牛科家养动物催产素%28OXT%29基因研究进展.pdf
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1、中国牛业科学2 0 2 3,49(5):6 1-6 7China Cattle Science综述牛科家养动物催产素(OXT)基因研究进展蒋发俊,范新阳,苗永旺(云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明6 50 2 0 1)摘要:催产素(oxytocin,O XT)系全球首个被测序并人工合成的9肽神经内分泌激素,能以神经递质和激素两种形式发挥功能。以激素发挥功能时,需要与催产素受体(oxytocin re-ceptor,O XT R)结合形成复合物方可发挥生理功能。OXT存在于机体多个组织器官,具有广泛的生物学功能,尤其在哺乳动物泌乳过程中发挥重要的调控作用。本文综述了牛科物种OXT基因结构及其
2、编码多肽的分子特征、OXT与OXTR间的定位与相互识别过程、OXT调控泌乳过程的机制及其在动物生产中的应用,并对其下一步研究进行了展望,以期为深入解析OXT基因的结构与功能提供参考。关键词:牛科物种;OXT基因;结构与功能;共翻译机制;动物生产中图分类号:S823OXT是有胎盘哺乳类动物体内的9 肽神经内分泌激素,具有神经递质和激素双重作用。OXT存在于下丘脑-垂体-性腺轴系统的各个环节,主要由下丘脑的催产素神经元合成,沿其轴突运输并贮存在垂体后叶,在适当的刺激下以脉冲式释放,对动物具有多种生理效应 。其主要功能是使子宫收缩和促进排乳,同时在哺乳动物哺乳、母性行为、性行为、睡眠周期、社会感知、
3、摄食、痛觉调节以及心血管、体温调节等方面也发挥重要作用 。目前,确定OXT与情绪的关系以及探究其在缓解疼痛上的作用机制已成为人类医学的研究热点。OXT的一个主要功能是促进乳腺排乳。奶牛、水牛、羊等动物的排乳反射均受到OXT的调节,OXT作用于乳腺泡的肌上皮细胞使之收缩,引起乳房内压升高,从而促进排乳反射的发生 2 。OXT还能够增加奶流量和减少机械挤奶所用时间,在挤奶前给奶牛注射OXT,能使奶产量显著增加 3。在排乳过程中,注射少量OXT就能够显著增加乳汁的排出4。我国本土水牛多属沼泽型水牛,不仅泌乳量少,且挤乳困难,很容易发生排乳抑制现象 5。经与国外引进的乳用水牛(摩拉水牛、尼里-拉菲水牛
4、等)杂交改良后,泌乳性能有所提高,但杂交水牛乳头括约肌的紧张度仍然较高,排乳抑制现象还是经常发生)。因此,在水牛奶业中,防止排乳抑制,减轻挤收稿日期:2 0 2 3-0 5-30 修回日期:2 0 2 2-0 6-10基金项目:国家自然科学基金项目(32 2 6 0 8 2 2&317 6 0 6 59);云南省重大科技专项计划项目(2 0 2 2 0 2 AE090005)。作者简介:蒋发俊(1999一),男,云南普洱人,在读硕士研究生,主要从事动物遗传学研究。*通讯作者:苗永旺(196 4一),男,内蒙古通辽人,博士,教授,博士生导师,主要从事动物遗传学研究。文献标识码:A文章编号:10
5、0 1-9111(2 0 2 3)0 5-0 0 6 1-0 7乳强度,提高挤乳效率以及提高产奶水牛排乳效率是当前急待解决的问题。已有研究表明,OXT在哺乳动物泌乳过程中扮演重要的调控角色 2 4。为此,本文分析了牛科物种OXT基因结构及其编码产物分子特征,综述了OXT多肽共翻译机制及酶切加工修饰过程、OXT与 OXTR的表达与相互识别、OXT基因变异及其调控泌乳的机制和在动物生产中的应用,以期为进一步阐明OXT基因的结构和功能以及探究该基因在调控泌乳方面的作用提供参考。1OXT基因及其编码产物的结构1.1OXT基因定位与转录区结构牛科家养动物OXT基因主要位于13或14号染色体上,全长介于8
6、 99 935bp之间,mRNA长介于50 3536 bp之间,由3个外显子和2 个内含子构成,仅有一种选择性剪接方式,编码12 5个氨基酸。美国国家生物技术信息中心网站(NationalCenter for Biotechnology Information,NCBI;https:/www.ncbi.nlmn ih.g o v/)数据显示:普通牛(Bostaurus)0XT基因(Gene ID:280888)位于13号染色体上,全长8 99bp,m R NA 长50 3bp。水牛(Bubalusbubalis)0XT基因(Gene ID:10 2 410 8 56)位于14号染色体,全长92
7、 5bp,m R NA 长52 5bp。瘤牛(Bosindicus)0XT基因(Gene ID:109567741)位于13号染色体,全长90 9bp;杂交牛OXT基因(Gene ID:62113902810)位于13号染色体,全长935bp;山羊(Capra hircus)0XT基因(Gene ID:108637398)位于13号染色体,全长92 2 bp;绵羊(Ovisaries)O XT 基因(GeneID:443390)位于13号染色体,全长904 bp。基于 NCBI 基因组数据,通过 GSDS 2.07(h t-tp:/gsds.gao-lab.org/)绘制了牛科家养动物OXT普
8、通牛Bos.taurus(NM_176855.1)牛Bos indicus(XM_019972770.1)杂交牛BasindicusxBostaunus(XM_027558182.1)水牛Bubalusbubalis(XM_025264713.2)绵羊Ovisaries(NM_001009801.2)羊Caprahircus(XM_018057424.1)5obpLegend:CDS-UTR一Intron图1常见牛科家养动物OXT基因转录区结构图1.2Motif 与结构域基于NCBI基因组数据,通过MEMESuite5.5.1服务器(https:/meme-suite.org/)绘制了牛科家养
9、动物OXT基因Motif结构图(图2)。结果显示,牛科家养动物 OXT基因存在3种 Motif。进一步通NameMotifLocations普通牛Bostaurus(NM _17 6 8 55.1)2.20e-128瘤牛Bos indicus(XM_019972770.1)2.47e-123水牛Bubalus bubalis(XM_025264713.2)7.51e-128绵羊Ovisaries(NM_001009801.2)9.64e-128山羊Caprahircus(XM_018057424.1)6.41e-127MotifSymbolMotifConsensus1.RAVLDLDVRTC
10、LPCGPGGKGRCFGPSICCGDELGCPVGTAEALRCQEENY2.CQSGQKPCGSGGRCAAAGICCSPDGCHADPACDPEAAFSCH3.中国牛业科学基因转录区结构图(图1)。在该图上,牛科各种常见家养动物的OXT基因转录区均由3个外显子、2个内含子构成,编码区相似。不同牛科家养动物的非翻译区存在一定差异,就5 UTR 而言,普通牛的5UTR最短;而就3 UTR而言,普通牛、瘤牛和绵羊的3 UTR相似,比杂交牛、水牛和山羊的3UTR短。toobp200pP-valueMAGSSLACCLLGLLALTSACYIONCPLGG第49卷300bp400b过 PROSI
11、TE(h t t p s:/p r o s i t e.e x p a s y.o r g)分析 OXT多肽的基序类型,发现在第2 0 2 8 位氨基酸之间存在神经垂体激素基序,其氨基酸序列为 CYIQNC-PLG;在第2 8 31 位氨基酸之间存在酰胺化位点,其氨基酸序列为 GGKR。500bp600bp800bp900bp3图2 常见牛科家养动物OXT基因的Motif通过在线工具 Signa IP(https:/services.health-tech.dtu.dk/service.php SignalP-5.0)分析常见牛科家养动物 OXT多肽的信号肽。OXT多肽在119位氨基酸残基间存
12、在信号肽;在19 2 0 位氨基酸间存在信号肽Sec/SPI切割位点,表明OXT蛋白属于分泌型蛋白。1.3OXT的共翻译及加工修饰过程OXT多肽存在3个Motif,在2 0 2 8 位氨基酸普通牛Bosta(NM_176855.1)杂文牛BosInedieusxBostamers(XM_027558182.1)牛Bosindlicin(XM_019972770.1)水牛Bubalusbubals(XM_025264713.2)山羊Caprahireic(XM_018057424.1)Mature osytocin研究发现,OXT在下丘脑视上核和室旁核的神经分泌细胞中合成 10 ,其多肽通过共翻
13、译机制进入内质网 1(图4),在内质网和高尔基体中被加工修饰,最后分泌到细胞外发挥生理功能。此过程一共由6 个阶段构成。(1)核糖体翻译出由9 个疏水性之间存在神经垂体激素基序,其氨基酸序列为 CY-IQNCPLG,进一步通过MEGA10软件进行序列比对 8 1(图3),此序列为0 XT成熟蛋白序列。119位氨基酸为信号肽序列,31 12 5位氨基酸为垂体后叶素运载蛋白序列 9,表明OXT多肽链具有复杂的加工修饰过程。111111111 222222222 233333333334444444444555555555666666666677777777778888888888999999990
14、00000000011111111112222221234567890123456789 01 2345678 9012345678901 23456789012345678901 234567890123456789012345678901 23456789012345678901 23456789012345LAGSSLACCLLGLLALTSAGKRAVLDLDVRTCLPCGPGGKGRCFGPSICCGDELGCFYGTAEALRCQEENYLPSPCQSGQKPCGSGGRCAAAGICCSPDGCHEDPACDPEAAFSQHAAGSSLACCLLGLLALTSACYIOVCPL
15、GGKRAVLDLDVRTCLPCGPGAKGRCFGPSICCGDELGCFVGTAEALRCREENYLPSPCQSGQKPCGSGGRCAAAGICCSPDGSHADPACDPEAAFSQHAGSSLACCLLGLLALTSACYIQNCPLGGKRAVLDLDVRTCLPCGPGGKGRCFGPSICCGDELGCFVGTAEALRCQEENYLPSPCQSGQKPCGSGGRCAAAGICCSPDGCHADPACDPEAAFSQHAAGSSLACCLLGLLALTSACYIONCPLGGKRAVLDLDVRTCLPCGPGGKGRCFGPSICCGDELGCFVGTAEALRCQEE
16、NYLPSPCQSGQKPCGIGGRCAAAGICCSPDGCHEDPACDPEAAFSQHASSSLACCLLGLLALTSACYIQNCPLGGKRAVLDLDVRTCLPCGPGGKGRCFGPSICCGDELGCFVGTAEALRCQEENYLPSPCQSGQKPCGSGGRCAAAGICCSPDGCHADPACDPEAAFSQHCYIQNCPLG信号肽序列(1 19)成熟OXT序列(2 0 2 8)图3OXT多肽链与其成熟蛋白序列比对图CYIQNCPLG垂体后叶素运载蛋白序列(31 12 5)氨基酸为核心构成-螺旋的信号肽(12 。(2)-螺旋被细胞质中的信号识别颗粒(signal
17、 recognitionparticle,SR P)识别并与 SRP结合形成核糖体-多肽-SRP复合体 13。(3)复合体在SRP与其受体识别结合过程中被转运至内质网膜上的Sec6通道,多肽第5期进入内质网 13。(4)SRP解离,OXT多肽第2 0 位氨基酸(Cys)被蛋白质二硫键异构酶(protein disul-fide isomerase,PDI)识别并结合 4。(5)PDI通过氧化反应使第2 0 位 Cys与第2 6 位Cys之间形成二蒋发俊,等:牛科家养动物催产素(OXT)基因研究进展核糖体mRNA63硫键 15。(6))信号肽被信号肽酶I(s i g n a l p e p t
18、i d a s eI,SPI)切除 16 ,形成OXT蛋白与垂体后叶素运载蛋白复合体。SRP?OXT与垂体后叶素运载蛋白复合体信号肽Sec61通道?SRP受体4内质网SPI酶信号肽与SPI酶二硫键PDI图4OXT多肽链共翻译以及二硫键形成过程OXT蛋白与垂体后叶素运载蛋白复合体的加工在高尔基体内的分泌小泡中由多种酶协同完成 17 ,最终分泌小泡浓缩为成熟颗粒通过胞吐过程分泌出细胞 18 (图5)。该过程由4个阶段构成:(1)O XT 蛋白与垂体后叶素运载蛋白复合体被激素原转换酶(prohormone converting enzyme,PCE)切割为OXT蛋白和垂体后叶素运载蛋白前体 17 。
19、(2)OXT蛋白前体末端的赖氨酸(K)被羧肽酶 B(c a r-boxypeptidase B-like,CPB)降解 19。(3)A-酰胺化酶(A-AE)作用于OXT蛋白前体末端的两个甘氨酸(G),先降解掉末端甘氨酸,进一步通过酰胺化修饰剩下的甘氨酸避免OXT蛋白被蛋白酶水解 2 0 。此酰胺化位点的氨基酸序列(GGKR)在上述分析OXT基序时也被证实是存在的。(4)形成由9个氨基酸组成并具有环状结构的神经肽 2 1(图6),分泌小泡进一步浓缩为成熟颗粒通过胞吐分泌出细胞发挥功能。COOH-CYIQNCPLG-G-K-R-A-V-厂COOH-CYIQNCPLG-G-KCPB?COOH-CYI
20、QNCPLG-GA-AE4COOH-CYIQNCPLG-NH2图5OXT蛋白与垂体后叶素运载蛋白复合体在分泌小泡中的酶切修饰H-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2注:H:氢;NH2:胺。其中,位于两个半胱氨酸之间的桥代表二硫键。图6 催产素分子的九个氨基酸序列20OXT与OXTR的定位与作用机制2.1OXT与 OXTR表达大脑是合成 OXT 的主要部位,但子宫、肾脏、卵巢、生殖腺、附睾、心肌、黄体、胎盘、胸腺等组织也能合成 OXT(2.23。O XT 可以在血管内皮细胞、脂肪细胞、胰岛细胞等多种细胞中表达,同时 OXTR 在这些细胞中也广泛存在,因此
21、其具有广泛的生物学功能 2 4 对奶山羊的研究显示 2 5-2 7 ,OXT在室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等2 0 多个核团具有分布,且表达量随着性成熟的阶段不同呈现动态变化。陈树林等 2 7 对妊娠期奶山羊下丘脑研究发现,在妊娠的不同时期,OXT表达量存在差异。孙志宏 2 8 、陈树林 2 9 等对乏情期与发情期奶山羊的研究发现,OXT在下丘脑表达,经神经垂体、第三脑室、血管3条途径释放。综上,推测各核团之间可能存在协同作用,且核团之间通过轴突传递OXT,最终经血液循环作PCG用于靶细胞而发挥生理功能。此外,性成熟的不同阶段、妊娠的不同时期OX
22、T表达量呈动态变化,但这种动态变化规律如何以及是否导致机体生理功能的改变还需深人研究。OXT可在牛黄体中表达,对黄体的功能有重要作用,还会影响黄体组织中其他激素的水平。李兆才等 30 对发情周期牛黄体的研究揭示黄体中OXT主要在神经内分泌细胞中表达。OXT在黄体功能的维持与退化中具有重要作用,它不仅调节黄体组织的笛体激素水平,还影响促性腺激素分泌、卵泡发育及排卵 31。但 OXT对黄体组织中激素水平的调节机制还有待进一步阐明。OXT在牛的多个组织器官表达,具有重要调控作用。Merkin等 32 对普通牛9个组织OXT表达量64研究,发现OXT在睾丸中表达量最高,达到7 TPM(T PM 0,则
23、基因有表达),在骨骼肌中表达量达到0.9TPM。Li a o 等 33 对普通牛7 个组织OXT表达量分析,发现在下丘脑中表达量最高,达到10 TPM,在肌肉组织中表达量达到0.8 TPM。宋小白 34 等对青年期摩拉杂交一代水牛下丘脑研究发现,OXT主要存在于下丘脑室旁核、视上核和弓状核。凌泽继 35 等对广西本地水牛的研究表明:0 XT存在于水牛下丘脑-垂体-卵巢轴系统的各个环节,尤其以下丘脑弓状核、视上核和室旁核分布最多。所以OXT在牛的睾丸、骨骼肌、下丘脑、卵巢和黄体等组织器官表达,具有复杂的生物学功能。2.2OXT与OXTR结合过程OXT存在一个二硫键,使前六个氨基酸形成一中国牛业科
24、学个环状结构,见图7(a)。O XT R 是镶嵌在细胞膜中含有7 个-螺旋的G-蛋白偶联受体。OXT以环肽分子形式与OXTR结合发挥生理功能 36 ,见图7(b)。首先,二价金属离子(Zn+、Cu 2+等)通用改变OXT分子环部的构象,增强其与受体的结合能力,使OXT与受体结合 37 。与OXTR结合时,OXT的环部插人到受体上方由3、4、6 号螺旋组成的结合口袋中,氨基端尾部与2、3号螺旋的胞外部分结合形成复合体。激素-受体复合物的结合是氢键相互作用 37 。更重要的是,受体F103残基在该识别过程中发挥关键作用,OXTR 通过 F103残基与 OXT尾部Leu8残基的特异结合来区别催产素与
25、加压素 38 第49卷F103Extracellular spaceAsn5Cys6Leu8Pro7Gln4Cys1Ile3Tyr2Cell membrane bilayer一Gly94Oxytocin receptorOxytocinaIntracellular spaceb图7 OXT与OXTR结合示意图3OXT对泌乳的调控泌乳是乳汁分泌和排乳两个过程的合称。泌乳的必要条件是排乳,而乳的排放是神经-激素共同作用的结果。OXT是此过程中最重要的激素,其诱导的排乳是乳汁分泌的最后一个重要步骤 3940 。OXT与OXTR结合后导致乳腺肌上皮细胞收缩(图8),促进腺泡中乳汁流人初级导管。乳汁由乳
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