高糖条件下沉默LRP6通过...üller细胞的自噬与凋亡_周敏华.pdf

东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023，Feb;42(1):32-40收稿日期2022-08-08 修回日期2022-11-11基金项目广东省医学科研基金资助项目(B2021203)作者简介周敏华(1977 )，女，广东东莞人，副主任医师。E-mail:nanali1986163 com通信作者朱咏瑶E-mail:Zhuyy417163 com引文格式周敏华，吴颖，陈毅光，等 高糖条件下沉默 LP6 通过 Wnt/-catenin 途径抑制大鼠视网膜 Mller 细胞的自噬与凋亡J 东南大学学报(医学版)，2023，42(1):32-40 论著 高糖条件下沉默 LP6 通过 Wnt/-catenin途径抑制大鼠视网膜 Mller 细胞的自噬与凋亡周敏华，吴颖，陈毅光，陈庆隆，李文翀，刘枘岢，朱咏瑶(东莞市松山湖中心医院 内分泌科，广东 东莞523326)摘要目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜 Mller 细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LP6)的表达及其对高糖条件诱导的 Mller 细胞自噬与凋亡的作用和机制。方法:体外培养大鼠视网膜 Mller 细胞，采用 T-PC 与 Western blotting 检测高糖条件下 Mller 细胞中 LP6 mNA 和蛋白的表达水平;利用 siNA 干扰技术沉默 Mller 细胞中的 LP6，并分别在葡萄糖浓度为 5 6 mmolL1(NG)与 35 mmolL1的 DMEM 培养液(HG)中进行培养，按处理方式的不同将 Mller 细胞分为葡萄糖浓度为 5 6 mmolL1的 DMEM 培养的正常葡萄糖组(NG 组)、葡萄糖浓度为35 mmolL1的 DMEM 培养的转染 si-NC 组(HG+si-NC 组)和 si-LP6的 Mller 细胞组(HG+si-LP6 组);采用 Western blotting 检测各组 Mller 细胞中自噬相关蛋白 P62 的表达、LC3/LC3之值、Beclin1 与 Atg12-Atg5 复合体的表达;共聚焦显微镜观察 FP-GFP-LC3 串联质粒转染后各组 Mller 细胞中自噬通量的变化;TUNEL 染色检测各组 Mller 细胞的凋亡率，Western blotting 法检测细胞中抗凋亡蛋白 Bcl-2、促凋亡蛋白 Bax 与 cleaved Caspase-3 及 Wnt/-catenin 途径中-catenin 蛋白的表达。结果:与 NG 组相比，HG 组 Mller 细胞中 LP6 mNA 和蛋白的表达水平明显增高(P 0 01);与 NG 组比较，HG+si-NC 组、HG+si-LP6 组 Mller 细胞中除 P62 和 Bcl-2 蛋白表达显著降低外(P 0 05)，LC3/LC3之值、Beclin1 与 Atg12-Atg5 复合体、细胞中自噬通量、TUNEL 阳性细胞率及细胞中 Bad、cleavedCaspase-3 蛋白表达水平均明显升高(P 0 05);而与 HG+si-NC 组比较，HG+si-LP6 组中除 P62、Bcl-2 蛋白明显升高外(P 0 05)，其他检测指标均显著降低;此外，与 NG 组比较，HG+si-NC 组中-catenin 蛋白表达显著升高(P 0 05)，而 HG+si-LP6 组明显降低(P 0 05);其中与 HG+si-NC 组相比，HG+si-LP6组中-catenin 蛋白的降低趋势更为显著(P 0 01)。结论:高糖可促进 Mller 细胞中 LP6 的表达，采用siNA 干扰技术沉默细胞中 LP6 表达可能通过下调 Wnt/-catenin 途径抑制高糖诱导的 Mller 细胞自噬，并减少细胞的凋亡。关键词高糖;低密度脂蛋白受体相关蛋白 6;视网膜 Mller 细胞;自噬;凋亡;大鼠 中图分类号774 1 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0032-09doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 00523Silencing LP6 inhibits the autophagy and apoptosis of rat retinalMller cells through the Wnt/-catenin pathway underhigh-glucose conditionsZHOU Minhua，WU Ying，CHEN Yiguang，CHEN Qinglong，LI Wenchong，LIU ongke，ZHU Yongyao(Department of Endocrinology，Dongguan Songshanhu Central Hospital，Dongguan 523326，China)Abstract Objective:To investigate the expression of low density lipoprotein receptor-associated protein 6(LP6)in Mller cells of rat retina under high-glucose condition and its effect on autophagy and apoptosis inducedby high glucose condition and related mechanisms Methods:Mller cells were cultured in vitro and the expressionlevels of LP6 mNA and protein in Mller cells were detected by T-PC and Western blotting under high-glu-cose conditions LP6 in Mller cells was silenced by siNA interference method，and cultured in DMEM mediumwith glucose concentration of 5 6 mmolL1(NG)and 35 mmolL1(HG)，respectively Mller cells were di-vided into 3 groups according to different treatment methods:normal glucose group cultured in DMEM with glucoseconcentration of 5 6 mmolL1(NG group)and Mller cell group transfected with si-NC or si-LP6 cultured inDMEM with glucose concentration of 35 mmolL1(HG+si-NC group or HG+si-LP6 group)Western blottingwas used to detect the expression of autophagy related protein P62，LC3/LC3 ratio，Beclin1 and Atg12-Atg5complex in Mller cells Confocal microscopy was used to observe the changes of autophagy flux in Mller cells aftertransfection with FP-GFP-LC3 tandem plasmids TUNEL staining was used to detect the apoptosis rate of Mllercells in each group Western blotting was used to detect the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2，pro-apoptot-ic protein Bax and cleaved caspase-3，and-catenin protein in Wnt/-catenin pathway esults:Compared withNG group，HG could significantly promote the expression of LP6 mNA and protein in Mller cells(P 0 01)Compared with NG group，the expression of P62 and Bcl-2 protein in Muller cells in HG+si-NC group and HG+si-LP6 group was significantly decreased(P 0 05)LC3/LC3 ratio，Beclin1 and Atg12-Atg5 complex，au-tophagy flux，TUNEL positive cell rate，and Bad and cleaved Caspase-3 protein expression levels in cells were sig-nificantly increased(P 0 05)Compared with HG+si-NC group，the protein levels of P62 and Bcl-2 in HG+si-LP6 group were significantly increased(P 0 05)，and other indicators were significantly decreased In addition，compared with NG group，-catenin protein expression in HG+si-NC group was significantly increased(P 0.05)，while that in HG+si-LP6 group was significantly decreased(P 0 05)The decrease trend of-cateninprotein in HG+si-LP6 group was more significant than that in HG+si-NC group(P 0 01)Conclusion:Highglucose can promote the expression of LP6 in Mller cells，while silencing LP6 expression by siNA interferencemay inhibit the autophagy of Mller cells induced by high glucose and reduce cell apoptosis by down-regulatingWnt/-catenin pathway Key wordshigh glucose;low density lipoprotein receptor-associated protein 6;retinal Mller cells;autophagy;apoptosis;rats糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，D)是造成全世界劳动年龄人群视力受损与失明的主要原因1。流行病学数据表明，截至 2019 年，我国糖尿病患者高达 1 16 亿，占全世界糖尿病人口总数的 1/4 以上，居世界首位2。但迄今为止，D 的确切发病机制尚不清楚，而目前治疗 D 的方法，如抗血管内皮生长因子和激光凝固术等，对 D 患者的疗效有限3。因此，积极探究 D 的发病机制具有重要意义。视网膜33周敏华，等 高糖条件下沉默 LP6 通过 Wnt/-catenin 途径抑制大鼠视网膜 Mller 细胞的自噬与凋亡Wnt/-catenin 信号通路中的重要辅助受体，即低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low-density lipoprotein receptor-associated protein 6，LP6)在 D 患者与链脲佐菌素诱导的 D 大鼠中的表达较正常对照组明显升高，提示 LP6 参与调控 D 的发生与进展4-5。Mller 细胞作为视网膜中的主要神经胶质细胞，能够向视网膜提供营养，并维持其正常结构，从而发挥维持视网膜稳态的重要功能6。高血糖环境下 Mller 细胞的损伤会导致视网膜功能的受损，且是 D 发病机制的早期特征，并促进视网膜微血管病变的发展6-7。上述研究结果表明，LP6 与 D 的发生与进展密切相关，但其具体作用机制尚不清楚。因此，本研究将在体外实验中探讨 LP6 在高血糖条件下 Mller 细胞中表达及在高糖诱导的细胞损伤中的相关作用，以期进一步揭示D 的发病机制。1材料与方法1 1主要材料与仪器大鼠视网膜 Mller 细胞购自上海烜雅生物科技有限公司;沉默 LP6 的 si-NA(si-LP6)与阴性对照序列 siNA(si-NC)购自上海吉玛制药技术有限公司;胎牛血清(FBS，美国 Gibco 公司);Trizol 试剂、cDNA 合成试剂盒、BCA 蛋白检测试剂盒、增强型化学发光(ECL)试 剂 盒、Lipofectamin3000 转 染 试 剂(美 国Thermo Fisher 公司);葡萄糖浓度分别为 5 6 mmolL1与 35 mmolL1的 DMEM 培养液、1%的青霉素与链霉素混合液(美国 Hyclone 公司);SYB Premix ExTaq 试剂盒(日本 TaKaa 公司);IPA 裂解液、一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒、DAPI 试剂、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗(上海碧云天生物技术有限公司);FP-GFP-LC3 串联质粒(上海百致生物医药科技有限公司);兔抗 LC3B、P62(美国 Abcam 公司);兔抗 Bcl-2、cleaved Caspase-3 抗体(美国 Santa Cruz 公司);兔抗 LP6、Beclin1、Atg12-Atg5 复合体、Bad、-catenin、GAPDH 抗体(美国 Cell Signalling Technologies公司);ABI 7500HT 实时 PC 系统(美国 Applied Bio-systems 公司);NanoDrop 分光光度计(美国 ThermoFisher 公司)。1 2方法1 2 1细胞的培养、转染和分组采用含 10%FBS、1%青链霉素的 DMEM 培养液，在 37、体积分数 5%CO2培养箱中培养 Mller 细胞。取处于对数生长期的Mller 细胞，调整细胞密度后，按 1 105ml1接种至12 孔 板 中，待 细 胞 生 长 融 合 至 80%时，按 Lipo-fectamin3000 转染试剂使用操作方法将 si-LP6 和si-NC 转染入 Mller 细胞。转染 24 h 后使用 T-PC与 Western blotting 法检测 siNA 的干扰效率。按实验目的将转染后的 Mller 细胞分为 3 组:使用葡萄糖浓度为 5 6 mmolL1的 DMEM 培养的 Mller 细胞组(normal glucose，NG 组)，使用葡萄糖浓度为35 mmolL1的 DMEM 培养的转染 si-NC 或 si-LP6 的 Mller细胞组(high glucose+si-NC/si-LP6，HG+si-NC 组或 HG+si-LP6 组)。将上述 3 组 Mller 细胞置于37、体积分数 5%CO2培养箱中培养 24 h 后用于后续相关实验。1 2 2T-PC 检测 Mller 细胞中 LP6 mNA 的表达Trizol 法提取待测 Mller 细胞中的总 NA。NA 的质量与浓度在分光光度计中进行检测。取约2 g总 NA，采用 cDNA 合成试剂盒进行逆转录。根据 SYB Premix Ex Taq 试剂盒进行 T-PC。以GAPDH 为内参，2 Ct法计算分析细胞中 LP6 的相对表达量。实验单独重复 3 次。1 2 3Western blotting 检测 Mller 细胞中 LP6、自噬和凋亡相关蛋白及-catenin 蛋白的表达水平使用 IPA 裂解液提取待测 Mller 细胞中的总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。取适量的蛋白样品采用 SDS-PAGE凝胶进行电泳分离，然后将分离的蛋白转移至 PVDF膜上，5%牛血清白蛋白在室温下封闭抗体 2 h，随后加入一抗 LC3B(1 1 000)、P62(1 800)、Bcl-2(1 800)、cleaved Caspase-3(1 800)、Beclin1(1 8 000)、Atg12-Atg5 复合体(1 800)、Bad(1 1 000)、-cate-nin(1 1 000)、GAPDH(1 2 000)，4 下孵育过夜。充分洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的二抗(1 5 000)，室温下孵育 2 h 后加入 ECL 发光液在凝胶成像系统中进行蛋白显影。以 GAPDH 为内参，采用 Im-age J 软件进行灰度分析。以目标蛋白与内参 GAPDH的灰度值进行归一化处理。实验单独重复 3 次。1 2 4自噬通量的检测取生长状态良好的 Mller细胞，接种至 12 孔板中，待其生长融合至 60%80%时，使用 Lipofectamin3000 转染试剂将 FP-GFP-LC3串联质粒转染入细胞中，于 37、体积分数 5%CO2培养箱中培养 24 h，按“1 2 1”进行转染与分组处理24 h，4%多聚甲醛于室温下固定 10 min，使用共聚焦显微镜进行拍照，Image J 软件进行分析。正常情况下，LC3-阳性的自噬体(autophagosomes)被标记为黄色荧光斑点(GFP 绿色荧光和 FP 红色荧光融合后的黄色荧光)，但当自噬体与溶酶体融合后，因 GFP 在酸43东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)性溶酶体中发生猝灭，故仅能检测到 FP 发出的红色荧光斑点，即自噬溶酶体(autolysosomes)显示红色荧光。因此，通过对比细胞中黄色与红色斑点的数量可检测出细胞中自噬通量的水平。12 5TUNLE 染色观察各组 Mller 细胞的凋亡水平取各组 Mller 细胞，室温下首先采用 4%多聚甲醛固定30 min，03%TritonX-100 固定透化5 min，然后加入TUNLE 试剂于37 下避光孵育1 h，采用 DAPI 溶液进行染核，最后在荧光显微镜下进行观察拍照。1 3统计学处理使用 GraphPad Prism 软件 6 0c 版对数据进行分析。数据采用均值 标准差表示。两组间比较使用独立样本 t 检验，3 组及 3 组以上采用单因素方差分析，组间两两比较采用 Tukey 事后检验。P 0 05 表示差异具有统计学意义。2结果2 1高糖促进 Mller 细胞中 LP6 的表达采用 T-PC 与 Western blotting 检测高糖条件下Mller 细胞中 LP6 mNA 和蛋白的表达，结果显示，与 NG 组比较，HG 组 Mller 细胞中 LP6 的 mNA 和蛋白表达水平均显著增高(P 0 01)，见图 1。图 1高糖条件下 Mller 细胞中 LP6 的表达Fig 1Expression of LP6 in Mller cells under high glucose condition2 2沉默 LP6 对高糖条件下 Mller 细胞自噬的影响T-PC 与 Western blotting 检测结果显示，与 NG组 Mller 细胞比较，转染 si-LP6 后细胞中 LP6 m-NA 和蛋白表达均明显降低(P 0 01)，而转染 si-NC的细胞中无明显差异(P 0 05)，见图 2。Westernblotting 检测各组 Mller 细胞中自噬相关蛋白的表达，结果显示，与 NG 组比较，HG+si-NC 组和 HG+si-LP6 组 Mller 细胞中 P62 蛋白表达显著降低(P 0.05)，LC3/LC3之值、Beclin1 和 Atg12-Atg5 复合体的表达水平均明显升高(P 0 05);与 HG+si-NC组比较，HG+si-LP6 组中 P62 蛋白明显升高(P 0.05)，LC3/LC3之值、Beclin1 与 Atg12-Atg5 复合体蛋白的表达水平均显著降低(P 0 05)。见图 3。图 2转染 siNA 后 Mller 细胞中 LP6 的表达Fig 2Expression of LP6 in Mller cells after siNA transfection53周敏华，等 高糖条件下沉默 LP6 通过 Wnt/-catenin 途径抑制大鼠视网膜 Mller 细胞的自噬与凋亡图 3沉默 LP6 对高糖条件下 Mller 细胞自噬相关蛋白表达的影响Fig 3Effects of LP6 silencing on autophagy related protein expression in Mller cells under high glucose condition2 3沉默 LP6 对高糖条件下 Mller 细胞自噬通量的影响共聚焦显微镜观察 FP-GFP-LC3 串联质粒转染后各组 Mller 细胞中自噬通量的结果表明，与 NG 组比较，HG+si-NC 组与 HG+si-LP6 组细胞中自噬体(黄色荧光斑点)与自噬溶酶体(红色荧光斑点)均显著增加(P 0 05)，而与 HG+si-NC 组相比，HG+si-LP6 组中上述指标均明显降低(P 0 05)，见图 4。图 4各组 Mller 细胞中的自噬通量Fig 4Autophagy flux in Mller cells of each group2 4沉默 LP6 对高糖条件下 Mller 细胞凋亡的影响TUNLE 染色结果显示，与 NG 组比较，HG+si-NC组与 HG+si-LP6 组细胞凋亡率明显升高(P 0.05)，但与 HG+si-NC 组相比，HG+si-LP6 组却显著降低(P 0 05)，见图 5。63东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)图 5各组 Mller 细胞中的凋亡水平Fig 5The apoptosis level of Mller cells in each group2 5沉默 LP6 对高糖条件下 Mller 细胞凋亡相关蛋白表达的影响Western blotting 检测各组 Mller 细胞凋亡相关蛋白的表达水平，结果显示，与 NG 组比较，HG+si-NC组和 HG+si-LP6 组中抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达水平显著降低(P 0.05)，而促凋亡蛋白 Bcl-2 家族的 Bcl-2关联 X(Bcl2-associated X protein，Bax)与 cleavedCaspase-3 表达明显升高(P 0 05);与 HG+si-NC 组相比，HG+si-LP6 组中 Bcl-2 表达水平明显升高(P 0 05)，而 Bax 与 cleaved Caspase-3 表达水平则显著降低(P 0.05)。见图 6。图 6各组 Mller 细胞中凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 和 cleaved Caspase-3 的表达水平Fig 6Expression levels of apoptosis-related proteins Bcl-2，Bax and cleaved Caspase-3 in Mller cells of each group2 6沉 默 LP6 通过 Wnt/-catenin 途 径 影 响Mller 细胞的自噬与凋亡Western blotting 检测各组 Mller 细胞 Wnt/-cate-nin 途径中-catenin 蛋白的表达，结果显示，与 NG 组比较，HG+si-NC 组中-catenin 蛋白表达显著升高(P 0 05)，而 HG+si-LP6 组明显降低(P 0 05);与 HG+si-NC 组相比，HG+si-LP6 组中-catenin 蛋白的降低趋势尤为显著(P 0 01)。见图 7。73周敏华，等 高糖条件下沉默 LP6 通过 Wnt/-catenin 途径抑制大鼠视网膜 Mller 细胞的自噬与凋亡图 7各组 Mller 细胞中 Wnt/-catenin 途径中-catenin 蛋白的表达水平Fig 7Expression levels of-catenin protein in Wnt/-catenin pathway in Mller cells of each group3讨论D 是全球范围内导致视力损伤乃至丧失的主要原因1。Mller 细胞作为视网膜中的主要神经胶质细胞，一方面其能够通过释放营养因子、回收神经递质和控制胞外微环境中的离子平衡来维持周围神经元的正常功能，另一方面 Mller 细胞的功能损伤，甚至凋亡则会干扰其他神经元正常结构与功能和生存能力6。而高血糖则能通过诱导 Mller 细胞的凋亡，引起视网膜微环境的改变，加速神经元的损伤，最终导致 D 的视力下降7-8。因此，高血糖诱导 Mller 细胞的凋亡是造成视网膜损伤的重要原因，减少细胞凋亡可能是预防 D 病变的一种有效策略。本研究结果显示，高糖可促进 Mller 细胞中 LP6 的表达，而采用 siNA 干扰技术沉默细胞中 LP6 表达可能通过下调 Wnt/-catenin 途径抑制 Mller 细胞的自噬，从而减少细胞的凋亡。LP6 作为经典 Wnt/-catenin 信号通路的核心关键分子，可直接影响经典 Wnt/-catenin 通路的激活或抑制9。而作为一条进化上保守的信号通路，Wnt/-catenin 途径在包括 D 在内的多种人类疾病中发挥着重要作用10。在糖尿病动物模型中，上调的 Wnt/-catenin 信号通路不仅能够通过促进视网膜炎症和血管内皮生长因子的分泌，导致视网膜血管的新生，还能通过促进视网膜细胞的自噬加速神经元的损伤11-12。LP6 在葡萄糖代谢中起着关键作用。在葡萄糖剥夺的心肌细胞中，LP6 的表达明显降低，并通过激活动力学相关蛋白 1 的表达来显著抑制细胞的活力13。在糖尿病肾病中，Peixoto 等14 报道，绿茶可通过乙酰化修饰高糖环境诱导的足细胞中表达升高的 LP6，从而减少细胞的凋亡、足突的减少和尿蛋白的增加。本研究结果证实，高糖可显著促进 Mller 细胞中 LP6表达的上调。同时，Li 等15 在胰岛素抵抗的研究中发现，敲除 LP6 的表达可通过减轻肝细胞中的自噬水平来改善胰岛素抵抗，提高细胞对葡萄糖的敏感性。这提示高表达的 LP6 可能通过调控细胞的自噬参与高糖环境对细胞的损伤。自噬作为细胞清除受损细胞器和缺陷蛋白的主要生理过程，其被认为是维持细胞内动态平衡的重要调控机制。然而，尽管自噬被认为是细胞的一种基本的生存机制，但极端条件下，自噬也能导致细胞的程序性死亡。自噬在 D 的发生发展中起着双重作用16。在轻度应激条件下，自噬可发挥保护作用，但当应激条件过强超出承受范围时，自噬则能加剧细胞的损伤17。自噬通量代表了自噬活动的动态过程，其可通过评估在自噬小体降解过程中自噬小体和溶酶体融合后形成自噬溶酶体的水平反映自噬的活性18。在糖尿病小鼠的大脑与高糖处理的心肌细胞中均可观察到自噬通量的异常升高而导致的组织与细胞的凋亡及损伤19-20。而 在 自 噬 过 程 中，Atg12-Atg5-Atg16L 和LC3B 复合物是吞噬细胞延伸和自噬体关闭的两个重要的泛素样结合系统21。Beclin-1 是通过与 Vps34 结合促进自噬体形成的关键因素。Beclin-1-Vps34 复合物可以加速脂质膜的延伸、自噬体的成熟和细胞待降解物质的聚集21。P62 是一种载体受体，它将细胞内降解物质结合到自噬体膜上并被溶酶体清除。P62 表达的降低可提示自噬的增强22。本研究结果验证了在高糖条件下 Mller 细胞中 P62 蛋白水平下降，而83东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)Beclin-1 和 Atg12-Atg5 复合物表达升高，这提示高糖条件可诱导 Mller 细胞中自噬水平的升高。而沉默LP6 则能明显削弱高糖对自噬诱导作用。同时，通过自噬通量的监测来进一步验证高糖对细胞中自噬通量的影响，结果同样表明，沉默 Mller 细胞中 LP6 表达能够通过下调自噬通量来抑制高糖刺激下的自噬水平升高现象。细胞凋亡是一个程序性细胞死亡过程。在凋亡发生过程中，Bcl-2 基因在抗凋亡效应中起着重要作用。然而，Bax 可以抵抗 Bcl-2 的功能，从而诱导细胞凋亡23。此外，含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cys-teinyl aspartate specific proteinase，Caspase)家族负责激活细胞凋亡的降解活性。Caspase-3 可被 Caspase-9 和Caspase-8 激活，最终导致细胞凋亡。检测 cleavedCaspase-3 被广泛认为是指示凋亡的一个具有代表性的标志24。在本研究中，高糖可明显促进 Mller 细胞Bcl-2 蛋白水平下调，并促进 Bax 和 cleaved Caspase-3蛋白表达水平的升高，而沉默 LP6 的表达则显著削弱了高糖的上述作用。同时，Wnt/-catenin 信号通路中关键分子-catenin 蛋白的表达降低则进一步证实，沉默 LP6 可通过 Wnt/-catenin 途径调控高糖对Mller 细胞的上述作用。综上所述，本研究结果表明高糖可通过促进大鼠视网膜 Mller 细胞中 LP6 的表达，上调细胞的自噬与凋亡水平，而沉默 LP6 表达则能通过 Wnt/-cate-nin 途径明显改善高糖的上述作用，保护 Mller 细胞损伤。上述发现有助于进一步揭示高糖在 D 发展中的作用，而靶向调控 LP6 表达可能在 D 的防治中具有潜在的研究价值。致谢:南方医科大学基础医学院刘勇老师对本研究提供了帮助和指导。参考文献 1VALDEZGUEEO A S，QUINTANA-PEZ J C，AEL-LANO-MENDOZA M G，et al Diabetic retinopathy:importantbiochemical alterations and the main treatment strategies J Can J Diabetes，2021，45(6):504-511 2胡永峰，李强，汪树锋，等 肥胖和代谢综合征的联合作用与糖尿病的发病风险研究J 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