高效液相色谱-紫外检测法同时测定类鼻疽患者血浆中亚胺培南、美罗培南和头孢他啶的浓度.pdf
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1、中国药物应用与监测 2024 年2月 第21卷第1期 Chin J Drug Appl&Monit,Feb 2024,Vol.21,No.1 34 高效液相色谱-紫外检测法同时测定类鼻疽患者 血浆中亚胺培南、美罗培南和头孢他啶的浓度符香香1,钟莉莉2,陈 君2,柴 芳3,云 雄2,吴 华4,王 敏21海南医学院药学院,海口 571199;2海南省人民医院(海南医学院附属海南医院)药学部,海口 570311;3三亚市人民医院药学部,三亚 572000;4海南省人民医院(海南医学院附属海南医院)检验科,海口 570311通信作者:王敏,Email:摘要目的 建立一种快速、经济的高效液相色谱-紫外检
2、测法(HPLC-UV),用于同时测定人血浆中亚胺培南、美罗培南和头孢他啶的药物浓度。方法 采用Millipore 10KD超滤离心去蛋白,使用互为内标法,色谱柱为SunFire-C18柱(4.6 mm250 mm,5 m);预柱为 C18柱(4.0 mm2.1 mm,5 m),流动相为0.1 molL-1的3-(N-吗啡啉)丙磺酸(pH=7.0)和乙腈,梯度洗脱,检测波长299 nm,流速1.0 mLmin-1,运行时间30 min,进样体积30 L。结果 亚胺培南、美罗培南和头孢他啶的保留时间分别为6.699 min、10.795 min和8.722 min。血浆内源性物质对样品的测定无干扰
3、,峰形良好。该方法具有良好的线性、准确度和精密度。不同浓度的样品在 20 反复冻融、20 长期冷冻和4 (48 h)下均表现出了较高的稳定性。结论 该方法操作成本低、专属性强、分离效果好,可用于类鼻疽患者血浆中亚胺培南、美罗培南和头孢他啶治疗药物浓度的测定。关键词类鼻疽;亚胺培南;美罗培南;头孢他啶;高效液相色谱-紫外检测法基金项目 三亚市高校及医疗机构专项科技计划项目(2021 GXYL14);海 南 省 重 点 研 发 计 划 项 目(ZDYF2022SHFZ050、ZDYF 2019141);海南省自然科学基金面上项目(821MS130);海南省卫生健康行业科研项目(22A200229)
4、DOI 10.3969/j.issn.1672-8157.2024.01.009Simultaneous determination of the plasma concentrations of imipenem,meropenem,and ceftazidime by HPLC-UV method in patients with melioidosis Fu Xiang-xiang1,Zhong Li-li2,Chen Jun2,Chai Fang3,Yun Xiong2,Wu Hua4,Wang Min21School of Pharmacy,Hainan Medical Univer
5、sity,Haikou 571199,China;2Department of Pharmacy,Hainan General Hospital(Hainan Affiliated Hospital of Hainan Medical University),Haikou 570311,China;3Department of Pharmacy,Sanya Peoples Hospital,Sanya 572000,China;4Department of Laboratory Medicine,Hainan General Hospital(Hainan Affiliated Hospita
6、l of Hainan Medical University),Haikou 570311,ChinaCorrespongding author:Wang Min,Email:AbstractObjective To develop a rapid and cost-effective method of high performance liquid chromatography-ultraviolet detection(HPLC-UV)for the simultaneous determination of the plasma concentrations of imipenem,m
7、eropenem and ceftazidime in human plasma.Methods The protein was removed by Millipore 10KD ultrafiltration centrifugation,and the chromatographic column was SunFire C18 column(4.6 mm 250 mm,5m).The pre-column was C18 column(4.0 mm 2.1 mm,5m),and the mobile phase was 0.1 molL-1 3-(N-morpholino)propan
8、esulfonic acid and acetonitrile with pH 7.0.Samples were gradiently eluted with the flow rate of 1.0 mLmin-1 for 30 minutes and detected at the wavelength of 299 nm.The injection volume was 30L.Results The retention time of imipenem,meropenem and ceftazidime were 6.699 min,10.795 min and 8.722 min,r
9、espectively.The peak form was pleasing without disturbance of the endogenous components in plasma.The method showed good accuracy,precision,and linear relationship.The samples with different concentrations showed high stability at 20 and 4.Conclusion The method has low operation cost,strong specific
10、ity and good separation effect,which can be used for routine determination of the plasma concentrations of imipenem,meropenem and ceftazidime in patients with melioidosis.Key WordsMelioidosis;Imipenem;Meropenem;Ceftazidime;High performance liquid chromatography-ultraviolet detection 中国药物应用与监测 2024 年
11、2月 第21卷第1期 Chin J Drug Appl&Monit,Feb 2024,Vol.21,No.1 35 亚胺培南、美罗培南和头孢他啶均属于-内酰胺类抗生素药物,是目前临床治疗类鼻疽强化期首选的抗菌药1。近年来,由于-内酰胺类抗生素耐药性的出现以及相关不良事件的发生率较高2-6,需要对类鼻疽患者血浆中抗生素进行治疗药物监测(TDM),确保足够的抗生素暴露,以实现安全、有效的个体化治疗方案。高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)是一种常用于生物基质样品中大多数抗生素的测定方法7-9。本文尝试建立一种同时测定类鼻疽患者血浆中亚胺培南、美罗培南和头孢他啶血浆浓度的HPLC-UV方法,为
12、此类患者强化期的个体化给药方案提供参考。1仪器与试剂1.1仪器 WATERS Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱仪(美国Waters公司);XS205du型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多);R20医用高速冷冻离心机(安新县白洋离心机厂);MDF-382E超低温保存箱(三洋科研医疗设备公司);UPC-5T超纯水机(成都超纯科技有限公司);XW-80A微型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂)。1.2试剂 亚胺培南(Toronto Research Chemicals,批号:1-MLM-65-1,含量:96.0%);美罗培南(中国食品药品检验研究院,批号:130506-201403
13、,含量:87.7%);头孢他啶(中国食品药品检验研究院,批号:130484-201806,含量:85.8%);3-(N-吗啡啉)丙磺酸(上海源叶生物科技有限公司,批号:Y28D9K78788,色谱纯);乙腈(色谱纯);氢氧化钠(分析纯)。空白血浆(添加肝素抗凝剂及稳定剂)取自海南省人民医院健康志愿者。2方法与结果2.1色谱条件 色谱柱:SunFire C18柱(4.6 mm 250 mm,5 m,WATERS);预柱:C18柱(4.0 mm 2.1 mm,5 m,依利特);流动相A:0.1 molL-1 的3-(N-吗啡啉)丙磺酸(pH=7.0);流动相B:乙腈;梯度洗脱;流速:1.0 mLm
14、in-1;波长:299 nm;运行时间 30 min;柱温:室温;进样体积:30 L;清洗模式:进样前及进样后;洗针液:90%乙腈。2.2溶液的配制2.2.1稳定剂与稀释液的配制配制0.5 molL-1及0.1 molL-1的3-(N-吗啡啉)丙磺酸溶液,取适量的 0.1 mol/L氢氧化钠分别调节pH值至7.0,即得稳定剂溶液和稀释液。两种溶液均保存在4 的冰箱中备用。2.2.2储备液的配制精密称取亚胺培南41.67 mg、美罗培南45.61 mg及头孢他啶46.62 mg,分别至独立的10 mL容量瓶中,加入适量稳定剂溶液,配置成最终浓度分别为4 000 gmL-1的储备液,储存至 20
15、冰箱中备用。2.2.3内标溶液的配制精密称取45.61 mg的美罗培南及23.31 mg的头孢他啶标准品,分别置于独立的10 mL与20 mL的容量瓶中,加适量稳定剂溶液,配置成浓度为4 000 gmL-1和1 000 gmL-1内标工作液,储存于 20 冰箱中备用(注:美罗培南作为待测物头孢他啶的内标物,头孢他啶作为待测物亚胺培南与美罗培南的内标物)。2.2.4标准曲线与质控工作溶液的配制亚胺培南、美罗培南及头孢他啶标准曲线工作溶液(10.0、20.0、100.0、200.0、500.0、1 000.0、2 000.0 和 4 000.0 gmL-1),亚胺培南/美罗培南质控工作溶液(10.
16、0、60.0、600.0和3 840.0 gmL-1)及头孢他啶质控工作溶液(10.0、200.0、2 400.0和3 840.0 gmL-1)由一定量的稀释液和储备液配制而成。2.3血浆样品处理 用EDTA-K2抗凝管采集约2 mL静脉血,置于冰盒中并立即转移到实验室,室温下以3 500 rmin-1的速度离心5 min分离出血浆。取400 L待测血浆置于预先加入的10 L内标溶液,再加入100 L稳定剂溶液,涡旋混匀,通过Millipore 10KD超滤管,15 000 rmin-1超速离心10 min后,取续滤液,即得。2.4专属性考察 取空白血浆、空白血浆+头孢他啶、空白血浆+亚胺培南
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