基于宏基因组技术对犬猫益生菌产品的检测及分析.pdf

中国饲料2023 年第 17 期基 金 项 目 院宠 物 饲 料 质 量 安 全 风 险 预 警 项 目渊KYH20602204冤曰 犬处方粮及标示微生物含量的宠物营养补充剂渊犬冤质量安全评估渊KYH20602201冤作者简介院许佳袁副教授袁博士袁主要从事动物营养研究*通讯作者院余东游袁研究员袁E-mail院基于宏基因组技术对犬猫益生菌产品的检测及分析许佳1袁2袁 张东阳2袁 张文府2袁 宋彤星3袁 汪韬3袁李明4袁 张广智4袁 姚婷5袁 李俊6袁 兰新财7袁 余东游1*渊1.浙江大学动物科学学院袁浙江杭州 310058曰2.金华职业技术学院袁浙江金华 321007曰3.华中农业大学动物科学技术学院-动物医学院袁湖北武汉 430070曰4.中国农业科学院北京畜牧兽医研究袁北京 100081曰5.北京市饲料监察所袁北京102218曰6.中国农业科学院饲料研究所袁北京 100081曰7.浙江金大康动物保健品公司袁浙江金华 321007冤DOI院10.15906/11-2975/s.2022100034-08摘要 近年来袁随着我国宠物行业的迅猛发展袁各类犬猫用益生菌产品在市场涌现遥本研究旨在通过对市售益生菌产品中含有的菌群进行检测袁分析犬猫用益生菌产品的质量和安全性袁以推动犬猫用益生菌市场的健康发展遥本实验从市售犬猫用益生菌产品中随机购买了 26 款样品袁运用宏基因组测序技术检测了每种样品中益生菌的组成遥检测结果显示院枯草芽孢杆菌尧嗜酸乳杆菌尧地衣芽孢杆菌等益生菌在犬猫用益生菌产品中的使用率比较高袁含有多种益生菌的复合益生菌产品占据当前市场的主导地位遥 但实际测定结果与产品标签上标示的菌种对比显示袁26 款产品中仅有 1 款与其产品描述成分完全相符袁占 3.85%袁其余 96.15%的产品均与其产品描述有不同程度的不符之处袁主要表现为菌种缺失或渊和冤含有其他混杂菌种袁有的甚至包含致病菌遥由此可见袁目前市售犬猫用益生菌产品还存在较多问题袁产品质量亟待提高袁还需监管部门的严格监督与管控袁以保障宠物益生菌产品市场的健康发展遥关键词 宠物曰益生菌产品曰宏基因组曰菌群结构曰质量和安全中图分类号 S816.17文献标识码 A文章编号 1004-3314渊2023冤17-0104-07犬猫作为人类最重要的伴侣动物袁 其健康管理受到人们的日益关注渊Cohen袁2002冤遥 肠道方面的 疾 病 是 犬 猫 临 床 上 最 常 见 的 问 题 之 一渊Grzeskowiak 等袁2015冤遥 益生菌渊Probiotics冤是指通过定植在动物体内袁 能改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主生命有益的活性微生物袁 主要通过改善或调节肠道微生态平衡来促进宿主健康渊Hill 等袁2014冤袁还能促进胃肠道健康渊Suchodols鄄ki 等袁2016冤曰促进营养物质的消化吸收渊Yoo 等袁2016冤曰 调节机体免疫力等 渊邹朋等 2021曰Jager等袁2018冤遥 临床上袁益生菌常用来治疗犬猫腹泻袁Pignataro 等渊2021冤发现袁对急性非出血性腹泻犬治疗时袁 与含有甲硝唑-螺旋霉素的抗生素组相比袁 含有屎肠球菌的饲粮具有相似的临床效果遥Rossi 等渊2014冤在比较 VSL#3 菌株配制的宠物益生菌产品与泼尼松尧 甲硝唑联合治疗犬炎症性肠病之间的调节作用时发现袁与常规联合治疗相比袁益生菌治疗诱导了不同的抗炎免疫反应袁 保护与调节性 T 细胞标记物增强遥 White 等渊2017冤在比较标准犬炎症性肠病治疗 渊即消除饮食和口服泼尼松冤 与标准治疗加多菌株益生菌对特发性犬炎症性肠病犬黏膜微生物群的组成和空间分布的影响时发现袁与单独使用标准治疗的犬相比袁联合使用益生菌治疗的犬乳酸菌总数显著增加遥因此袁益生菌在治疗肠道疾病时可发挥积极作用遥104中国饲料2023 年第 17 期表 1受试样品信息样品编号标示的主要益生菌成分状态样品编号标示的主要益生菌成分P02嗜酸乳杆菌尧双歧杆菌尧枯草芽孢杆菌粉状P15啤酒酵母粉P01枯草芽孢杆菌尧乳酸菌尧凝结芽孢杆菌膏状P14凝结芽孢杆菌渊BC01冤尧长双歧杆菌状态液体粉状P03丁酸梭菌尧枯草芽孢杆菌尧地衣芽孢杆菌粉状P16嗜酸乳杆菌尧地衣芽孢杆菌尧粪肠球菌尧枯草芽孢杆菌粉状P04粪肠球菌尧枯草芽孢杆菌尧地衣芽孢杆菌粉状P17嗜酸乳杆菌尧地衣芽孢杆菌尧粪肠球菌尧枯草芽孢杆菌粉状P05嗜酸乳杆菌粉状P18乳酸菌尧枯草芽孢杆菌粉状P06酿酒酵母粉状P19丁酸梭菌粉状P07枯草芽孢杆菌粉状P20屎肠球菌DSM7134粉状P08嗜酸乳杆菌尧枯草芽孢杆菌粉状P21植物乳杆菌尧发酵乳杆菌尧长双歧杆菌尧酿酒酵母渊布拉迪酵母1.2%冤粉状P09嗜酸乳杆菌尧枯草芽孢杆菌粉状P22枯草芽孢杆菌尧嗜酸乳杆菌粉状P10枯草芽孢杆菌尧地衣芽孢杆菌尧双歧杆菌粉状P23嗜酸乳杆菌尧双歧杆菌尧枯草芽孢杆菌粉状P11植物乳杆菌袁粪肠球菌粉状P24嗜酸乳杆菌尧枯草芽孢杆菌粉状P12屎肠球菌膏状P25干酪乳杆菌尧植物乳杆菌尧鼠李糖乳杆菌尧嗜酸乳杆菌尧德氏乳杆菌尧瑞士乳杆菌尧唾液乳杆菌尧枯草芽孢杆菌尧双歧杆菌尧短双歧杆菌尧长双歧杆菌尧乳酸乳球菌尧嗜热链球菌尧婴儿双歧杆菌胶囊P13嗜酸乳杆菌尧枯草芽孢杆菌尧地衣芽孢杆菌粉状P26嗜酸乳杆菌粉状近年来袁各种犬猫用益生菌产品层出不穷遥国外已有研究报道了供人类和兽医使用的益生菌产品其声明的内容和实际内容之间有差异渊Drago等 袁2004曰Hamilton-Miller 等 袁2002曰Weese 等 袁2002冤袁 但鲜见有我国犬猫用益生菌产品相关的研究报道遥 16S rRNA 测序是常见的细菌种类分析技术袁但该技术仅提供部分细菌基因组信息袁精度只能鉴定到属水平 渊Chakravorty 等袁2007冤遥 与 16SrRNA 测序相比袁宏基因组测序可以检测标本中的所有 DNA袁 可以提供菌株水平的物种信息渊Fran鄄zosa 等袁2014冤遥 Patro 等渊2016冤运用宏基因组测序技术鉴定膳食补充剂样品中微生物活菌袁确定这些产品中特定污染物的存在遥曹淑曼等渊2020冤利用宏基因组测序法检测市售益生菌产品的菌种组成发现袁检测样品存在菌种缺失或渊和冤含有其他混杂菌种等问题遥 因此袁宏基因组测序技术应用于检测益生菌产品的菌株组成有极大的优势遥本研究利用宏基因组测序技术对市售犬猫用益生菌产品的益生菌菌群结构进行分析袁 对比检测菌种与产品标签上标示菌种的差异袁 对我国犬猫用益生菌产品的质量进行科学评价袁 以期推动犬猫用益生菌市场的健康发展遥1材料与方法1.1 实验材料本研究所用试验材料为第十二届东西部小动物临床兽医师大会现场购买的 26 款市面上售卖的犬猫用益生菌产品袁检测时购买的产品均在保质期内袁购买后按照产品说明渊2 8 益冤贮存在 4 益冰箱内袁 具体所购买的益生菌产品信息如表 1 所示遥1.2总 DNA 提取利用 1伊 PBS 1 mL 悬浮 0.2 g益生菌样品袁12000 r/min 离心 2 min袁收集沉淀物袁重复 2 3 次以清洗样品遥 然后用 Qiagen 粪便试剂盒袁按照说明书的步骤提取样品的总 DNA遥1.3微生物 DNA 的质量鉴定和浓度检测利用qubit4.0 对 DNA 的浓度进行检测遥 采用 1%的琼脂糖凝胶电泳分析 DNA 的纯度和完整度遥1.4测序文库的构建及测序采用全式金 Tn5转座酶试剂盒对总 DNA 进行建库袁 并用 PCR 引入 index 序列遥 然后利用 illumina NovaSeq 6000选择 PE150 模式对构建的每一个文库进行高通量测序袁数据量不小于 6 GB遥1.5目标菌的定量利用 fastp 对数据进行质控和筛选袁并用 megahit 对序列进行拼接袁用 prokka对拼接后的序列进行基因注释袁 用 kraken2 对每个样品中的微生物物种组成进行分析遥1.6统计学分析采用 R 语言进行数据分析袁对抽样产品的菌群分布及菌种使用情况进行统计分析遥2结果与讨论2.1菌群分布调研结果对 26 款犬猫用益生菌产品进行检测分析袁 并对各个菌种在产品中含有105中国饲料2023 年第 17 期图 126 款受试样品总 DNA 提取结果使用菌种数量十四种产品个数1使用比例/%3.85两种726.92一种830.77三种726.92四种311.54表 3受试产品含益生菌数量调研结果表 2受试产品标识菌群分布调研结果菌种名称枯草芽孢杆菌嗜酸乳杆菌地衣芽孢杆菌含有菌种的产品16126使用比例61.54%46.15%23.08%粪肠球菌415.38%双歧杆菌415.38%长双歧杆菌311.54%植物乳杆菌311.54%酿酒酵母311.54%德氏乳杆菌27.69%丁酸梭菌27.69%凝结芽孢杆菌27.69%乳酸菌27.69%屎肠球菌27.69%短双歧杆菌13.85%发酵乳杆菌13.85%干酪乳杆菌13.85%乳酸乳球菌13.85%瑞士乳杆菌13.85%嗜热链球菌13.85%鼠李糖乳杆菌13.85%唾液乳杆菌13.85%婴儿双歧杆菌13.85%的菌群分布进行统计袁结果见表 2遥本次调研的 26款产品中共包含枯草芽孢杆菌等益生菌 24 种袁其中 16 款产品中含有枯草芽孢杆菌袁 使用比例为61.54%袁12 款产品中含有嗜酸乳杆菌袁 使用比例为 46.15%袁6 款产品中含有地衣芽孢杆菌袁 使用比例为 23.08%袁4 款产品中含有粪肠球菌尧 双歧杆菌袁使用比例为 15.38%袁其他菌种在本次调研的产品中使用相对较少袁嗜热链球菌尧鼠李糖乳杆菌等等菌种仅包含在 1 种产品中遥 可见枯草芽孢杆菌尧嗜酸乳杆菌尧地衣芽孢杆菌等益生菌在犬猫用益生菌产品中的使用率较高遥2.2菌种使用数量调研结果犬猫用益生菌产品中袁有的产品使用多个菌种袁有的产品使用菌种较少遥 对调研的 26 款产品袁每款产品含有菌种的数量进行统计袁结果见表 3遥 本次调研的 26 款产品中益生菌使用数量分为一种尧两种尧三种尧四种和十四种共 5 个种类遥 26 款产品中有 8 款产品包含一种益生菌袁比例为 30.77%袁其余产品皆含有两种或两种以上益生菌袁占比 69.23%遥 研究结果表明袁 目前市售犬猫用益生菌产品呈现多元化发展袁一般包含两种或数种益生菌袁包含两种及以上益生菌的复合益生菌产品占据主导地位遥Herstad 等渊2010冤在对患有急性肠胃炎犬的一项研究中袁与对照组相比袁使用益生菌组产生正常粪便的时间从 2.2 d 缩短到 1.3 d遥 Sauter 等渊2005冤对 21 只患有食物反应性腹泻的犬使用益生菌组合袁所有受试犬在饮食治疗后都有临床改善遥2.3各产品总 DNA 提取结果对 26 款受试样品进行总 DNA 提取的结果见图 1袁 其中样品 P01尧P15 未提取到 DNA袁且进行平板划线验证后袁平板未生长细菌袁表明样品 P01尧P15 菌含量很低渊或无菌冤遥 其中样品 P08尧P09 提取到的 DNA 浓度较低且无主带袁无法进行建库遥 DNA 提取浓度较低的原因可能为样品中的微生物含量较低袁 或基质太复杂袁未能获得高质量总 DNA袁无法测定菌群结构遥2.4各产品检测与标示菌种的差异分析除上述 4 款样品外袁其余样品均建库成功袁利用宏基因组技术监测每个样品中微生物物种的组成袁 检测结果见表 4遥 对比每个样品检测到的菌种与表 1 中产品标签上的菌种差异袁 显示样品 P07尧P12 的检测结果与产品成分描述相同袁包含产品标签标示的全部益生菌袁且两次抽检检测到的菌种组成完全一致遥 其余产品均不达标袁不达标产品又分为两种情况院一部分产品的检测结果与产品标签标示的菌种产品样本106中国饲料2023 年第 17 期图 2受试益生菌产品检测结果与标签的对比部分符合袁 没有检测到全部目标菌种但检测到其中几种袁例如样品 P02尧P04尧P10 等曰另外一部分则与产品标签标示的菌种完全不符合袁 没有检测到目标菌种袁例如样品 P03尧P05尧P06 等遥综合以上分析袁 根据检测菌种与产品标签标示菌种的对比结果袁可以将抽样调查的市售 26 款犬猫用益生菌产品袁分成四类院一是无法检测的产品袁有 2 款曰二是检测与标示菌种符合的产品袁只有 1 款曰三是检测与标示菌种部分符合的产品袁有10 款曰四是检测与标示菌种不符合的产品袁有 13款遥 各类产品的占比情况见图 2袁由图 2 可知袁抽样调查的市售 26 款犬猫益生菌产品中袁产品实际含有菌种与标签标示菌种的符合度仅为 7.69%遥在以上益生菌产品中袁 枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性芽孢形成细菌袁 芽孢杆菌孢子被广泛用作益生菌食品补充剂袁 膳食补充枯草芽孢杆菌C-3102 可改善犬的肠道健康指标和粪便微生物群渊de Lima 等袁2020冤袁钙孢菌素是一种含有枯草芽孢杆菌单菌株的活孢子制剂袁 犬使用钙孢菌素后能提高粪便干物质含量渊FEEDAP 等袁2018冤遥双歧杆菌是哺乳动物肠道中共生菌中数量最多的野益生菌冶之一袁属于放线菌袁也是乳酸菌的一种遥它可以抑制小肠外源性胆固醇吸收 渊Pereira 等袁2002冤遥 Kelley 等渊2009冤评估饲粮中添加犬源双歧杆菌 AHC7 对犬急性特发性腹泻的治愈率发现袁缓解速度比空白对照组快遥 嗜酸乳杆菌是一种均发性尧微嗜热性的短链革兰氏阳性微生物袁具有杆状形态袁 可以作为许多食品发酵过程的辅助剂添加袁有助于独特的味道尧风味和质地袁它还通过生产乳酸和细菌素来保存产品渊Anjum 等袁2014冤袁在一项评估嗜酸乳杆菌 DSM13241 作为饲料添加剂渊109CFU/mL袁持续 4 周冤对健康成年犬粪便质量的研究中发现袁 添加剂组增加了粪便中的乳酸杆菌数量和减少了梭状芽孢杆菌袁 并改善了血液和表 4受试样品微生物物种组成检测结果样品编号物种组成检测结果样品编号物种组成检测结果P03贝莱斯芽胞杆菌袁22.48%曰副地衣芽孢杆菌袁21.33%曰溶酪大球菌袁12.05%曰阴沟肠杆菌袁7.42%曰酪酸梭菌袁4.74%曰人类袁3.51%曰植物乳杆菌袁2.96%曰卵状拟杆菌袁1.87%曰乳酸乳球菌袁1.86%曰其他袁21.79%P17枯草芽孢杆菌袁79.79%曰粪肠球菌袁4.27%曰屎肠球菌袁2.8%曰大肠埃希菌袁1.45%曰盲肠肠球菌袁1.03%曰其他袁10.66%P02解淀粉芽孢杆菌袁77.17%曰枯草芽孢杆菌袁8.61%曰酿酒酵母袁2.77%曰金黄色葡萄球菌袁2.49%曰人类袁2.33%曰地衣芽孢杆菌袁2.18%曰贝莱斯芽胞杆菌袁0.73%曰其他袁3.71%P16屎肠球菌袁77.39%曰嗜乳酸杆菌袁14.59%曰副地衣芽孢杆菌袁4.25%曰植物乳杆菌袁0.83%曰其他袁2.94%P04屎肠球菌袁71.02%曰枯草芽孢杆菌袁25.86%曰乳酸乳球菌袁0.95%曰戊糖片球菌袁0.53%曰其他袁1.64%P18酪酸梭菌袁45.83%曰枯草芽孢杆菌袁16.35%曰肉毒杆菌袁8.79%曰产孢梭菌袁6.83%曰真菌副伯克霍尔德菌袁6.4%曰诺维氏芽孢梭菌袁1.57%曰匙形梭状芽胞杆菌袁1.13%曰其他袁13.1%P05屎肠球菌袁98.98%曰其他袁1.02%P19屎肠球菌袁98.96%曰其他袁1.04%P06酿酒酵母袁96.23%曰蜡样芽孢杆菌袁2.44%曰其他袁1.33%P20酿酒酵母袁40.09%曰瑞士乳杆菌袁29.15%曰植物乳杆菌袁26.75%曰长双岐杆菌袁1.24%曰蜡样芽孢杆菌袁0.99%曰其他袁1.79%P07贝莱斯芽胞杆菌袁57.33%曰枯草芽孢杆菌袁20.03%曰芽孢杆菌SJ-10袁5.94%曰解淀粉芽孢杆菌袁4.91%曰巨大芽孢杆菌袁2.82%曰真菌副伯克霍尔德菌袁2.15%曰IHBB7164芽孢杆菌袁0.8%曰Y-01芽孢杆菌袁0.76%曰乳酸乳球菌袁0.54%曰其他袁4.69%P21贝莱斯芽胞杆菌袁24.29%曰解淀粉芽孢杆菌袁21.2%曰屎肠球菌袁17.6%曰枯草芽孢杆菌袁17.4%曰萎缩芽孢杆菌袁5.66%曰干酪乳杆菌袁2.7%曰芽孢杆菌Lzh-5袁2.47%曰真菌副伯克霍尔德菌袁1.28%曰人类袁0.93%曰其他袁6.47%P10酿酒酵母袁46.7%曰枯草芽孢杆菌袁25.6%曰副地衣芽孢杆菌袁14.98%曰蜡样芽孢杆菌袁3.3%曰地衣芽孢杆菌 1.4%曰真菌副伯克霍尔德菌袁1.21%曰其他袁6.8%P22解淀粉芽孢杆菌袁74.3%曰地衣芽孢杆菌袁11.46%曰酿酒酵母袁3.05%曰枯草芽孢杆菌袁2.63%曰金黄色葡萄球菌袁1.81%曰人类袁1.63%曰格氏乳球菌袁0.79%曰贝莱斯芽胞杆菌袁0.55%曰其他袁3.79%P11麦芽香肉杆菌袁15.51%曰人类袁12.01%曰酿酒酵母袁10.11%曰屎肠球菌袁7.96%曰尤巴亚努斯酵母袁5.76%曰口腔链球菌袁5.11%曰豆乳球菌袁4.37%曰真菌副伯克霍尔德菌袁3.87%曰热杀索丝菌袁3.68%曰其他袁31.62%P23解淀粉芽孢杆菌袁61.16%曰枯草芽孢杆菌袁16.78%曰地衣芽孢杆菌袁4.87%曰酿酒酵母袁4.81%曰人类袁3.1%曰金黄色葡萄球菌袁2.25%曰屎肠球菌袁1.62%曰真菌副伯克霍尔德菌袁0.58%曰贝莱斯芽胞杆菌袁0.54%曰其他袁4.29%P12屎肠球菌袁99.04%曰其他袁0.96%P24屎肠球菌袁73.74%曰嗜乳酸杆菌袁16.1%曰副地衣芽孢杆菌袁5.62%曰植物乳杆菌袁0.89%曰地衣芽孢杆菌袁0.63%曰乳酸乳球菌袁0.59%曰盲肠肠球菌袁0.52%曰其他袁1.9%P13屎肠球菌袁71.75%曰解淀粉芽孢杆菌袁12.61%曰植物乳杆菌袁2.35%曰嗜热链球菌袁1.23%曰人类袁1.15%曰溶酪大球菌袁1.09%曰乳酸乳球菌袁0.76%曰库特氏菌IIkri321袁0.69%曰鲁氏不动杆菌袁0.66%曰其他袁7.7%P25植物乳杆菌袁31.28%曰鼠李糖乳杆菌袁13.87%曰长双岐杆菌袁10.05%曰瑞士乳杆菌袁9.46%曰乳酸乳球菌袁7.65%曰唾液乳杆菌袁5.89%曰双歧杆菌袁5.72%曰LM 4-2芽孢杆菌袁3.99%曰枯草芽孢杆菌袁2.84%曰其他袁9.26%P14凝结芽孢杆菌袁98.88%曰其他袁1.12%P26酿酒酵母袁95.13%曰蜡样芽孢杆菌袁2.07%曰蕈状杆菌袁0.97%曰奇异酵母袁0.52%曰其他袁1.31%107中国饲料2023 年第 17 期免疫参数渊Baillon 等袁2004冤遥 据报道袁屎肠球菌在体外和体内具有益生菌特性袁 然而由于它们是机会性病原体袁肠球菌的益生菌菌株能够转移 vanA基因渊Holzapfel 等袁2001曰Lund 等袁2001曰Lund 等袁2001曰Franz 等袁1999冤袁Fenimore 等渊2017冤在对患有腹泻的收容所犬进行一周的处理后发现袁 与单独使用甲硝唑组渊46.9%冤相比袁甲硝唑联合屎肠球菌 SF68 株组正常大便的天数比例 渊65.6%冤显著增加遥 Marci倬佗kov佗 等渊2006冤以 109 CFU/mL 的剂量向 11 只健康犬使用了 1 周的犬源益生菌菌株屎肠球菌 EE3袁 发现该菌株能够减少葡萄球菌和假单胞菌样细菌并增加其他乳酸菌的浓度袁而对大肠杆菌水平无显著影响遥此外袁 有些受试产品检测到含有致病菌种遥例如样品 P02尧P22 含金黄色葡萄菌袁 其隶属于葡萄球菌属袁是革兰氏阳性菌代表袁为一种常见的食源性致病微生物渊Lowy袁1998冤曰样品 P03 含阴沟肠杆菌袁可作为条件致病菌渊Mezzatesta 等袁2012冤曰 样品 P10尧P20尧P26 含蜡样芽孢杆菌袁又称仙人掌杆菌袁 是一种革兰氏阳性菌袁茁 溶血性的 杆 状 细 菌 袁 有 些 菌 株 会 引 起 食 物 中 毒渊Sankararaman等 袁2013曰Ehling-Schulz等 袁2010冤曰样品 P17 含大肠埃希菌袁是人和动物肠道中的正常栖居菌袁 大肠杆菌的致病物质之一是血浆凝固酶袁根据致病性的不同袁致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌尧 肠道侵袭性大肠埃希菌尧肠道致病性大肠埃希菌尧肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5 种渊Croxen 等袁2010曰Kaper 等袁2004冤曰样品 P18含肉毒杆菌袁是一种致命病菌袁肉毒杆菌是毒性最强的细菌之一袁在繁殖过程中分泌肉毒毒素袁该种毒素是目前已知的剧毒物袁 可抑制胆碱能神经末梢释放乙酰胆碱袁 导致肌肉松弛型麻痹渊Pohanka袁2020曰Rossow 等袁2012冤遥国外也有相关研究对益生菌产品进行了评估遥 Weese 等渊2003冤对加拿大当地销售的声称含有益生菌的 19 种商业宠物食品进行了益生菌测试袁发现其食品中含有非常少的益生菌袁并且通常不含标签上列出的益生菌遥 Weese 等渊2011冤再次对含有益生菌的 25 种商业宠物食品进行了益生菌测试袁 发现只有 2 种在标签和内容上可以正确描述内容遥本研究结果与其结果一致袁但区别主要有两点院渊1冤Weese 等人研究的是含有益生菌的宠物粮袁而本研究测定的是益生菌产品本身袁主粮中在加工和贮存过程中更容易造成益生菌的损失曰渊2冤Weese 等使用的检测方法是传统的细菌培养法袁而本研究使用的是更为精准的宏基因组测序遥虽然产品和检测方式不同袁 但均能表明国内外的益生菌产品依然存在一定的质量问题遥4结论目前袁 市场上的犬猫用益生菌产品主要包括粉剂尧液体等袁本次抽样调查的产品主要是固体粉剂和液体遥 枯草芽孢杆菌尧嗜酸乳杆菌尧地衣芽孢杆菌等益生菌在犬猫用益生菌产品中的使用率比较高袁 含有多种益生菌的复合益生菌产品占据主导地位遥 运用宏基因组测序技术对犬猫用益生菌产品质量进行评价发现袁 犬猫益生菌产品实际含有菌种与标签标示菌种相符的仅有 3.85%袁 可见我国目前宠物市场上流通的益生菌产品良莠不齐袁还存在着如产品符合度很低尧包含潜在的致病菌等诸多问题袁 生产企业在相关的菌种鉴定水平与生产管理水平皆亟待提高遥 今后可以利用相关先进技术对国内宠物用益生菌产品市场进行监管袁保障宠物与宠主的权益遥参考文献1 曹淑曼袁王雪涵袁田薇袁等.宏基因组测序法检测市售益生菌产品的菌种组成J.中国食物与营养袁2020袁5院35 38.2 邹朋袁汪棋袁周元浩袁等.益生菌在宠物中的应用J.中国饲料袁2021袁1院10 14.3 Anjum N袁Maqsood S袁Masud T袁et al.Lactobacillus acidophilus院characterization of the species and application in food productionJ.Critical reviews in food science and nutrition袁2014袁54 渊9冤院1241 1251.4 Baillon M L A袁Marshall-Jones Z V袁Butterwick R F.Effects ofprobiotic Lactobacillus acidophilus strain DSM13241 in healthyadult dogs J.American journal of veterinary research袁2004袁65渊3冤院338 343.5 Chakravorty S袁Helb D袁Burday M袁et al.A detailed analysis of108中国饲料2023 年第 17 期16S ribosomal RNA gene segments for the diagnosis of pathogenicbacteria J.Journal of microbiological methods袁2007袁69 渊2冤院330 339.6 Cohen S P.Can pets function as family members?J.WesternJournal of Nursing Research袁2002袁24渊6冤院621 638.7 Croxen M A袁Finlay B B.Molecular mechanisms of Escherichiacoli pathogenicityJ.Nature Reviews Microbiology袁2010袁8渊1冤院26 38.8 de Lima D C袁Souza C M M袁Nakamura N袁et al.Dietary sup鄄plementation with Bacillus subtilis C-3102 improves gut health in鄄dicators and fecal microbiota of dogs J.Animal Feed Science andTechnology袁2020袁270院114672.9 Drago L袁De Vecchi E袁Nicola L袁et al.Microbiological evaluationof commercial probiotic products available in Italy J.Journal ofChemotherapy袁2004袁16渊5冤院436 467.10 EFSA Panel on Additives and Products or Substances used inAnimal Feed渊FEEDAP冤袁Rychen G袁Aquilina G袁et al.Safety andefficacy of CalsporinR渊Bacillus subtilis DSM 15544冤 as a feed addi鄄tive for pigs for fatteningJ.EFSA Journal袁2018袁16渊3冤院e05219.11 Ehling-Schulz M袁Knutsson R袁Scherer S.Bacillus cereus J.Genomes of foodborne and waterborne pathogens袁2010院147 164.12 Fenimore A袁Martin L袁Lappin M R.Evaluation of metronidazolewith and without Enterococcus faecium SF68 in shelter dogs withdiarrhea J.Topics in companion animal medicine袁2017袁32渊3冤院100 103.13 Franz C M A P袁Holzapfel W H袁Stiles M E.Enterococci at thecrossroads of food safety?J.International journal of food microbiolo鄄gy袁1999袁47渊1 2冤院1 24.14 Franzosa E A袁Morgan X C袁Segata N袁et al.Relating the meta鄄transcriptome and metagenome of the human gut J.Proceedings ofthe National Academy of Sciences袁2014袁111渊22冤院E2329 E2338.15 Grzeskowiak?袁Endo A袁Beasley S袁et al.Microbiota and probi鄄otics in canine and feline welfareJ.Anaerobe袁2015袁34院14 23.16 Hamilton-Miller J M T袁Shah S.Deficiencies in microbiologicalquality and labelling of probiotic supplements J.International journalof food microbiology袁2002袁1渊72冤院175 176.17 Herstad H K袁Nesheim B B袁L爷Ab佴eLund T袁et al.Effects of aprobiotic intervention in acute canine gastroenteritisa controlledclinical trialJ.Journal of small animal practice袁2010袁51渊1冤院34 38.18 Hill C袁Guarner F袁Reid G袁et al.Expert consensus document院The International Scientific Association for Probiotics and Prebioticsconsensus statement on the scope and appropriate use of the termprobioticJ.Nature reviews Gastroenterology&hepatology袁2014袁11渊8冤:506 514.19 Holzapfel W H袁Haberer P袁Geisen R袁et al.Taxonomy and im鄄portant features of probiotic microorganisms in food and nutritionJ.The American journal of clinical nutrition袁2001袁73渊2冤院365s 373s.20 Jager R袁Purpura M袁Farmer S袁et al.Probiotic Bacillus coagu鄄lans GBI-30袁6086 improves protein absorption and utilizationJ.Probiotics and antimicrobial proteins袁2018袁10渊4冤院611 615.21 Jin L Z袁Marquardt R R袁Zhao X.A strain of Enterococcus fae鄄cium渊18C23冤 inhibits adhesion of enterotoxigenic Escherichia coliK88 to porcine small intestine mucus J.Applied and environmentalmicrobiology袁2000袁66渊10冤院4200 4204.22 Kaper J B袁Nataro J P袁Mobley H L T.Pathogenic EscherichiacoliJ.Nature reviews microbiology袁2004袁2渊2冤院123 140.23 Kelley R L袁Minikhiem D袁Kiely B袁et al.Clinical benefits ofprobiotic canine-derived Bifidobacterium animalis strain AHC7 indogs with acute idiopathic diarrhea J.Veterinary Journal袁2009袁10渊3冤院121 130.24 Lowy F D.Staphylococcus aureus infections J.New Englandjournal of medicine袁1998袁339渊8冤院520 532.25 Lund B袁Edlund C.Probiotic Enterococcus faecium strain is apossible recipient of the vanA gene cluster J.Clinical Infectious Dis鄄eases袁2001袁32渊9冤院1384 1385.26 Marci倬佗kov佗 M袁Simonov佗 M袁Strompfov佗 V袁et al.Oral appli鄄cation of Enterococcus faecium strain EE3 in healthy dogsJ.Foliamicrobiologica袁2006袁51渊3冤院239 242.27 Mezzatesta M L袁Gona F袁Stefani S.Enterobacter cloacae com鄄plex院clinical impact and emerging antibiotic resistance J.Future mi鄄crobiology袁2012袁7渊7冤院887 902.28 Patro J N袁Ramachandran P袁Barnaba T袁et al.Culture-inde鄄pendent metagenomic surveillance of commercially available probi鄄otics with high-throughput next-generation sequencingJ.MSphere袁2016袁1渊2冤院e00057 16.29 Pereira D I A袁Gibson G R.Effects of consumption of probioticsand prebiotics on serum lipid levels in humans J.Critical reviews inbiochemistry and molecular biology袁2002袁37渊4冤院259 281.30 Pignataro G袁Di P R袁Crisi P E袁et al.Comparison of the thera鄄peutic effect of treatment with antibiotics or nutraceuticals on clinicalactivity and the fecal microbiome of dogs with acute diarrheaJ.Ani鄄mals袁2021袁11渊6冤院1484.31 Pohanka M.Botulinum Toxin as a Biological Warfare Agent院Poisoning袁Diagnosis and CountermeasuresJ.Mini reviews in medic鄄inal chemistry袁2020袁20渊10冤院865 874.32 Rossi G袁Pengo G袁Caldin M袁et al.Comparison of microbiolog鄄ical袁histological袁and immunomodulatory parameters in response totreatment with either combination therapy with prednisone andmetronidazole or probiotic VSL#3 strains in dogs with idiopathicinflammatory bowel diseaseJ.PloS one袁2014袁9渊4冤院e94699.109中国饲料2023 年第 17 期Detection and analysis of probiotic products for dogsand cats by metagenomic sequencingXU Jia1袁2袁ZHANG Dongyang2袁ZHANG Wenfu2袁SONG Tongxing3袁WANG Tao3袁LI Ming4袁ZHANG Guangzhi4袁YAO Ting5袁LI Jun6袁LAN Xincai7袁YU Dongyou1*渊1.College of Animal Science袁Zhejiang University袁Hangzhou袁Zhejiang Province 310058袁China曰2.College of Agriculture袁Jinhua Polytechnic袁Jinhua袁Zhejiang Province