻转、左右旋转90℃或自由旋转（Rotate）、裁剪（Crop）、反转（Invert Data）及迭合（Merge）。

3. Lanes及Bands工具（Lane and Band Tools）
（1）Lane Tab
使用自动（Automatic）或手动（Manual）搜寻Lane功效
（A）针对全部Lanes（All Lanes）进行大小调整（Resize）、（Adjust）及 删除（Delete）等参数调整。
（B）针对单一Lane（Single Lane）进行增加（Add）、弯曲（Bend）、移动（Move）、宽度（Width）及删除（Delete）等参数调整。
（C）利用Lane Background Subtraction进行背景值扣抵，并可点选（Apply to selected Lane）针对单一Lane进行调整。
- 能够藉由Rolling Disk参数设定（1-99 mm）来去除背景值。

（2）Bands Tab
经过Detect Bands进行自动搜寻Bands功效或手动进行增加（Add）、删除（Delete）及（Adjust）等参数调整。

4. 分子量分析工具（Molecular Weight Analysis Tools）
此工具可由已知标准品测算相正确分子量或碱基对（base pairs）。

5. 定量工具（Quantity Tools）
（1）相对定量（Relative Quantity Tab）
从图像中选择已知标准品（reference band）及其标准品浓度（以绿色R表示），其分析结果可从Analysis table观察。

（2）绝对定量（Absolute Quantity Tab）
经过选择已知标准品浓度bands（最少两个以上,以R表示），并设定适宜回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands绝对浓度（回归参数设定如Linear(较常见)、Point-to-Point或Cubic spline）。
Regression Method
Minimum number of standard bands
Minimum number with Force Through Option
Linear
2
1
Point-to-Point
2
1
Cubic Spline
5
4

6. 注释工具（Annotation Tools）
能够经过Add Annotations工具增加文字批注及箭头批注，并可调整批注相对位置（Alignment）、文字属性、颜色及旋转方向等参数

7. 定量工具（Volume Tools）
按下选择较适合Band型态, 选择想要定量分析Band位置, 并在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白, 并分别定义其定量依据（如kb，ppm，mg/ml…）提议用Rect Tool方形，先框出合适方形，并用复制方法将分析Band框出（Ctrl+C+左键/即可复制，或Ctrl+C复制/Ctrl+V粘贴）。

在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。

（1）Volume Background Subtraction
- Local（Local background subtraction）经过我们所圈选unknown volume 和 standard volume pixels密度总和来进行背景值扣抵。
- Global（Global background subtraction）经过整张胶（或膜）背景平均密度来进行背景值扣抵。

有任何疑问和意见，欢迎随时来电问询
800-820-5567