基因工程抗体和抗体工程PPT课件.ppt

基因工程抗体和抗基因工程抗体和抗体工程体工程一、噬菌体抗体库技术的一、噬菌体抗体库技术的一、噬菌体抗体库技术的一、噬菌体抗体库技术的基本方法基本方法基本方法基本方法获取目的基因获取目的基因获取目的基因获取目的基因抗体库技术的载体抗体库技术的载体抗体库技术的载体抗体库技术的载体淘筛淘筛淘筛淘筛表达与鉴定表达与鉴定表达与鉴定表达与鉴定二、噬菌体抗体库技术的二、噬菌体抗体库技术的特点特点 模拟天然全套抗体库模拟天然全套抗体库模拟天然全套抗体库模拟天然全套抗体库 避开了人工免疫和杂交瘤技术避开了人工免疫和杂交瘤技术避开了人工免疫和杂交瘤技术避开了人工免疫和杂交瘤技术 可获得高亲和力的人源化抗体可获得高亲和力的人源化抗体可获得高亲和力的人源化抗体可获得高亲和力的人源化抗体三、基因工程抗体表达三、基因工程抗体表达三、基因工程抗体表达三、基因工程抗体表达原核细胞表达原核细胞表达原核细胞表达原核细胞表达真核细胞表达真核细胞表达真核细胞表达真核细胞表达转基因植物表达转基因植物表达转基因植物表达转基因植物表达转基因动物表达转基因动物表达转基因动物表达转基因动物表达第五节第五节 抗体诊断试剂抗体诊断试剂一、血清学鉴定用的抗体类试剂一、血清学鉴定用的抗体类试剂一、血清学鉴定用的抗体类试剂一、血清学鉴定用的抗体类试剂鉴定病原菌的抗体试剂鉴定病原菌的抗体试剂鉴定病原菌的抗体试剂鉴定病原菌的抗体试剂 常用诊断血清的品种和用途常用诊断血清的品种和用途常用诊断血清的品种和用途常用诊断血清的品种和用途 沙门氏菌属诊断血清沙门氏菌属诊断血清沙门氏菌属诊断血清沙门氏菌属诊断血清 志贺氏菌属诊断血清志贺氏菌属诊断血清志贺氏菌属诊断血清志贺氏菌属诊断血清 病原性大肠埃希氏菌诊断血清病原性大肠埃希氏菌诊断血清病原性大肠埃希氏菌诊断血清病原性大肠埃希氏菌诊断血清诊断血清的制备步骤诊断血清的制备步骤制备细菌抗原制备细菌抗原免疫动物和制备抗体血清免疫动物和制备抗体血清诊断血清诊断方法诊断血清诊断方法乙型肝炎病毒表面抗原的乙型肝炎病毒表面抗原的乙型肝炎病毒表面抗原的乙型肝炎病毒表面抗原的 反向被动血凝诊断试剂反向被动血凝诊断试剂反向被动血凝诊断试剂反向被动血凝诊断试剂妊娠诊断试剂妊娠诊断试剂妊娠诊断试剂妊娠诊断试剂抗抗抗抗ABOABO血型系统血清血型系统血清血型系统血清血型系统血清二、免疫标记技术用的抗体二、免疫标记技术用的抗体二、免疫标记技术用的抗体二、免疫标记技术用的抗体类试剂类试剂类试剂类试剂荧光抗体诊断试剂荧光抗体诊断试剂荧光抗体诊断试剂荧光抗体诊断试剂 荧光抗体的制备荧光抗体的制备荧光抗体的制备荧光抗体的制备 免疫荧光测定方法免疫荧光测定方法免疫荧光测定方法免疫荧光测定方法免疫酶抗体诊断试剂免疫酶抗体诊断试剂免疫酶抗体诊断试剂免疫酶抗体诊断试剂 免疫酶染色法用抗体诊断试剂免疫酶染色法用抗体诊断试剂免疫酶染色法用抗体诊断试剂免疫酶染色法用抗体诊断试剂 酶免疫测定用抗体诊断试剂酶免疫测定用抗体诊断试剂酶免疫测定用抗体诊断试剂酶免疫测定用抗体诊断试剂 HBsAgHBsAg酶标诊断试剂酶标诊断试剂酶标诊断试剂酶标诊断试剂 HBeAgHBeAg酶标诊断试剂酶标诊断试剂酶标诊断试剂酶标诊断试剂HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）（甲型肝炎病毒抗原）酶标诊断试剂酶标诊断试剂测定测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗（人免疫缺陷病毒）抗 原的酶标抗体诊断试剂原的酶标抗体诊断试剂甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊）酶标抗体诊 断试剂断试剂癌胚抗原（癌胚抗原（CEA）的酶标抗体）的酶标抗体 诊断试剂诊断试剂放射免疫用抗体诊断试剂放射免疫用抗体诊断试剂 放射免疫技术是将放射性核素放射免疫技术是将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来建立的检测应的特异性结合起来建立的检测技术。技术。放射性核素标记抗体的方法：放射性核素标记抗体的方法：氯胺氯胺-T法法 Iodogen氏法氏法抗原的测定有：抗原的测定有：抗原的测定有：抗原的测定有：夹心法夹心法夹心法夹心法间接法间接法间接法间接法竟争法竟争法竟争法竟争法常用标记抗体试剂有常用标记抗体试剂有常用标记抗体试剂有常用标记抗体试剂有 HBsAgHBsAg放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体 诊断试剂诊断试剂诊断试剂诊断试剂HBeAg放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体 诊断试剂诊断试剂HAV抗原放射性核素标记抗体抗原放射性核素标记抗体 诊断试剂诊断试剂AFP放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体 诊断试剂诊断试剂CEA放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体 诊断试剂诊断试剂三、导向诊断药物三、导向诊断药物三、导向诊断药物三、导向诊断药物 放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体放射性核素标记抗体 肿瘤放射免疫显像肿瘤放射免疫显像肿瘤放射免疫显像肿瘤放射免疫显像 放射免疫显像优点：放射免疫显像优点：放射免疫显像优点：放射免疫显像优点：在体内确切肿瘤定位作用，准确性达在体内确切肿瘤定位作用，准确性达在体内确切肿瘤定位作用，准确性达在体内确切肿瘤定位作用，准确性达90%90%，灵敏度达，灵敏度达，灵敏度达，灵敏度达100%100%。在体内可检出在体内可检出在体内可检出在体内可检出0.5cm0.5cm大小的病灶，并大小的病灶，并大小的病灶，并大小的病灶，并可检出肺脑的转移灶。可检出肺脑的转移灶。可检出肺脑的转移灶。可检出肺脑的转移灶。小分子抗体易到达肿瘤部位，小分子抗体易到达肿瘤部位，小分子抗体易到达肿瘤部位，小分子抗体易到达肿瘤部位，可显著提高可显著提高可显著提高可显著提高N/NTN/NT值。值。值。值。抗体在肿瘤部位可保留抗体在肿瘤部位可保留抗体在肿瘤部位可保留抗体在肿瘤部位可保留6 6 6 69 9 9 9日日日日能观擦抗体在血中的半衰期和能观擦抗体在血中的半衰期和能观擦抗体在血中的半衰期和能观擦抗体在血中的半衰期和 可能出现的不良反应。可能出现的不良反应。可能出现的不良反应。可能出现的不良反应。放射免疫显像定位技术放射免疫显像定位技术 将抗肿瘤单克隆抗体（将抗肿瘤单克隆抗体（Ab）与二乙基）与二乙基三胺五乙酸（三胺五乙酸（DTPA）在体外偶联成）在体外偶联成Ab-DTPA，再注入体内后，就能与体，再注入体内后，就能与体内组织相结合。由于抗体分子量大，内组织相结合。由于抗体分子量大，需需3天完成。天完成。3天后注入放射性核素天后注入放射性核素In-113M（半衰期（半衰期100m），因），因DTPA是重是重金属离子络合剂，所以金属离子络合剂，所以In-113M可以结可以结合到合到DTPA分子上，使肿瘤组织显像。分子上，使肿瘤组织显像。这一过程在这一过程在2小时内可完成。小时内可完成。建立预定位技术需解决建立预定位技术需解决建立预定位技术需解决建立预定位技术需解决3 3 3 3个问题：个问题：个问题：个问题：抗体在肿瘤组织滞留要抗体在肿瘤组织滞留要抗体在肿瘤组织滞留要抗体在肿瘤组织滞留要7 7 7 7天以上。天以上。天以上。天以上。Ab-DTPAAb-DTPAAb-DTPAAb-DTPA偶联物比较稳定；偶联物比较稳定；偶联物比较稳定；偶联物比较稳定；内源性金属离子对内源性金属离子对内源性金属离子对内源性金属离子对DTPADTPADTPADTPA的封闭的封闭的封闭的封闭作用要小。作用要小。作用要小。作用要小。第六节第六节第六节第六节 抗体治疗药物抗体治疗药物抗体治疗药物抗体治疗药物以抗体为载体的导向治疗药物，还不成以抗体为载体的导向治疗药物，还不成以抗体为载体的导向治疗药物，还不成以抗体为载体的导向治疗药物，还不成熟。熟。熟。熟。一、放射性核素标记的抗体治疗药物一、放射性核素标记的抗体治疗药物一、放射性核素标记的抗体治疗药物一、放射性核素标记的抗体治疗药物抗体作为放射性核素的导向载体，标记抗体作为放射性核素的导向载体，标记抗体作为放射性核素的导向载体，标记抗体作为放射性核素的导向载体，标记操作简便用量小。放射性核素标记的操作简便用量小。放射性核素标记的操作简便用量小。放射性核素标记的操作简便用量小。放射性核素标记的抗体对肿瘤细胞杀伤较大。抗体对肿瘤细胞杀伤较大。抗体对肿瘤细胞杀伤较大。抗体对肿瘤细胞杀伤较大。二、抗癌药物偶联的抗体药物二、抗癌药物偶联的抗体药物二、抗癌药物偶联的抗体药物二、抗癌药物偶联的抗体药物常用的抗癌药物常用的抗癌药物常用的抗癌药物常用的抗癌药物 氨甲喋呤（氨甲喋呤（氨甲喋呤（氨甲喋呤（MTXMTX）、阿霉素）、阿霉素）、阿霉素）、阿霉素（ADMADM）、丝裂霉素（）、丝裂霉素（）、丝裂霉素（）、丝裂霉素（MMCMMC）等。）等。）等。）等。以人血浆白蛋白作为中间载体，可以人血浆白蛋白作为中间载体，可以人血浆白蛋白作为中间载体，可以人血浆白蛋白作为中间载体，可明显提高每分子抗体所携带的明显提高每分子抗体所携带的明显提高每分子抗体所携带的明显提高每分子抗体所携带的MTXMTX量，使体外细胞毒性体高二倍。量，使体外细胞毒性体高二倍。量，使体外细胞毒性体高二倍。量，使体外细胞毒性体高二倍。抗体类药物逆转耐药性抗体类药物逆转耐药性抗体类药物逆转耐药性抗体类药物逆转耐药性 肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药性（性（性（性（MDRMDR）。）。）。）。MDR MDR是由基因调控的，其编码蛋白是由基因调控的，其编码蛋白是由基因调控的，其编码蛋白是由基因调控的，其编码蛋白称为称为称为称为P P糖蛋白，其中糖蛋白，其中糖蛋白，其中糖蛋白，其中P170P170是与肿瘤耐是与肿瘤耐是与肿瘤耐是与肿瘤耐药相关的主要蛋白，由药相关的主要蛋白，由药相关的主要蛋白，由药相关的主要蛋白，由Mdr1Mdr1基因编基因编基因编基因编码，码，码，码，12801280氨基酸残基，分子量氨基酸残基，分子量氨基酸残基，分子量氨基酸残基，分子量170K170K。认为认为P蛋白是蛋白是ATP酶依赖性药泵，药物酶依赖性药泵，药物进入细胞后与进入细胞后与P蛋白结合，利用蛋白结合，利用ATP水水解释放的能量将药物泵出胞外，使胞解释放的能量将药物泵出胞外，使胞内药物蓄积减少，因而产生耐药性。内药物蓄积减少，因而产生耐药性。三、毒素偶联的抗体药物三、毒素偶联的抗体药物三、毒素偶联的抗体药物三、毒素偶联的抗体药物 免疫毒素及其换代制品免疫毒素及其换代制品免疫毒素及其换代制品免疫毒素及其换代制品 在导向药物中，毒素和抗体的交联物称在导向药物中，毒素和抗体的交联物称在导向药物中，毒素和抗体的交联物称在导向药物中，毒素和抗体的交联物称为免疫毒素。为免疫毒素。为免疫毒素。为免疫毒素。第一代免疫毒素是包含有第一代免疫毒素是包含有第一代免疫毒素是包含有第一代免疫毒素是包含有A A、B B链完整链完整链完整链完整毒素和抗体的交联物，其中毒素和抗体的交联物，其中毒素和抗体的交联物，其中毒素和抗体的交联物，其中B B链非特异链非特异链非特异链非特异性结合，使其仅在体外应用。性结合，使其仅在体外应用。性结合，使其仅在体外应用。性结合，使其仅在体外应用。第二代免疫毒素是利用抗体或抗体片第二代免疫毒素是利用抗体或抗体片段与毒素的段与毒素的A链或与链或与A链相似的单链核链相似的单链核糖体失活蛋白的结合物。因避免了第糖体失活蛋白的结合物。因避免了第一代免疫毒素的非特异性，故能在体一代免疫毒素的非特异性，故能在体内有一定的抗肿瘤作用。内有一定的抗肿瘤作用。第三代免疫毒素重组免疫毒素用基因第三代免疫毒素重组免疫毒素用基因克隆方法改造毒素基因和小分子抗体克隆方法改造毒素基因和小分子抗体基因重组表达。特异性好、稳定性强、基因重组表达。特异性好、稳定性强、渗透性佳、免疫源性低、可大量制备。渗透性佳、免疫源性低、可大量制备。免疫毒素的制备方法免疫毒素的制备方法毒素的来源毒素的来源 细菌毒素细菌毒素 植物毒素植物毒素载体的种类载体的种类小分子抗体小分子抗体FV或或SCFV细胞生长因子细胞生长因子激素激素CD4 制备方法制备方法 先克隆毒素基因，再利用基因重组技术先克隆毒素基因，再利用基因重组技术去除毒素中非特异性细胞结合部位基去除毒素中非特异性细胞结合部位基因。经改造的毒素基因，再与载体基因。经改造的毒素基因，再与载体基因重组，转入受体菌中表达，形成融因重组，转入受体菌中表达，形成融合蛋白，再经过纯化就得到重组免疫合蛋白，再经过纯化就得到重组免疫毒素。毒素。免疫毒素的临床应用免疫毒素的临床应用 治疗肿瘤、自身免疫病治疗肿瘤、自身免疫病 并能克复组织移植排斥反应，可单独给并能克复组织移植排斥反应，可单独给药也可包裹在脂质体及其它微粒中给药也可包裹在脂质体及其它微粒中给药。药。1.大叶性（肺泡性）肺炎大叶性（肺泡性）肺炎 为肺实质炎症，通常累及肺大叶的全部或大部，并不累及支气管。病原体现在肺泡引起炎症，继之导致部分或整个肺段、肺叶发生炎症改变，致病为肺实质炎症，通常累及肺大叶的全部或大部，并不累及支气管。病原体现在肺泡引起炎症，继之导致部分或整个肺段、肺叶发生炎症改变，致病菌多为肺炎链球菌。本病多见于青壮年，临床起病急，主要症状为寒颤高热、咳嗽、胸痛、呼吸困难和咳铁锈色痰。菌多为肺炎链球菌。本病多见于青壮年，临床起病急，主要症状为寒颤高热、咳嗽、胸痛、呼吸困难和咳铁锈色痰。2.小叶性（支气管）肺炎小叶性（支气管）肺炎 指病原体经支气管入侵，引起细支气管、终末细支气管和肺泡的炎症。病原体有肺炎链球菌、葡萄球菌、病毒、肺炎支原体以及军团菌等。常指病原体经支气管入侵，引起细支气管、终末细支气管和肺泡的炎症。病原体有肺炎链球菌、葡萄球菌、病毒、肺炎支原体以及军团菌等。常继发于支气管炎、支气管扩张、上呼吸道病毒感染以及长期卧床的危重病人。继发于支气管炎、支气管扩张、上呼吸道病毒感染以及长期卧床的危重病人。3.间质性肺炎间质性肺炎 以肺间质炎症为主，病变累及支气管壁及其周围组织，有肺泡壁增生及间质水肿。可由细菌、支原体、衣原体、病毒或卡氏肺囊虫等引起。以肺间质炎症为主，病变累及支气管壁及其周围组织，有肺泡壁增生及间质水肿。可由细菌、支原体、衣原体、病毒或卡氏肺囊虫等引起。病因学分类病因学分类1.细菌性肺炎细菌性肺炎 如肺炎链球菌（即肺炎球菌）、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、埃希大肠杆菌、绿脓杆菌等。如肺炎链球菌（即肺炎球菌）、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、埃希大肠杆菌、绿脓杆菌等。2.非典型病原体所致的肺炎非典型病原体所致的肺炎 如军团菌、支原体和衣原体等。如军团菌、支原体和衣原体等。