植物细胞微核检测技术.ppt
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1、植物细胞微核检测植物细胞微核检测技术技术一、实验目的一、实验目的 1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点;、了解细胞微核形成的机理及其形态特点;2、学习植物根尖细胞的微核检测技术。、学习植物根尖细胞的微核检测技术。二、实验原理二、实验原理微核微核(micronucleus)简称简称MCN,是真核类生物细胞中的一,是真核类生物细胞中的一种异常结构,往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产种异常结构,往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核生的。在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核之外,大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学以
2、下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样,也具合成反应性质和主核一样,也具合成DNA的能力。的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的,在有丝分裂后期不能向两极移动,所以游离片产生的,在有丝分裂后期不能向两极移动,所以游离于细胞质中,在间期细胞核形成时,即可在它附近看到于细胞质中,在间期细胞核形成时,即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构,直径大约是细胞直径的一到几个很小的圆形结构,直径大约是细胞直径的1/201/5,这就是微核。,这就是微核。微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正微核率的大小是和用药的剂量或辐射累
3、积效应呈正相关相关,因此,微核是常用的遗传毒理学指标之一,因此,微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用于辐射指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。三、实验材料:三、实验材料:大蒜、大豆、蚕豆等。大蒜、大豆、蚕豆等。四、实验仪器设备:四、实验仪器设备:四、实验仪器设备:四、实验仪器设备:显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、载玻片及盖玻片。载玻片及盖玻片。五、实验步骤:五
4、、实验步骤:1、浸种催芽:将实验用的蚕豆按所需要量放入盛有、浸种催芽:将实验用的蚕豆按所需要量放入盛有自来水的烧杯中,浸泡自来水的烧杯中,浸泡24h,此间至少换水两次。,此间至少换水两次。种子吸涨后,经种子吸涨后,经3648h,大部分初生根长至,大部分初生根长至12cm。2、处理根尖:阳性检测采用、处理根尖:阳性检测采用1.02.5MCrO3,0.51.5MNaN3,150250mMEMS,对照用自来水处,对照用自来水处理,处理时间理,处理时间24h。3、恢复培养:处理后的根尖用自来水浸洗、恢复培养:处理后的根尖用自来水浸洗3次,每次,每次次2-3min,洗净后在水中恢复培养,洗净后在水中恢复
5、培养24h。4、固定:用甲醛:冰醋酸(、固定:用甲醛:冰醋酸(3:1)固定液固定)固定液固定24h后弃去后弃去固定液,或换入固定液,或换入70酒精中保存。酒精中保存。5、酸解:弃去固定液,用清水漂洗、酸解:弃去固定液,用清水漂洗2-3次,吸净水,加入次,吸净水,加入6M盐酸,于室温解离盐酸,于室温解离10min,弃去盐酸,漂洗根尖,弃去盐酸,漂洗根尖2-3次,彻底洗净盐酸。次,彻底洗净盐酸。6、染色:截下、染色:截下1-2mm长的根尖,滴加石炭酸品红染液,染长的根尖,滴加石炭酸品红染液,染色色10min,加盖玻片,压片观察。,加盖玻片,压片观察。固定固定是借助于物理方法或化学药剂的作用,迅速透
6、是借助于物理方法或化学药剂的作用,迅速透入组织和细胞将之杀死,并且使其结构和内含物如:入组织和细胞将之杀死,并且使其结构和内含物如:蛋白质,脂肪,糖类以及核物质与细胞器等,在形蛋白质,脂肪,糖类以及核物质与细胞器等,在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态,同态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态,同时更易于染色,可以较清楚的显现细胞在生活时不时更易于染色,可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。易看清的结构。酸解酸解的作用是去除未固定的蛋白质的作用是去除未固定的蛋白质,同时使胞间层的同时使胞间层的果胶类物质解体,细胞分散而易于观察。果胶类物质解体,细胞分散而易于观察。六、实验结果六
7、、实验结果1 1、首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀,分裂相、首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀,分裂相较多的部位,再转高倍镜观察,找到微核。较多的部位,再转高倍镜观察,找到微核。2 2、微核识别标准:、微核识别标准:(1 1)在主核大小的)在主核大小的1/31/3以下,并与主核分离的小核。以下,并与主核分离的小核。(2 2)小核着色与主核相当或稍浅。)小核着色与主核相当或稍浅。(3 3)小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。)小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。3 3、每一处理观察、每一处理观察3 3个根尖,每个根尖计数个根尖,每个根尖计数100100个细胞,统计个细胞,统计其中含微核
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