食品添加剂未来研究趋势综述ppt课件.ppt

第六章第六章 食品添加食品添加剂分析分析1.6.1 6.1 食品添加食品添加剂的概况的概况食品添加食品添加剂是用于改善食品的品是用于改善食品的品质、延、延长食品食品保存期、便于食品加工和增保存期、便于食品加工和增强食品食品营养成分的养成分的一一类化学合成或天然物化学合成或天然物质。它在食品的制造加工、包装它在食品的制造加工、包装处理及感官理及感官评定等定等方面起了很大的作用。方面起了很大的作用。世界各国世界各国为确保食品添加确保食品添加剂的安全使用，制定的安全使用，制定了有关食品添加了有关食品添加剂的法的法规。食品添加。食品添加剂的定量、的定量、定性分析，是食品安全的一个至关重要的方面。定性分析，是食品安全的一个至关重要的方面。2.食品添加食品添加剂的分的分类按来源分：天然的和化学合成的按来源分：天然的和化学合成的按功能分：按功能分：防腐防腐剂、漂白、漂白剂、发色色剂、着色、着色剂、酸度、酸度调节剂、抗、抗结剂、消泡、消泡剂、抗氧化、抗氧化剂、膨松、膨松剂、稳定定剂和凝固和凝固剂、胶姆糖基、胶姆糖基础剂、乳化、乳化剂、酶制制剂、增味、增味剂、被膜、被膜剂、水分保持、水分保持剂、营养养强化化剂、甜味、甜味剂、增稠、增稠剂、香料及其它，共、香料及其它，共22类。3.几种食品添加几种食品添加剂举例：例：防腐防腐剂：苯甲酸和苯甲酸苯甲酸和苯甲酸钠、山梨酸和山梨酸、山梨酸和山梨酸钾漂白漂白剂：过氧化苯甲氧化苯甲酰、SO2发色色剂：亚硝酸硝酸钠（火腿（火腿肠中含有，能使肉中含有，能使肉鲜红，且有防腐的作用），且有防腐的作用）抗氧化抗氧化剂：BHA,BHT,TBHQ,维生素生素E,维生素生素C被膜被膜剂：紫胶（用于巧克力糖的外膜涂紫胶（用于巧克力糖的外膜涂层，防止巧克力受潮，防止巧克力受潮发粘）粘）营养养强化化剂：食食盐中的碘，中的碘，氨基酸，氨基酸，维生素，生素，矿物物质，如、，如、钙、铁、锌。4.食品添加食品添加剂的作用的作用 食品添加食品添加剂的的发展大大地促展大大地促进了食品工了食品工业的的发展，其所以如此，是因展，其所以如此，是因为食品添加食品添加剂具有以下具有以下作用：作用：(1)增加食品的保藏性，防止腐增加食品的保藏性，防止腐败变质(2)改善食品的感官性状改善食品的感官性状(3)有利于食品加工操作，适有利于食品加工操作，适应生生产的机械化和的机械化和连续化化(4)保持或提高食品的保持或提高食品的营养价养价值(5)满足其他特殊需要足其他特殊需要5.食品添加食品添加剂的一般要求的一般要求 根据多年来的工作，由根据多年来的工作，由动物物实验对添加添加剂已作已作出出 毒理学的毒理学的评价，从而价，从而规定了添加定了添加剂的的“每日允每日允许摄取量取量”（Accepted Daily Intake),即即ADI值。ADI值，是指人每天允，是指人每天允许食用的量，就是食用的量，就是说，某种，某种化学物化学物质某种化学物某种化学物质一个人每天食用同一个人每天食用同样的数量，的数量，并且并且长期不断食用下去，期不断食用下去，对人体也不致人体也不致产生危害的生危害的剂量。量。这是通是通过动物物试验的的结果将它果将它应用到人用到人类而而制定的。制定的。任何任何对人体有重要作用的不可缺少的物人体有重要作用的不可缺少的物质，都是，都是有一定限量的，超有一定限量的，超过就会就会对人体有害。人体有害。6.6.2 6.2 某些食品添加某些食品添加剂的的检测6.2.1 6.2.1 防腐防腐剂能抑制食品中微生物的繁殖，防止食品腐能抑制食品中微生物的繁殖，防止食品腐败变质，延，延长食品保存期。常用的防腐食品保存期。常用的防腐剂有苯甲酸及其有苯甲酸及其钠盐、山梨酸、山梨酸及其及其钾盐、对羟基苯甲酸基苯甲酸酯，以上三种防腐，以上三种防腐剂主要用于主要用于酱油、醋、果汁、汽水、果油、醋、果汁、汽水、果酱、果子露和罐、果子露和罐头等。此外等。此外还有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸钙主要用于面主要用于面包、糕点、包、糕点、酱油、醋、黄油和乳制品。油、醋、黄油和乳制品。7.苯甲酸、山梨酸及苯甲酸、山梨酸及对羟基苯甲酸基苯甲酸酯样品品处理理从食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸气从食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸气蒸蒸馏法或乙法或乙醚萃取法。萃取法。当当样品加酸酸化后，其中的苯甲酸品加酸酸化后，其中的苯甲酸钠盐、山梨酸、山梨酸钠盐转变为苯甲酸和山梨酸，在酸性条件下可随水蒸苯甲酸和山梨酸，在酸性条件下可随水蒸气气馏出，出，导入碱性吸收液中，然后酸化。用乙入碱性吸收液中，然后酸化。用乙醚萃萃取游离酸，取游离酸，挥干乙干乙醚，加适当的溶，加适当的溶剂溶解残渣，便溶解残渣，便可可进行行测定。定。8.有有时食品中的其它干食品中的其它干扰物物质存在存在时对提取会造成麻提取会造成麻烦，因此在提取苯甲酸、山梨酸之前因此在提取苯甲酸、山梨酸之前应先先进行行样品品处理，目理，目的是的是为了防止提取了防止提取过程中出程中出现乳化乳化现象而象而损失苯甲酸、失苯甲酸、山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物质给测定定带来的来的误差。具体差。具体处理方法如下：理方法如下：除二氧化碳除二氧化碳 碳酸碳酸饮料中二氧化碳可用超声法除去。料中二氧化碳可用超声法除去。除酒精除酒精 因酒精既可溶于乙因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，当用乙，又可溶于水，当用乙醚提取苯甲酸提取苯甲酸时便容易乳化，故便容易乳化，故应先加先加热挥去酒精，再将去酒精，再将样品酸化后用乙品酸化后用乙醚提取苯甲酸。提取苯甲酸。9.除脂肪除脂肪 因脂肪易溶于乙因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消，而脂肪酸也能消耗碱，当用酸碱滴定法分析苯甲酸耗碱，当用酸碱滴定法分析苯甲酸时会会带来正来正误差。通常在碱性条件下用乙差。通常在碱性条件下用乙醚提取出脂肪，提取出脂肪，然后再加酸酸化，并用乙然后再加酸酸化，并用乙醚提取苯甲酸。提取苯甲酸。除蛋白除蛋白质 蛋白蛋白质是高分子化合物，是高分子化合物，结构既有构既有亲脂基脂基团又有又有亲水基水基团，当用乙，当用乙醚提取苯甲酸提取苯甲酸时，蛋白，蛋白质的存在会的存在会导致乳化而致乳化而给分离苯甲酸分离苯甲酸带来困来困难。除蛋白。除蛋白质的方法很多，例如的方法很多，例如盐析、析、加蛋白加蛋白质沉淀沉淀剂、透析等。、透析等。10.样品品经酸化后，蒸酸化后，蒸馏法提取山梨酸、苯甲酸和法提取山梨酸、苯甲酸和对羟基苯甲酸基苯甲酸酯，这一方法在基体复一方法在基体复杂的食品中得到广的食品中得到广泛泛应用。通用。通过对大量不同大量不同样品的分析，蒸品的分析，蒸馏法的提法的提取率一般在取率一般在75-95之之间。蒸。蒸馏法可以将防腐法可以将防腐剂从从含含氯化化钠和酒石酸的基和酒石酸的基质中提取出来，中提取出来，导入至二入至二氯甲甲烷-水的混合溶液（水的混合溶液（75：25）中，防腐）中，防腐剂被提取被提取到有机相中，到有机相中，经浓缩后后进行行GC分析。分析。11.（）气相色（）气相色谱法法苯甲酸和山梨酸可以被气相色苯甲酸和山梨酸可以被气相色谱法直接法直接测定，一般用极性固定，一般用极性固定相定相进行分离。如果将苯甲酸、山梨酸衍生行分离。如果将苯甲酸、山梨酸衍生为酯（甲（甲酯、丁、丁酯）或硅）或硅醚的形式，的形式，则用非极性固定相分离。用非极性固定相分离。例：例：Graveland用用3磷酸磷酸-乙乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯甲溶液提取面包里的山梨酸和苯甲酸，离心后上清液作酸，离心后上清液作为样液液进行行GC测定，色定，色谱柱柱为2m2mm的玻璃柱，内填的玻璃柱，内填Carbowax20M/对苯二甲酸固定苯二甲酸固定液涂液涂渍在在60-80目目ChromosorbW担体上，柱温以担体上，柱温以5/min从从100升高到升高到210，载气气为氮气氮气65mL/min。丙酸、山梨。丙酸、山梨酸和苯甲酸在酸和苯甲酸在25min内完成分离，最低内完成分离，最低检出量出量为5ng。12.（2）液相色谱法苯甲酸、山梨酸和苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸基苯甲酸酯可以用可以用HPLC直接直接测定。定。添加剂样品提取方法流动相及色谱柱回收率/%苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸酯、丙酸苯甲酸、山梨酸调味品等饮料果酱、调味品、饮料、腌菜、人造黄油果汁、饮料、乳制品、酱、冷食等膜过滤超声脱气、膜过滤饱和硫酸铵水蒸气蒸馏膜滤及乙醚提取25mmol/L NaH2PO4-甲醇（3：7）；TSKGEL ODS-80Tm柱甲醇0.02mol/L乙酸铵（3：7）；C18柱0.025mol/L磷酸（pH7.2）-甲醇（95：5）；Inertsil-pH柱甲醇-0.02mol/L乙酸铵（5：95）；ODS C18柱104-10898-11382-10195-10113.（3）薄薄层色色谱法法苯甲酸、苯甲酸苯甲酸、苯甲酸钠经分离提分离提纯后，用薄后，用薄层层析分离，在析分离，在紫外光下或紫外光下或显色后与色后与标准比准比较定性与概略定量。定性与概略定量。（4 4）紫外分光光度法紫外分光光度法苯甲酸、苯甲酸苯甲酸、苯甲酸钠在酸性溶液中蒸在酸性溶液中蒸发出来后，在重出来后，在重铬酸酸钾硫酸溶液中氧化除去硫酸溶液中氧化除去挥发性的性的杂质及山梨酸，再及山梨酸，再进行行蒸蒸馏分离，蒸分离，蒸馏液在波液在波长225nm处测光密度与光密度与标准比准比较定量本法适用于定量本法适用于酱油、油、酱菜、果汁、果菜、果汁、果酱等等样品。品。14.6.2.2 6.2.2 发色色剂发色作用，抑菌作用色作用，抑菌作用亚硝酸硝酸盐是添加是添加剂种急性毒性种急性毒性较强的物的物质之一，其次之一，其次亚硝硝酸酸盐为亚硝基化合物的前体，具有致癌性，因此硝基化合物的前体，具有致癌性，因此对其用量其用量及残留量有及残留量有严格的要求。格的要求。抗坏血酸与抗坏血酸与亚硝酸硝酸盐有高度有高度亲和力，在体内能防止和力，在体内能防止亚硝化硝化作用，因此在肉作用，因此在肉类腌制腌制时添加适量的抗坏血酸，有可能防添加适量的抗坏血酸，有可能防止生成致癌物止生成致癌物质。虽然硝酸然硝酸盐和和亚硝酸硝酸盐的使用受到了很大限制，但至今国的使用受到了很大限制，但至今国内外仍在内外仍在继续使用。其原因是使用。其原因是亚硝酸硝酸盐对保持腌制肉制品保持腌制肉制品的色、香、味有特殊作用，迄今未的色、香、味有特殊作用，迄今未发现理想的替代物理想的替代物质。更重要的是更重要的是亚硝酸硝酸盐对肉毒梭状芽肉毒梭状芽孢杆菌的抑制作用。杆菌的抑制作用。15.硝酸硝酸盐和和亚硝酸硝酸盐的的测定方法定方法主要有比色法、气相色主要有比色法、气相色谱法和液相色法和液相色谱法。法。（1）盐酸酸萘乙二胺法（乙二胺法（测亚硝酸硝酸盐）样品品经沉淀蛋白沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸硝酸盐与与对氨基苯磺酸重氮化后，再与氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸酸萘乙二胺偶合形成乙二胺偶合形成红紫色染料，与紫色染料，与标准比准比较定量。定量。本法本法检出下限出下限为0.1mg/kg。16.（2）镉柱法（测硝酸盐用）样品品经沉淀蛋白沉淀蛋白质，除去脂肪后，溶液通，除去脂肪后，溶液通过镉柱，使柱，使其中的硝酸根离子其中的硝酸根离子还原成原成亚硝酸根离子，在弱酸性条硝酸根离子，在弱酸性条件下，件下，亚硝酸根与硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸酸萘乙二胺偶合形成乙二胺偶合形成红紫色染料，紫色染料，测得得亚硝酸硝酸盐总量，量，由由总量减去量减去亚硝酸硝酸盐含量即得硝酸含量即得硝酸盐含量。含量。（3 3）气相色）气相色谱法法 测定前要定前要进行衍生化以形成易行衍生化以形成易挥发性的物性的物质。硝酸硝酸盐的的测定通常是将其衍生定通常是将其衍生为硝基苯，用硝基苯，用热裂解裂解检测器器测定，定，检测限限为100-200100-200g/kgg/kg。亚硝酸根衍生物的分离一般采用非极性固定相。硝酸根衍生物的分离一般采用非极性固定相。17.（4）液相色谱法硝酸根和硝酸根和亚硝酸根的液相色硝酸根的液相色谱测定方法，大多定方法，大多采用阴离子交采用阴离子交换法分离，然后以抑制型法分离，然后以抑制型电导或或紫外紫外检测。用离子交。用离子交换色色谱法分析食品中硝酸法分析食品中硝酸根和根和亚硝酸根不硝酸根不仅简便、快速，而且便、快速，而且选择性好、性好、准确度高。准确度高。18.6.2.3 6.2.3 甜味甜味剂甜味甜味剂是指能是指能赋予食品甜味的一种食品添加予食品甜味的一种食品添加剂。天然甜味天然甜味剂主要是从植物主要是从植物组织中提取出来的甜味物中提取出来的甜味物质，近，近年也采用人工合成法年也采用人工合成法获得。它可分得。它可分为糖醇糖醇类和非糖和非糖类。糖醇糖醇类：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等非糖非糖类：甜菊糖苷、甘草、奇异果素、索：甜菊糖苷、甘草、奇异果素、索马甜等。甜等。人工甜味人工甜味剂主要是一些具有甜味但又不是糖主要是一些具有甜味但又不是糖类的物的物质。它。它的品种很多，其中的品种很多，其中磺胺磺胺类有糖精、甜蜜素等；有糖精、甜蜜素等；二二肽类有阿斯巴甜、阿力甜等；有阿斯巴甜、阿力甜等；蔗糖的衍生物有三蔗糖的衍生物有三氯蔗糖、帕蔗糖、帕拉金糖、果糖低聚糖等。拉金糖、果糖低聚糖等。19.糖精糖精糖精是广泛使用的人工甜味糖精是广泛使用的人工甜味剂，我国，我国规定糖精最大使用定糖精最大使用量量为0.15g/kg。糖精的甜味是蔗糖的糖精的甜味是蔗糖的500倍，但食后会有一种金属余味，倍，但食后会有一种金属余味，通常与甜蜜素配伍使用。由于糖精通常与甜蜜素配伍使用。由于糖精对人体并无人体并无营养作用，养作用，也不是食品中的天然成分，也不是食品中的天然成分，应尽量少或不用。尽量少或不用。对婴幼儿幼儿食品、病人食品和大量食用的主食食品不得使用。食品、病人食品和大量食用的主食食品不得使用。20.（）比色法（）比色法糖精糖精经氯仿、苯提取分离后，与酚和硫酸于仿、苯提取分离后，与酚和硫酸于175加加热，转化成酚磺化成酚磺酞，然后用碳酸，然后用碳酸氢钠处理，形成的理，形成的红色在色在558nm波波长测定定，和，和标准比准比较而定量。而定量。（）紫外吸收光（）紫外吸收光谱法法食品中的糖精食品中的糖精钠用透析法用透析法进行透析，用乙行透析，用乙醚提取，提取，转至至aHCO3溶液中加溶液中加盐酸和酸和锌粉粉进行行还原生成二氧化原生成二氧化苯并异苯并异噻唑啉，此啉，此还原生成物用紫外吸收光原生成物用紫外吸收光谱法法进行行定性定量定性定量测定。定。21.（）薄（）薄层层析法析法 糖精在酸性条件下，用乙糖精在酸性条件下，用乙醚提取，提取，浓缩后后经薄薄层层析分析分离，自薄离，自薄层板上刮下，定量溶解，酸化后在波板上刮下，定量溶解，酸化后在波长207nm测定。定。（）（）纳氏比色法氏比色法 糖精先糖精先经薄薄层分离，自薄分离，自薄层板上刮下，定量溶解后，加板上刮下，定量溶解后，加 2SO4 和和H2O2 消化，使成消化，使成为铵盐，然后和碘化汞、碘化，然后和碘化汞、碘化钾的复的复盐(HgI22KI)反反应生成黄色化合物，用生成黄色化合物，用铵盐为标准，准，间接求出糖精的含量。接求出糖精的含量。22.（5）气相色）气相色谱法法GC法法测定糖精（定糖精（钠）是将）是将样品酸化后，用乙酸乙品酸化后，用乙酸乙酯提取提取糖精，提取液糖精，提取液浓缩后，用甲基化后，用甲基化试剂衍生成甲基化合物，衍生成甲基化合物，用用GC测定。定。（6）液相色）液相色谱法法HPLC法法测定汽水、果汁、配制酒定汽水、果汁、配制酒类中糖精中糖精钠为我国国我国国家家标准方法中的第一法（准方法中的第一法（GB/T5009.28-2003),样品品处理理相相对简单，将，将样品加温除去二氧化碳和乙醇，用氨水品加温除去二氧化碳和乙醇，用氨水（1：1）调pH值约7，过滤后就可以后就可以进样分析。分析。23.6.2.4 6.2.4 色素色素食用色素按其性食用色素按其性质和来源，可分和来源，可分为食用天然色素和食用食用天然色素和食用合成色素两大合成色素两大类。天然色素安全性天然色素安全性较高，但染色力弱，高，但染色力弱，稳定性定性较差：叶差：叶绿素，素，类胡胡萝卜素花色苷等。目前已卜素花色苷等。目前已经有有170多种不同原多种不同原料的天然色素，常料的天然色素，常见的有叶的有叶绿素、素、类胡胡萝卜素、花色苷、卜素、花色苷、紫胶、胭脂虫紫胶、胭脂虫红、红花素、花素、栀子黄、焦糖色等。子黄、焦糖色等。合成色素着色能力合成色素着色能力强，且，且稳定性好，但大多数定性好，但大多数对人体有人体有害（一般毒性、致泻性和致癌性）：害（一般毒性、致泻性和致癌性）：苋菜菜红，胭脂，胭脂红，日落黄，日落黄，柠檬黄等。檬黄等。24.合成色素多以苯、甲苯、合成色素多以苯、甲苯、萘等化工等化工产品品为原原料，料，经过磺化、硝化、偶氮化等一系列有机磺化、硝化、偶氮化等一系列有机反反应化合而成。因此，食用合成色素多化合而成。因此，食用合成色素多为含含有有R-N=N-R键、苯、苯环或氧或氧杂蒽蒽结构化合物，构化合物，它它们对人体存在一定的不安全性或者人体存在一定的不安全性或者产生有生有害作用。害作用。25.“苏丹丹红”风波波“苏丹丹红”型色素是一种人造化学制型色素是一种人造化学制剂，全，全球多数国家都禁止将其用于食品生球多数国家都禁止将其用于食品生产。这种种色素常用于工色素常用于工业方面，比如溶解方面，比如溶解剂、机油、机油、蜡和鞋油等蜡和鞋油等产品的染色。科学家通品的染色。科学家通过实验发现，“苏丹丹红”会会导致鼠致鼠类患癌，它在人患癌，它在人类肝肝细胞研究中也胞研究中也显现出可能致癌的特性。出可能致癌的特性。26.27.苏丹丹红是一种人工合成的偶氮是一种人工合成的偶氮类、油溶性的化工、油溶性的化工染色染色剂，1896年科学家达迪将其命名年科学家达迪将其命名为苏丹丹红并并沿用至今。沿用至今。苏丹丹红被大量地用在工被大量地用在工业、化学和医、化学和医学学领域，用于机油、汽域，用于机油、汽车蜡和鞋油等工蜡和鞋油等工业产品，品，以及生化毒理学研究的着色以及生化毒理学研究的着色剂等。等。目前，目前，苏丹丹红系列常系列常见4种，其中二号、三号和种，其中二号、三号和四号均四号均为一号的化学衍生物。一号的化学衍生物。苏丹丹红一号一号为暗暗红色；二号色；二号为红色；三号色；三号为有有绿色光色光泽的棕的棕红色；色；四号四号为深褐色。深褐色。28.1995年，欧盟和其他一些国家已开始禁止在食品年，欧盟和其他一些国家已开始禁止在食品中添加中添加苏丹丹红一号；我国一号；我国1996年出台的食品添年出台的食品添加加剂使用使用卫生生标准中不包含准中不包含苏丹丹红及其系列色及其系列色素（素（标准中没有公布的添加准中没有公布的添加剂不准用于食品中）。不准用于食品中）。2003年年6月，欧盟月，欧盟规定所有定所有进口的辣椒及其制品口的辣椒及其制品必必须检测苏丹丹红项目，确定未添加后方可目，确定未添加后方可进口，口，并要求成并要求成员国国对市市场上上销售的辣椒及其制品售的辣椒及其制品进行行随机抽随机抽样检测。29.2005年年3月，国内已月，国内已经证实的的“涉涉红”产品名品名单：肯德基肯德基肯德基新奥肯德基新奥尔良烤翅、新奥良烤翅、新奥尔良烤良烤鸡腿堡腿堡调料料亨氏美味源亨氏美味源(广州广州)食品有限公司食品有限公司美味源桂林辣椒油和美味源金美味源桂林辣椒油和美味源金唛桂桂林辣椒林辣椒酱麦当麦当劳麦当麦当劳西部西部烧烤烤调味汁味汁调味料味料麦当麦当劳地戎芥末蛋黄地戎芥末蛋黄酱调味料味料麦当麦当劳凯馓调味汁味汁(普通脂肪型普通脂肪型)调味料味料麦当麦当劳凯馓调味汁味汁(低脂肪型低脂肪型)调味料味料广州田洋食品有限公司广州田洋食品有限公司田洋牌田洋牌“辣椒辣椒红一号一号”复合食品添加复合食品添加剂河北邯河北邯郸中中进天然色素有限公司天然色素有限公司辣椒精辣椒精珠海市珠海市“公仔公仔DOLL”牌牌产品品公仔日式碗面公仔日式碗面牛肉味公仔米粉牛肉味公仔米粉劲辣牛肉味公仔面辣牛肉味公仔面公仔拉面屋公仔拉面屋红烧牛肉牛肉(两种两种)公仔拉面屋公仔拉面屋红油排骨油排骨牛肉味公仔面牛肉味公仔面长沙沙“坛坛乡”调料食品有限公司料食品有限公司“坛坛乡”牌牌风味辣椒味辣椒萝卜含有卜含有“苏丹丹红四号四号”30.2006年年11月，河北白洋淀的月，河北白洋淀的“红心心鸭蛋蛋”苏丹丹红事件事件2006年年12月，月，陕西出西出产辣椒面再辣椒面再现苏丹丹红31.食品中食品中苏丹丹红染料的染料的检测方法方法高效液相色高效液相色谱法法(GB/T196812005)范范围本本标准适用于食品中准适用于食品中苏丹丹红染料的染料的检测。本本标准准规定了食品中定了食品中苏丹丹红、苏丹丹红、苏丹丹红、苏丹丹红的高效液相色的高效液相色谱测定方法。定方法。方法最低方法最低检测限：限：苏丹丹红、苏丹丹红、苏丹丹红、苏丹丹红均均为10ug/kg。方法要点方法要点样品品经溶溶剂提取、固相萃取提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色化后，用反相高效液相色谱紫外可紫外可见光光检测器器进行色行色谱分析，采用外分析，采用外标法定量。法定量。32.样品品处理理1.红辣椒粉等粉状辣椒粉等粉状样品品称取称取1g5g（准确至（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入品于三角瓶中，加入10mL30mL正己正己烷，超声，超声5min，过滤，用，用10mL正己正己烷洗洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋液，用旋转蒸蒸发仪浓缩至至5mL以下，慢慢加入氧化以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，析柱中，为保保证层析析效果，在柱中保持正己效果，在柱中保持正己烷液面液面为2mm左右左右时上上样，在全程，在全程的的层析析过程中不程中不应使柱干涸，用正己使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗少量多次淋洗浓缩瓶，瓶，一并注入一并注入层析柱。控制氧化析柱。控制氧化铝表表层吸附的色素吸附的色素带宽宜小于宜小于0.5cm，待，待样液完全流出后，液完全流出后，视样品中含油品中含油类杂质的多少用的多少用10mL30mL正己正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己己烷淋洗液，用含淋洗液，用含5%丙丙酮的正己的正己烷液液60mL洗脱，收集、洗脱，收集、浓缩后，用丙后，用丙酮转移并定容至移并定容至5mL，经0.45m有机有机滤膜膜过滤后待后待测。33.2.红辣椒油、火辣椒油、火锅料、奶油等油状料、奶油等油状样品品称取称取0.5g2g（准确至（准确至0.001g）样品于小品于小烧杯中，加入适量杯中，加入适量正己正己烷溶解（溶解（约1mL10mL），），难溶解的溶解的样品可于正己品可于正己烷中加温溶解。按中加温溶解。按1中中“慢慢加入到氧化慢慢加入到氧化铝层析柱析柱过滤后待后待测”操作。操作。3.辣椒辣椒酱、番茄沙司等含水量、番茄沙司等含水量较大的大的样品品称取称取10g20g（准确至（准确至0.01g）样品于离心管中，加品于离心管中，加10mL20mL水将其分散成糊状，含增稠水将其分散成糊状，含增稠剂的的样品多加水，加入品多加水，加入30mL正己正己烷：丙：丙酮=3：1，匀，匀浆5min,3000rpm离心离心10min,吸出正己吸出正己烷层，于下，于下层再加入再加入20mL2次正己次正己烷匀匀浆，离心，合并离心，合并3次正己次正己烷，加入无水硫酸，加入无水硫酸钠5g脱水，脱水，过滤后于后于旋旋转蒸蒸发仪上蒸干并保持上蒸干并保持5分分钟，用，用5mL正己正己烷溶解残渣后，溶解残渣后，按按1中中“慢慢加入到氧化慢慢加入到氧化铝层析柱析柱过滤后待后待测”操作。操作。34.4.香香肠等肉制品等肉制品称取粉碎称取粉碎样品品10g20g（准确至（准确至0.01g）于三角）于三角瓶中，加入瓶中，加入60mL正己正己烷充分匀充分匀浆5min，滤出清出清液，再以液，再以20mL2次正己次正己烷匀匀浆，过滤。合并。合并3次次滤液，加入液，加入5g无水硫酸无水硫酸钠脱水，脱水，过滤后于旋后于旋转蒸蒸发仪上蒸至上蒸至5mL以下，按以下，按1中中“慢慢加入到氧化慢慢加入到氧化铝层析柱中析柱中过滤后待后待测”操作。操作。35.推荐色推荐色谱条件条件1.仪器条件器条件 色色谱柱：柱：ZorbaxSB-C183.5m4.6mm150mm（或相当型号色（或相当型号色谱柱）柱）流流动相：溶相：溶剂A0.1%甲酸的水溶液：乙甲酸的水溶液：乙腈=85：15;溶溶剂B0.1%甲酸的乙甲酸的乙腈溶液：丙溶液：丙酮=80：20 梯度洗脱：流速梯度洗脱：流速:1mL/min柱温：柱温：30检测波波长：苏丹丹红478nm；苏丹丹红、苏丹丹红、苏丹丹红520nm；于；于苏丹丹红出峰后切出峰后切换。进样量量10l。2.标准曲准曲线吸取吸取标准准储备液液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，用正己，用正己烷定容至定容至25mL，此，此标准系列准系列浓度度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/mL,绘制制标准曲准曲线。3.计算算按公式（按公式（1）计算算苏丹丹红含量含量R=CV/M（1）R样品中品中苏丹丹红含量，含量，单位位为毫克每千克（毫克每千克（mg/kg）；）；C由由标准曲准曲线得出的得出的样液中液中苏丹丹红的的浓度度(g/mL)；V样液定容体液定容体积，单位位为毫升（毫升（mL）；）；M样品品质量，量，单位位为克（克（g）。）。36.苏丹丹红标准色准色谱图37.孔雀石绿一种一种带有金属光有金属光泽的的绿色色结晶体，又名碱性晶体，又名碱性绿、孔雀、孔雀绿，易溶于水，溶液呈易溶于水，溶液呈蓝绿色。孔雀石色。孔雀石绿是一种有效是一种有效杀灭霉霉菌的染料菌的染料类药物，具有相当好的物，具有相当好的杀真菌效果。由于真菌效果。由于鱼类在运在运输中易中易发生碰撞，造成生碰撞，造成鱼鳞脱落而引起脱落而引起鱼体真菌感体真菌感染，以致出染，以致出现霉霉烂、死亡等、死亡等现象，孔雀石象，孔雀石绿恰恰可以治恰恰可以治疗这些些鱼类碰撞碰撞伤。因价格廉、容易得、用量少、。因价格廉、容易得、用量少、疗效效高，在高，在过去水去水产养殖疾病防治中曾被广泛使用。一些不养殖疾病防治中曾被广泛使用。一些不法商法商贩滥用孔雀石用孔雀石绿，包括在运，包括在运输前使用孔雀石前使用孔雀石绿溶液溶液对车厢进行消毒，不少行消毒，不少储放活放活鱼的的鱼池也采用池也采用这种方式种方式进行消毒。行消毒。38.科研科研结果表明，孔雀石果表明，孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌、具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突致畸、致突变等副作用，有等副作用，有“苏丹丹红第二第二”之称。之称。鉴于于孔雀石孔雀石绿的危害性，美国、英国、日本等的危害性，美国、英国、日本等许多国家已禁多国家已禁止将其用于水止将其用于水产养殖养殖业。我国也于。我国也于2002年年5月将孔雀石月将孔雀石绿列入食品列入食品动物禁用的物禁用的兽药及其化合物清及其化合物清单中，禁中，禁止用于所有食品止用于所有食品动物。物。但是但是,事事实上包括我国和英国在内的上包括我国和英国在内的许多禁用孔雀石多禁用孔雀石绿的国家，从的国家，从对市市场上上销售的售的鱼类等水等水产品中孔雀石品中孔雀石绿的的监测情况来看情况来看,仍有在仍有在鱼场中非法使用孔雀石中非法使用孔雀石绿的的现象。象。39.被孔雀石被孔雀石绿浸浸过的甲的甲鱼 40.水水产品中孔雀石品中孔雀石绿和和结晶紫残留量的晶紫残留量的测定定GB/T198572005范范围本本标准准规定了水定了水产品中孔雀石品中孔雀石绿及其代及其代谢物物隐色孔色孔雀石雀石绿（Leucomalachitegreen）、）、结晶紫及其晶紫及其代代谢物物隐色色结晶紫晶紫(Leucocrystalviolet)残留量的残留量的液相色液相色谱-串串联质谱和高效液相色和高效液相色谱的的测定方法。定方法。本本标准适用于准适用于鲜活水活水产品及其制品中孔雀石品及其制品中孔雀石绿及其及其代代谢物物隐色孔雀石色孔雀石绿、结晶紫及其代晶紫及其代谢物物隐色色结晶晶紫残留量的紫残留量的检验。41.原理原理试样中的残留物用乙中的残留物用乙腈-乙酸乙酸铵缓冲溶液提取，冲溶液提取，乙乙腈再次提取后，液液分配到二再次提取后，液液分配到二氯甲甲烷层，经中中性氧化性氧化铝和阳离子固相柱和阳离子固相柱净化后用液相色化后用液相色谱-串串联质谱法法测定，内定，内标法定量。法定量。液相色液相色谱-串串联质谱法法42.样品制品制备1鲜活水活水产品品a)提取提取称取称取5.00g已已捣碎碎样品于品于50mL离心管中，加入离心管中，加入200L混混合内合内标标准溶液，加入准溶液，加入11mL乙乙腈，超声波振，超声波振荡提取提取2min，8000r/min匀匀浆提取提取30s，4000r/min离心离心5min，上清液，上清液转移至移至25mL比色管中；另取一比色管中；另取一50mL离心管离心管加入加入11mL乙乙腈，洗，洗涤匀匀浆刀刀头10s，洗，洗涤液移入前一离液移入前一离心管中，用玻棒心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，漩碎离心管中的沉淀，漩涡混匀器上振混匀器上振荡30s，超声波振，超声波振荡5min，4000r/min离心离心5min，上清，上清液合并至液合并至25mL比色管中，用乙比色管中，用乙腈定容至定容至25.0mL，摇匀匀备用。用。43.b)净化化移取移取5.00mL样品溶液加至已活化的中性氧化品溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，用柱上，用KD浓缩瓶接收流出液，瓶接收流出液，4mL乙乙腈洗洗涤中性氧化中性氧化铝柱，收集全部流出液，柱，收集全部流出液，45旋旋转蒸蒸发至至约1mL，残液用乙，残液用乙腈定容至定容至1.00mL，超声，超声振振荡5min,加入加入1.0mL5mmol/L乙酸乙酸铵，超声，超声振振荡1min，样液液经0.2m滤膜膜过滤后供液相色后供液相色谱-串串联质谱测定。定。44.2加工水加工水产品品c)提取提取称取称取5.00g已已捣碎碎样品于品于100mL离心管中，加入离心管中，加入200L混混合内合内标标准溶液，依次加入准溶液，依次加入1mL盐酸酸羟胺、胺、2mL对-甲苯甲苯磺酸、磺酸、2mL乙酸乙酸铵缓冲溶液和冲溶液和40mL乙乙腈，匀，匀浆2min(10000r/min)，离心，离心3min(3000r/min)，将上清液，将上清液转移到移到250mL分液漏斗中，用分液漏斗中，用20mL乙乙腈重复提取残渣一次，重复提取残渣一次，合并上清液。于分液漏斗中加入合并上清液。于分液漏斗中加入30二二氯甲甲烷、35mL水，振水，振摇2min，静置分，静置分层，收集下，收集下层有机有机层于于150mL梨梨形瓶中，再用形瓶中，再用20mL二二氯甲甲烷萃取一次，合并二萃取一次，合并二氯甲甲烷层，45旋旋转蒸蒸发近干。近干。45.d)净化化将中性氧化将中性氧化铝柱串接在阳离子交柱串接在阳离子交换柱上方。柱上方。6mL乙乙腈分三分三次（每次次（每次2mL），用旋），用旋涡震震荡器器涡旋溶解上述提取物，并旋溶解上述提取物，并依次依次过柱，控制阳离子交柱，控制阳离子交换柱流速不超柱流速不超过0.6mL/min，再，再用用2mL乙乙腈淋洗中性氧化淋洗中性氧化铝柱后，弃去中性氧化柱后，弃去中性氧化铝柱。依柱。依次用次用3mL2%（v/v）甲酸溶液、）甲酸溶液、3mL乙乙腈淋洗阳离子交淋洗阳离子交换柱，弃去流出液。用柱，弃去流出液。用4mL5%（v/v）乙酸）乙酸铵甲醇溶液甲醇溶液洗洗脱，洗脱流速脱，洗脱流速为1mL/min，用，用10mL刻度刻度试管收集洗脱液，管收集洗脱液，用水定容至用水定容至10.0mL，样液液经0.2m滤膜膜过滤后供液相色后供液相色谱-串串联质谱测定。定。46.液相色液相色谱-串串联质谱条件条件a)色色谱柱：柱：C18柱，柱，50mm2.1mm（i.d.），粒度），粒度3m；b)流流动相：乙相：乙腈+5mmol/L乙酸乙酸铵=75+25(v/v)；c)流速：流速：0.2mL/min；d)柱温：柱温：35；e)进样量：量：10L；f)离子源：离子源：电喷雾ESI，正离子；，正离子；g)扫描方式：多反描方式：多反应监测MRM；h)雾化气、窗帘气、化气、窗帘气、辅助加助加热气、碰撞气均气、碰撞气均为高高纯氮气；使用前氮气；使用前应调节各气体流量各气体流量以使以使质谱灵敏度达到灵敏度达到检测要求；要求；i)喷雾电压、去集簇、去集簇电压、碰撞能等、碰撞能等电压值应优化至最化至最优灵敏度；灵敏度；j)监测离子离子对：孔雀石：孔雀石绿m/z329/313（定量离子）、（定量离子）、329/208；隐色孔雀石色孔雀石绿m/z331/316（定量离子）、（定量离子）、331/239;结晶紫晶紫m/z372/356（定量离子）、（定量离子）、372/251；隐色色结晶紫晶紫m/z374/359（定量离子）、（定量离子）、374/238；氘代孔雀石代孔雀石绿m/z334/318（定量离子）（定量离子）;氘代代隐色孔雀石色孔雀石绿m/z337/322（定量离子）。（定量离子）。47.液相色液相色谱-串串联质谱测定定按照液相色按照液相色谱-串串联质谱条件条件测定定样品和混合品和混合标准准工作溶液，以色工作溶液，以色谱峰面峰面积按内按内标法定量，孔雀石法定量，孔雀石绿和和结晶紫以晶紫以氘代孔雀石代孔雀石绿为内内标物物计算，算，隐色色孔雀石孔雀石绿和和隐色色结晶紫以晶紫以氘代代隐色孔雀石色孔雀石绿为内内标物物计算。算。在上述色在上述色谱条件下孔雀石条件下孔雀石绿、氘代孔代孔雀石雀石绿、结晶紫、晶紫、氘代代隐色孔雀石色孔雀石绿、隐色孔雀色孔雀石石绿和和隐色色结晶紫的参考保留晶紫的参考保留时间分分别为2.27min、2.30min、2.88min、5.21min、5.31min、5.61min。48.孔雀石孔雀石绿、隐色孔雀石色孔雀石绿、结晶紫、晶紫、隐色色结晶紫、晶紫、氘代孔雀石代孔雀石绿和和氘代代隐色孔雀石色孔雀石绿标准的离子流准的离子流图 49.液相色液相色谱-串串联质谱确确证按照液相色按照液相色谱-串串联质谱条件条件测定定样品和品和标准工准工作溶液，分作溶液，分别计算算样品和品和标准工作溶液中非定量准工作溶液中非定量离子离子对与定量离子与定量离子对色色谱峰面峰面积的比的比值，仅当两当两者数者数值的相的相对偏差小于偏差小于25%时方可确定两者方可确定两者为同同一物一物质。50.高效液相色高效液相色谱法法原理原理试样中的残留物用乙中的残留物用乙腈-乙酸乙酸盐缓冲混合液提取，冲混合液提取，乙乙腈再次提取后，液液分配到二再次提取后，液液分配到二氯甲甲烷层并并浓缩，经酸性氧化酸性氧化铝柱柱净化后，高效液相色化后，高效液相色谱-PbO2柱柱后衍生后衍生测定，外定，外标法定量。法定量。51.样品制品制备1.提取提取称取称取5.00g样品于品于50mL离心管内，加入离心管内，加入1.5mL20%的的盐酸酸羟胺溶液、胺溶液、2.5mL1.0mol/L的的对-甲苯磺酸溶液、甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸乙酸盐缓冲溶液，用匀冲溶液，用匀浆机以机以10000r/min的速度的速度均均质30s，加入，加入10mL乙乙腈剧烈震烈震摇30s。加入。加入5g酸性氧酸性氧化化铝，再次震，再次震荡30s。3000r/min离心离心10min。把上清。把上清液液转移至装有移至装有10mL水和水和2mL二甘醇的二甘醇的100mL离心管离心管中。然后在中。然后在50mL离心管中加入离心管中加入10mL乙乙腈，重复上述操，重复上述操作，合并乙作，合并乙腈层。52.2.净化化在离心管中加入在离心管中加入15mL二二氯甲甲烷,振振荡10s，3000r/min离心离心10min，将二将二氯甲甲烷层转移至移至100mL的梨形的梨形瓶中，再用瓶中，再用5mL乙乙腈、10mL二二氯甲甲烷重复上述操作一重复上述操作一次，合并二次，合并二氯甲甲烷层于于100mL梨形瓶中。梨形瓶中