细菌的简单染色与革兰氏染色.ppt
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1、细菌的菌的简单染色染色与与革革兰氏染色氏染色一、目的要求一、目的要求1、学习细菌染色的原理和方法;、学习细菌染色的原理和方法;2、掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法。、掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法。二、基本原理二、基本原理 用用于于生生物物染染色色的的染染料料主主要要有有碱碱性性染染料料、酸酸性性染染料料和和中中性性染染料料三三大大类类。碱碱性性染染料料的的离离子子带带正正电电荷荷,能能和和带带负负电电荷荷的的物物质质结结合合。因因细细菌菌蛋蛋白白质质等等电电点点较较低低,当当它它生生长长于于中中性性、碱碱性性或或弱弱酸酸性性的的溶溶液液中中时时常常带带负负电电荷荷,所所以以通通常常采采
2、用用碱碱性性染染料料(如如美美蓝蓝、结结晶晶紫紫、碱碱性性复复红红或或孔孔雀雀绿绿等等)使使其其着着色色。酸酸性性染染料料的的离离子子带带负负电电荷荷,能能与与带带正正电电荷荷的的物物质质结结合合。当当细细菌菌分分解解糖糖类类产产酸酸使使培培养养基基pH下下降降时时,细细菌菌所所带带正正电电荷荷增增加加,因因此此易易被被伊伊红红、酸酸性性复复红红或或刚刚果果红红等等酸酸性性染染料料着着色色。中中性性染染料料是是前前两两者者的的结结合合物物又称复合染料,如伊红美蓝、伊红天青等。又称复合染料,如伊红美蓝、伊红天青等。简简单单染染色色法法是是只只用用一一种种染染料料使使细细菌菌着着色色以以显显示示其
3、其形形态态,简简单单染染色色不不能能辨辨别别细细菌菌细细胞胞的的构造。构造。革革兰兰氏氏染染色色法法是是1884年年由由丹丹麦麦病病理理学学家家C.Gram所所创创立立的的。革革兰兰氏氏染染色色法法可可将将所所有有的的细细菌菌区区分分为为革革兰兰氏氏阳阳性性菌菌(G+)和和革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌(G-)两两大大类类,是是细细菌菌学学上上最最常常用用的的鉴鉴别别染染色色法法。该该染染色色法法所所以以能能将将细细菌菌分分为为G+菌菌和和G-菌菌,是是由由这这两两类类菌菌的的细胞壁结构和成分的不同细胞壁结构和成分的不同所决定的。所决定的。革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分
4、比较成分成分 占细胞壁干重的占细胞壁干重的%革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌肽聚糖肽聚糖 含量很高(含量很高(50-9050-90)含量很低(含量很低(1010)磷壁酸磷壁酸 含量较高(含量较高(5050)无无类脂质类脂质 一般无(一般无(2 2)含量较高(含量较高(2020)蛋白质蛋白质 无无 含量较高含量较高vG-菌菌的的细细胞胞壁壁中中含含有有较较多多易易被被乙乙醇醇溶溶解解的的类类脂脂质质,而而且且肽肽聚聚糖糖层层较较薄薄、交交联联度度低低,故故用用乙乙醇醇或或丙丙酮酮脱脱色色时时溶溶解解了了类类脂脂质质,增增加加了了细细胞胞壁壁的的通通透透性性,使使结结晶晶紫紫和和
5、碘碘的的复复合合物物易易于于渗渗出出,结结果果细细菌菌就就被被脱色,再经蕃红复染后就成红色。脱色,再经蕃红复染后就成红色。vG 菌菌细细胞胞壁壁中中肽肽聚聚糖糖层层厚厚且且交交联联度度高高,类类脂脂质质含含量量少少,经经脱脱色色剂剂处处理理后后反反而而使使肽肽聚聚糖糖层层的的孔孔径径缩缩小小,通通透透性性降降低低,因因此细菌仍保留初染时的颜色。此细菌仍保留初染时的颜色。三、实验器材三、实验器材1、菌种、菌种培培养养12-16h的的枯枯草草杆杆菌菌(Bacillus subtilis),培培养养24小时的大肠杆菌(小时的大肠杆菌(Escherichia coli)2、染色液和试剂、染色液和试剂草
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