降钙素原检测及临床应用PPT课件.ppt
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1、降钙素原检测及临降钙素原检测及临床应用床应用 一、一、降钙素原(ProcalcitoninProcalcitonin,PCTPCT)19931993年AssicotAssicot首次报道在各种细菌感染后血清降钙素原(PCTPCT)升高。19981998年NylenNylen等报道:PCTPCT确实可以作为脓毒血症的生物标记物,PCTPCT的释放是炎症过程的一环节。PCTPCT是降钙素的前体、由116116个氨基酸组成、分子量为12.7kDa12.7kDa的糖蛋白。PCTPCT由N-ProCTN-ProCT、未成熟降钙素和骨钙素组成。PCT由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞)表达
2、,经酶切分解为(未成熟)降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量的PCT。已发现细菌感染后PCT会明显升高。降钙素原(PCT)正常情况下,是降钙素的前体。健康人血液中浓度非常低,0.05ng/ml。当细菌感染时,全身各种组织多种类型细胞可生成PCT并释放入血液循环。PCT的结构PCT败血症组织甲状腺白血球脑肾上腺肺巨噬细胞肾肝脊柱肌肉心脏大肠小肠胃胰腺内脏脂肪皮肤睾丸脾二、二、PCTPCT检测方法检测方法 免疫免疫层层析法(色析法(色谱谱法)法)化学化学发发光法光法 酶酶联联免疫免疫荧荧光光 散射免疫比散射免疫比浊浊法法 1 1、免疫层析法(免疫色谱法)、免疫层析法(免疫色谱法)、免疫
3、层析法(免疫色谱法)、免疫层析法(免疫色谱法)层析法的原理层析法的原理 层析法是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力等)而建立起来的一种分离技术。层析系统由固定相和流动性组成。免疫层析技术免疫层析技术 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相,测试液为流动相,通过毛细作用使待测物在层析条上移动。待测物在测试线(T)处发生特异性免疫反应 游离物在质控线(C)处发生免疫反应免疫层析免疫层析免疫层析免疫层析-双抗夹心法原理双抗夹心法原理双抗夹心法原理双抗夹心法原理免疫层析法免疫层析法根据标记物种类不同,分为以下类别:胶体金 镧系元素(U
4、PT)荧光素 其他胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术检测原理检测原理 以胶体金为显色媒介,利用免疫学中的抗原抗体能够特异性结合的原理,在层析过程中完成这一反应,从而达到检测的目的。荧光免疫层析法荧光免疫层析法检测原理检测原理上转发光免疫层析法上转发光免疫层析法检测原理检测原理上转发光技术(UPT)是免疫层析原理与光电转换原理相结合的免疫检测技术,以上转发光颗粒(UCP颗粒)作为示踪物,经过红外光激发后上转发光颗粒发射出可见光,实现能量的上转,通过对光学信号的转换,能够快速对待测物进行定量测定。UCP颗粒:两种不同镧系元素离子(分别作为光吸收子和发射子)掺杂
5、入亚微米尺寸的陶瓷颗粒中,会构成一类能上转发光产生荧光的特殊材料(UCP)颗粒。2 2、化学发光法、化学发光法、化学发光法、化学发光法检测原理:检测原理:是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂)在化学反应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态,当电子从激发态回复到基态时,以发射光子的形式释放出能量,这一现象称为化学发光。发光发光Y Y Y YY Y磁微粒被测抗原+抗体+带丫啶酯带丫啶酯标记物抗标记物抗体体Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y冲洗后-夹心法夹心法夹心法夹心法(1 1)加入加入H
6、H2 2O O2 2(pH10pH10)化学发光法原理化学发光法原理电化学发光免疫分析示意图电化学发光免疫分析示意图电化学发光法原理电化学发光法原理3 3 3 3、酶联免疫荧光、酶联免疫荧光、酶联免疫荧光、酶联免疫荧光4-甲基伞形酮酰磷酸酯4-甲基伞形酮450nm处可测得荧光检测原理检测原理4 4 4 4、免疫比浊法、免疫比浊法、免疫比浊法、免疫比浊法检测原理:检测原理:抗体与可溶性抗原反应,形成一定结构的免疫复合物,在PEG(聚乙二醇)的作用下,形成悬浮于反应溶液中的微粒,使样品浊度发生变化。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质,当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时,光线被
7、粒子颗粒折射而发生偏转,产生散射光。双抗夹心法检测原理显著提高精准度标记物标记物单克隆抗抗钙素抗体单克隆抗降钙素抗体calcitoninkatacalcinBRAHMS PCTTM的双抗分别识别PCT肽链的两个部位,相比只能结合一个肽链部位的产品而言,双位点结合相比单位点结合大大降低了假阳性率,检测结果更精准抗钙素 降钙素10.http:/ 目前临床应用的cut off值是基于BRHAMS PCT试剂建立的,经过大量临床及动物实验数据的缜密计算并结合临床经验得到,由CLSI(美国临床实验室标准化协会)确认。唯一得到FDA认证。经过上市以来8千万次应用验证。不同平台的B.R.A.H.M.S PC
8、T结果具有一致性。目前推荐的PCT诊断脓毒症或全身炎症反应的cut off值仅 适用于使用BRAHMS PCTTM测得的标本值。BRAHMS PCT-Q BRAHMS PCT-Q 罗氏氏ELECSYS BRAHMS PCTELECSYS BRAHMS PCT梅里埃梅里埃VIDAS BRAHMS PCTVIDAS BRAHMS PCTPCT PCT PCT PCT Cut-offCut-offCut-offCut-off值均源自值均源自值均源自值均源自B.R.A.H.M.SB.R.A.H.M.SB.R.A.H.M.SB.R.A.H.M.S所有所有所有所有BRAHMS PCTBRAHMS PCTB
9、RAHMS PCTBRAHMS PCT结果具有一致性结果具有一致性结果具有一致性结果具有一致性Rochevs.KryptorComparisonofanewprocalcitoninassayfromRochewiththeestablishedmethodontheBrahmsKryptor.H.K.deWolf,etal.,ClinChem(2009),55(5):1043-4Roche 平台上的PCT结果与Kryptor 在全部的患者样本中保持高度的一致性和相关性所有所有所有所有BRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCT结果具有一致性结果具有一致性结
10、果具有一致性结果具有一致性VIDAS PCT检测结果与Kryptor PCT检测结果显示高度的相关性和一致性.两种检测技术的结果可采用同样的cut-off cut-off 值。VIDASvs.KryptorLong-termstabilityofprocalcitonininfrozensamplesandcomparisonofKryptorandVIDASautomatedimmunoassaysSchuetzP.etal.,ClinicalBiochemistry43(2010)341344所有所有所有所有BRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCT结
11、果具有一致性结果具有一致性结果具有一致性结果具有一致性与BRAHMS PCT Kryptor(时间分辨免疫荧光)比较,结果一致性达到92%与BRAHMS PCT LIA比较,诊断特异性达到92-98%,敏感性达到90-92%PCT-Qvs.KryptorUseofprocalcitonininIntensiveCareUnits:ComparisonofsemiquantitativePCT-QBrahmsassaywithautomatedPCT-KryptorassayGraldineSchuch.etal.,AnnBiolClin2011;69(6):663-70指标可靠:当前指标可靠:
12、当前PCT Cut-offPCT Cut-off值均源自值均源自BRAHMSBRAHMS健康人局部感染系统性感染(脓毒症)重度脓毒症感染性休克An incorrect result can often be worse for the patient than no result at all!错误的数值比没有数值更糟糕!-CLSI(美国临床实验室标准化协会)仅适用于使用BRAHMS PCTTM测得的标本值唯一得到FDA权威认证基于大量实验数据缜密计算并结合临床经验,已由CLSI确认8千万次临床应用验证PCT用于诊治细菌性感染的Cut-off值Meisner M.Procalcitonin:B
13、iochemistry and Clinical Diagnosis 1st Edition,2010 指标可靠:指标可靠:所有所有BRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCTBRAHMS PCT结果具有一致性结果具有一致性 BRAHMS PCT家族成员均使用相同的校准物质和制备方法 BRAHMS PCT家族成员具有无可比拟的相关性与一致性选择试剂厂家时的注意事项BRAHMS试剂已有近20年的历史,无论是定量方法还是POCT方法都是最成熟的试剂,其他均是12年的新产品。目前国外3000篇的论文用的都是BRAHMS试剂,其临床意义都是建立在BRAHMS试剂基础上。唯一获美国FDA
14、批准,是公认的标准方法。不同的试剂其可能的抗原位点不一样,可能具有不同的临床意义,应用除BRAHMS试剂时,应注意与BRAHMS试剂做对照试验。与法国肿瘤专家意法国肿瘤专家意外发现了外发现了PCTPCT的存的存在,德国在,德国B.R.A.H.M.S B.R.A.H.M.S 公公司全力支持司全力支持PCTPCT的的研究研究B.R.A.H.M.S B.R.A.H.M.S PCTPCT上市上市,从研究进入临床应用,并获得全球专利被被ThermofisherThermofisher收收购,购,B.R.A.H.M.S B.R.A.H.M.S 成为赛默飞旗下的成为赛默飞旗下的品牌品牌今天B.R.A.H.M
15、.SPCT已经成为全球医生诊治脓毒症/严重细菌感染的最重要标记物之一1990年发现1996年上市BRAHMS 降钙素原 PCT 2009年加入TMO自动化程度手动有溯源定量有溯源半定量目前国内PCT检测情况非溯源定量检测结果半自动全自动BRAHMS PCT-Q南京基蛋广州万孚武汉明德北京热景 梅里埃 VIDAS BRAHMS PCT BRAHMS PCT BRAHMS PCT-LIABRAHMS PCT-LIA 深圳新产业 罗氏罗氏 Elecsys Elecsys BRAHMS PCT BRAHMS PCT三、三、PCTPCT检测临床价值与应用检测临床价值与应用感染诊断现状感染诊断现状 WHO
16、(2008,2011)的统计数据提示:感染是造成人类死亡最重要的因素约占全球每年总体死亡率的25.5%(大约1500 万人)每年全球死亡人数(单位:百万)AnthonyS.Fauci,M.D.,etal.NEnglJMed2012;366:454-461其中呼吸道感染则是导致患者死亡最主要的感染性疾病每年约造成430万人死亡感染诊断现状:临床诊断方法 临床症状和体征:临床症状和体征:缺乏特异性 辅助检查辅助检查血常规白细胞和中性粒细胞:严重感染时,由于骨髓抑制,白细胞反而不升高,不能客观的反应感染的真实情况胸部影像胸片:敏感性和特异性较差,可能漏诊31%的疑似病例胸部CT:敏感性和特异性优于胸
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