抗风湿及镇痛类中成药和保健品非法添加化学物质的检测基础方法专项研究进展修改.doc

抗风湿类及镇痛类中药制剂中非法添加化学物质检测方法研究进展申兰慧 （江苏省无锡药品检验所，无锡，214021）摘要 对抗风湿类及解热镇痛类中药制剂中非法添加化学物质分析方法进行综述。现在主流分析方法关键是薄层色谱法、高效液相色谱法、液质联用。并参考相关文件，依据分析方法对多种抗风湿类及解热镇痛化学物质分别进行叙述。关键词 中药制剂 非法添加 化学物质 检测方法 Progress of Detection Methods for Chemical Materials illegally added in Antirheunatic and Analgesia Traditional Chinese Medicine Shen Lanhui （Wuxi Institute for Drug control Jiangsu Province, Wuxi，214021）ABSTRACT The author overviewed the analytical methods for chemical materials illegally added in Antirheunatic and Analgesia Traditional Chinese Medicine .The main current analytical method were TLC, HPLC, and LC-MS.The author referred correlate documents and explained Antirheunatic and Analgesia chemical materials separately according the analytical methods.KEY WORDS Traditional Chinese Medicine, illegally added, chemical materials, detection methods 多年来，中成药及保健品非法添加化学物质越来越引发大家关注，尤其是抗风湿类及解热镇痛类情况比较突出，因为中国风湿类及骨刺骨痛人群比较多，需要患者一直服药，不法药商为了谋取非法利益，经过非法加入化学药品,使疗效缓解中成药含有了临时速效、高效或特效,增加销量,获取非法高额利润。同时,因为中成药成份复杂,药品标准不可能要求和化学药品一样进行“全成份”检测,添加西药不易被识别,隐蔽性较强,造成这些“药品”轻易蒙混过关,逃避了监督检验。笔者就近几年来结合自己日常检验及文件资料对抗风湿类及解热镇痛类中成药和保健品中非法添加西药成份分析方法进行综述，方便为相关药品监督管理部门立即发觉这种非法添加行为提供技术支持，确保患者用药安全。一、 可能添加抗风湿类及解热镇痛类西药1、糖皮质激素药：氢化可松、地塞米松、曲安奈德、醋酸泼尼松龙、醋酸氢化可松、醋酸泼尼松、醋酸氢化泼尼松、醋酸可松、醋酸地塞米松、醋酸曲安奈德、醋酸氟轻松。 收稿日期 -3-19 修回日期 -3-252、解热镇痛抗炎药：阿司匹林、布洛芬、萘普生、芬布芬、布洛芬、吲哚美辛、双氯芬酸钠、吡罗昔康、美洛昔康、对乙酰氨基酚、盐酸罗通定。二、 分析方法1、 薄层色谱法 （TLC） TLC检测灵敏度差，不易定量，但试验操作简便快速，故能够作为初筛方法，为HPLC、HPLC-MS进行深入确证提供参考。 夏瑞等1采取氯仿-甲醇(9：1)提取样品后，分别点于同一硅胶G薄层板，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385：60：15：2)为展开剂，展开后，以碱性四氮唑蓝试液为显色剂，同时有效地分离5种糖皮质激素，共检验十几批诊疗风湿性关节炎和哮喘中药制剂，有两批中检出含有醋酸泼尼松，一样采取MSMS进行验证，本法检测阳性反应，经质谱验证确定为阳性。周镒等2采取甲醇提取样品后，分别点于同一4.68%磷酸二氢钠溶液制备硅胶GF254薄层板，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15：5：1)为展开剂，检出三批天麻胶囊中非法掺入吲哚美辛。刘元瑞等3采取薄层色谱联合质谱(TLC-MS)技术检测中药制剂中含有多个化学药品，采取薄层色谱法初筛，利用薄层制备色谱技术将可疑斑点分离后进行质谱检测，并和对照品质谱图比较确定，在延香镇痛胶囊检出双氯芬酸钠、卡马西平、盐酸曲马多。2、 HPLC法 HPLC专属性强，具高效、快速、适应面广，尤其是多年来采取二极管阵列检测器（DAD），提供了识别添加化学物质成份科学性和正确性。现在HPLC仪已经比较普及使用，所以建立检验方法一旦成熟，将成为现在这类研究中最为普遍采取方法。郭瑞峰等4采取反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)同时分离测定中药保健品中l0种常见激素成份。方法是：色谱柱为ODS C18柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为240 nm，能够快速筛查出纯中药制剂或食用保健品中激素类西药成份。夏瑞等5建立抗风湿类中药制剂中违法添加糖皮质激素检测方法，以Diamond C 18色谱柱，流动相A为水-四氢呋喃(100：1)，B为乙腈-水-四氢呋喃(80：20：1)梯度洗脱，检测波长240nm。结果表明在该液相条件下，能同时有效分离13种糖皮质激素，经过比较样品和对照品色谱保留时间和其紫外光谱信息，和样品中峰纯度检验，并经MS-MS验证，证实样品中含有醋酸泼尼松。庄晓庆6利用HPLC法测定天麻胶囊中非法掺入吲哚美辛，以Kromasil C8柱为色谱柱，0.1mol/L 冰醋酸溶液-乙腈(52.5：47.5) 为流动相，检测波长为228 nm，经过TLC法发觉样品在和吲哚美辛对照品对应位置上有相同颜色斑点，初步确定样品中含有吲哚美辛。再经过二极管阵列检测器对供试品色谱图中和吲哚美辛对照品峰保留时间基础一致色谱峰进行了紫外光区光谱检测，二者光谱行为一致。深入确定供试品中含有吲哚美辛，并经过方法学验证，测定三批天麻胶囊中掺入吲哚美辛量分别为2.56mg/粒，2.96mg/粒，2.68 mg/粒。徐灿辉等7利用HPLC法测定神风液中非法掺加双氯芬酸钠，以Kromasil C18柱为色谱柱，流动相为0.025 mo1/L磷酸液(用三乙胺调整pH值至3.0士0.05)一乙腈(40：60)，检测波长为276 nm。该方法能灵敏、正确地对神风液中掺加双氯芬酸钠进行定量分析，专属性较强，一样也能适适用于其它药品或食品中非法掺加双氯芬酸钠定量分析。3、紫外扫描分析法（UV法）王世清8采取TLC法，成条带状点样，在紫外灯（254nm）下刮下和醋酸泼尼松对照品对应位置上样品斑点，加无水乙醇溶解，在200300nm范围内进行扫描，结果样品溶液和醋酸泼尼松对照品在229235nm之间全部有最大吸收。4、液相色谱-质谱法（HPLC-MS）HPLC-MS是目前判别中药制剂中掺入化学药品有效分析方法之一，中药制剂化学成份复杂，要取得正确结果就必需采取专属性高分析手段，HPLC-MS恰好含有这一优势，因为其分析不需要实现待测物质和干扰组分完全色谱分离，能够经过对质荷比筛选得到单一组分色谱图，同时还能够经过二级质谱分析对结构做深入确证，但现在液相色谱-质谱联用仪价格昂贵，尚不能普及使用。 姜建国等9采取液相色谱-质谱联使用方法检测中药是否添加激素，样品以Venusil MP C18柱色谱柱进行分离，以0.01mo1/L醋酸铵-乙腈(45：55)为流动相，二极管检测器扫描表明，醋酸泼尼松对照品溶液和供试品溶液中对应紫外光谱图一致，并得到对应一级质谱准分子离子。综合色谱保留时间、准分子离子和紫外光谱三方面信息，证实风湿筋骨康胶囊非法添加了醋酸泼尼松。韩加怡等10利用LC-MS和AA等方法检测确定中成药豨莶风湿片中掺有双氯芬酸钠，即经过TLC，HPLC，LC-MS，AA四种色谱和光谱联合检测，逐步证实中成药豨莶风湿片中掺有双氯芬酸钠。刘福艳等11采取液相色谱-离子阱质谱联使用方法对6种抗风湿中药制剂提取液进行分析，选择Agilent C18 柱，以 0.02 mol/L醋酸铵-1% 醋酸溶液-甲醇(32：3：65) 为流动相，经过相对分子质量、一级及二级质谱碎片信息、液相色谱保留时间和紫外光谱四方面信息对抗风湿制剂中非法掺入化学物质进行定性判别，结果6批抗风湿类中药，3批检出掺有萘普生，其中2批检出同时掺有吲哚美辛。三、我所近几年来在抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质检出情况以来，我所在中成药及保健品非法添加化学物质方面很关注，以日常筛查及建立补充检验方法及项目来对可疑中成药及保健品进行检测，对抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质检测情况见表1表1 无锡所在抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质情况年份品种批号检出可疑成份检测方法天麻胶囊050802盐酸罗通定TLC、HPLC、LC-MS天蚕镇痛片875043，875016双氯芬酸钠TLC、HPLC抗痛风中成药无（群众举报）醋酸泼尼松TLC、HPLC美诺骨德参酮片080501美洛昔康TLC、HPLC抗风湿胶囊无证经营萘普生、吲哚美辛、双氯芬酸钠、布洛芬、吡罗昔康TLC、HPLC追风透骨丸无证经营吲哚美辛、布洛芬、醋酸泼尼松TLC、HPLC为提升检出效率，药检工作者逐步探索出同时测定多个非法添加化学成份液相系统，笔者针对抗风湿及解热镇痛类中成药和保健品非法添加化学物质建立了23个液相系统，将可能添加化学物质进行有效分析。在建立中药非法添加化学药品检测方法时，笔者根据以下思绪进行分析检测：首先了解非法添加化学成份及基质信息，依据中成药处方和药效、临床上提供毒副作用、群众举报等方面信息初步确定非法添加化学成份种类及其理化性质。其次，寻求目标化学物质对照品或原料，初步确立分析手段。最终进行样品分析，和对照品或原料比较，相互验证，确证阳性样品。总而言之，多年来在中药制剂中非法掺入化学药品以醋酸泼尼松、双氯芬酸钠、吲哚美辛、萘普生、吡罗昔康为常见。在检验方法或技术方面，大部分文件均采取TLC、HPLC、HPLC-MS等技术，TLC操作简便、成本较低，易在基层推广，可用于初步筛选可疑样品；UV法可作为有力判别工作；经过HPLC分离样品，用二极管阵列检测器检测，可基础确定样品中是否含有某一化学成份；有条件者再采取HPLC-MS联用或直接电喷雾三重四级杆质谱技术等手段深入分析，将更深入确保结果正确无误。灵活利用多种检测方法，在以后检验工作中有针对性地进行检测，就能够愈加快更准地发觉非法添加物质，为监管部门提供技术支持。但作为出具检验汇报书药品检验部门则必需严格按国家食品药品监督管理局同意方法进行检验，方可判定是否非法添加化学物质，现在大多以HPLC-MS-MS联使用方法作为关键检验手段。但因为补充检验方法及项目含有一定时效性，在具体工作中，仅依靠国家食品药品监督管理局授权方法是远远不够，提议国家食品药品监督管理局出台相关中成药非法添加化学药品检验方面指导标准，使各级药品检验机构在工作中能够灵活把握，避免出现药检机构对于使用非标方法检测出来结果无法出具正式汇报而使非法添加化学药品中成药继续逍遥法外尴尬局面12。参考文件1 夏瑞,董素英,车宝泉 薄层色谱法快速判别中药制剂中糖皮质激素J.药品分析杂志, ，28（3）：470-4712 周镒,许 啸 ,龚旭东等 薄层色谱法测定天麻胶囊中掺入吲哚美辛J. 药学和临床研究, ，16（2）：161-1623 刘元瑞,葛海生,赵康虎等 应用TLC-MS技术检测镇痛中药制剂中添加3种化学药品J. 中国药学杂志, ，43（22）：1747-17504 郭瑞峰,郄冰冰 ,何建峰 反相高效液相色谱法检验中药保健品中激素类西药成份J.中国药业,，16 (5 ):23-245 夏瑞,车宝泉 RP-HPLC方法判别中药制剂中糖皮质激素J.药品分析杂志,，28（2）：316-3186 庄晓庆 HPLC法测定天麻胶囊中非法掺入吲哚美辛J.中国药师,，10（1）：316-3187 徐灿辉,何维为 高效液相色谱法测定神风液中掺加双氯芬酸钠J.中国药业,，15（21）：37-388 王世清 痹效胶囊中醋酸泼尼松检出J. 中国药师,，5 (10 ):603-6049 姜建国,张西如 液相色谱-质谱联使用方法检测非法制剂中醋酸泼尼松J. 中国药业, ，17 (21 ):28-2910 韩加怡,罗金文,郑国钢等 用LC/MS和AA等方法检测确定中成药豨莶风湿片中掺有双氯芬酸钠J. 中国药品标准,，8 (4 ):60-6311 刘福艳,谢元超 ,李毓秋等 液相色谱-离子阱质谱联使用方法检测抗风湿类中药制剂中非法掺入萘普生、吲哚美辛J.药品分析杂志, ，28 (8 ):1276-127912 刘福艳,李军，谢元超等 中成药中非法添加化学药品现实状况和分析检测对策J. 中国药事, ,22 (12 ):1067-1070