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基于环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值.pdf
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1、第 44卷 第5期2023 年 9月Vol.44 No.5September 2023中山大学学报(医学科学版)JOURNAL OF SUN YATSEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)基于环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值吴燕杏,莫超华,韩福兰,曾敏,陈增伟,杨文雄,周馨烨,毛荣军(佛山市中医院病理科,广东 佛山 528000)摘要:【目的】探讨环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值。【方法】选取2013年2月至2022年12月期间,佛山市中医院送检的2 518病理标本为研究对象,同一标本取材两块,随机分成两组,环保快速组:采
2、用环保型样本释放剂联合超声波的快速模式制作病理组织切片;传统组:采用甲醛、乙醇、二甲苯,按照常规的模式制作切片。比较两组切片的苏木素(HE)染色效果、免疫组织化学(IHC)染色效果和非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(ALT/WDL)组织切片的MDM2基因检测结果的差异。【结果】两组病理组织的蜡块脱水良好、组织硬度适中。两组切片HE染色后,组织切面完整,无裂隙及颤痕、细胞核与细胞质染色对比恰当、透明度佳、染色均匀、无组织掉片。环保快速组的HE染色优良率和HE染色评分均高于传统组,但是差异均无统计学意义(2=3.125,P1=0.070;t=0.965,P2=0.334)。两组切片IHC染色后
3、,细胞阳性定位准确、呈特异性着色、染色均匀染色强度适中、染色敏感度好、无组织掉片。环保快速组的IHC染色优良率和IHC染色阳性率均低于传统组,但是差异均无统计学意义(12=2.769,P1=0.092;22=0.800,P2=0.375)。两组WDL组织切片的背景清晰,轮廓分明,染色均匀,细胞清晰可见,细胞核界限清楚,杂交信号在背景荧光下清晰、明亮,无杂信号。两组切片均杂交成功,MDM2均呈阳性扩增。环保快速组杂交成功细胞数低于传统组,但是差异无统计学意义(t=1.414,P=0.230)。【结论】使用环保型样本释放剂联合超声波的组织处理模式,能保障病理组织切片HE染色、IHC染色和MDM2基
4、因检测效果,且更为高效和环保,适合在各级医院中推广使用。关键词:环保;样本释放剂;超声波;切片;HE染色;免疫组织化学染色;MDM2中图分类号:R365 文献标志码:A 文章编号:1672-3554(2023)05-0847-07DOI:10.13471/ki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2023.0518Practical Value of Environment-friendly Sample Release Agent Combined with Ultrasound in the Preparation of Pathological Tissue Sect
5、ionsWU Yan-xing,MO Chao-hua,HAN Fu-lan,ZENG Min,CHEN Zeng-wei,YANG Wen-xiong,ZHOU Xin-ye,MAO Rong-jun(Department of Pathology,Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Foshan 528000)Correspondence to:MAO Rong-jun;E-mail:Abstract:【Objective】To explore the practical value of environment-friendly
6、 sample release agent combined with ultrasound in the preparation of pathological tissue sections.【Methods】From February 2013 to December 2022,2 518 pathological specimens submitted by Foshan Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine were selected as the study objects.Two samples of the sam
7、e specimen were randomly divided into two groups:the environment-friendly fast group,in which the pathological tissue sections were made by using the environment-friendly sample release agent combined with ul 临床研究 收稿日期:2023-02-05基金项目:广东省医学科学技术研究基金(A2019294);佛山市“十四五”医学重点专科建设项目(FSZD145010);佛山市卫生健康局立项课
8、题(20210197)作者简介:吴燕杏,第一作者,主管技师,研究方向:病理学技术,E-mail:;毛荣军,通信作者,E-mail:第44卷中山大学学报(医学科学版)trasound;and the traditional group,in which formaldehyde,ethanol and xylene were used to make slices in the conventional way.The differences of hematoxylin(HE)staining effect,immunohistochemistry(IHC)staining effect an
9、d MDM2 gene detection result of atypical lipomatous tumor/highly differentiated liposarcoma(ALT/WDL)tissue sections between the two groups were compared.【Results】The wax of the two groups pathological tissues was dehydrated well and the tissue hardness was moderate.After HE staining,the sections of
10、the two groups were intact,without cracks and tremor marks,and the contrast between nucleus and cytoplasm was appropriate,with good transparency,uniform staining,and no tissue loss.The excellent rate and score of HE staining in the environmental fast group were higher than those in the traditional g
11、roup,but the difference was not statistically significant(2=3.125,P1=0.070;t=0.965,P2=0.334).After IHC staining of the two groups of sections,the positive location of the cells was accurate,the staining was specific and uniform,the staining intensity was moderate,the staining sensitivity was good,an
12、d there was no tissue loss.The excellent rate of IHC staining and the positive rate of IHC staining in the environmental fast group were lower than those in the traditional group,but the difference was not statistically significant(12=2.769,P1=0.092;22=0.800,P2=0.375).The background and outline of t
13、he two groups of WDL tissue sections were clear,the staining was uniform,the cells were clear and visible,the nuclear boundary was clear,the hybridization signal was clear and bright under the background fluorescence,and there was no miscellaneous signal.The two groups of sections were hybridized su
14、ccessfully,and MDM2 showed positive amplification.The number of cells successfully hybridized in the environment-friendly fast group was lower than that in the traditional group,but the difference was not statistically significant(t=1.414,P=0.230).【Conclusions】The tissue treatment method of using en
15、vironment-friendly sample release agent combined with ultrasound can ensure the detection effect of HE staining,IHC staining and MDM2 gene detection of pathological tissue sections,and is more efficient and environment-friendly,suitable for promotion and use in hospitals at all levels.Key words:envi
16、ronment-friendly;sample release agent;ultrasonic;section;HE staining;immunohistochemical staining;MDM2J SUN Yatsen Univ(Med Sci),2023,44(5):847-853组织病理学、免疫病理学和分子病理学诊断质量的提高均依赖于病理组织制片技术的改良和进步1-2。2015年版的 病理科专业医疗质量控制指标3和2020年版的 三级综合医院评审标准实施细则4明确指出了苏木素-伊红(hematoxylin-Eosin,HE)染色优良率、免疫组织化学(immunohistochem
17、ical,IHC)染色优良率和分子病理检测室内质控合格率作为病理科质控指标的重要性和具体要求。半个多世纪以来,正是由于我国的病理学呕心沥血、艰苦创业的敬业精神,使病理组织切片制备的水平得到了突飞猛进的进步,为病理质量和临床的诊疗效果的迅猛发展打下了坚实的基础。传统的病理组织切片制作模式,采用的甲醛、二甲苯等试剂可引起多种身体危害5-6,其前期制作流程复杂(处理缸数为14缸),耗时较长(约13 h 30 min),降低了病理学诊断报告的效率,成为了制约病理学发展的瓶颈。环保型样本释放剂(固定、脱水和透明的三合一环保型试剂)联合超声波的出现为解决这一卡脖子的难题带来了希望的曙光,它仅需使用1种试剂
18、在2 h内即可完成病理组织标本的固定、脱水和透明等病理组织前期制作流程。本文通过比较环保型样本释放剂联合超声波和传统方法制作的石蜡切片,在HE染色、IHC染色和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(atypical lipomatous tumor/well differentiated liposarcoma,ALT/WDL)组织切片的 MDM2 基因检测效果的差异,旨在寻找一种病理组织前期处理新模式,为提高病理诊断效率提供科学依据。1 材料与方法1.1实验材料1.1.1主要试剂及仪器环保型样
19、本释放剂(主要成分:十二烷基硫酸钠、氢氧化钠、脱水合成剂;室内干燥通风,密封保存)、JYCL-2病理样本分析前处理设备由广东省佛山市南海钧镒医疗设备有限公司生产。甲醛固定液由广州维格斯生物科技有限公司生产。二甲苯由广州化学试剂厂生产。苏木素和伊红染色液均由无锡市江原实业技贸有限848第5期吴燕杏,等.基于环保型样本释放剂联合超声波在病理组织切片制备中的应用价值公司生产。1%盐酸乙醇溶液由珠海贝索生物技术有限公司生产。免疫组化抗体和显色试剂、JH-18S免疫组化染色仪由上海杰浩生物技术有限公司生产。MDM2基因扩增检测试剂盒由广州安必平医药科技股份有限公司生产。ASP6025全自动组织脱水机、S
20、T5020染色机由德国徕卡仪器有限公司生产。S500-24杂交仪由美国Thermobrite公司生产。1.1.2标本来源选取2013年2月至2022年12月期间,佛山市中医院送检的2 518病理标本为研究对象,其中脂肪细胞肿瘤(含15例ALT/WDL)标本395例,骨肿瘤标本368例,胃肠标本(含内镜活检2块以上标本)350例,子宫内膜标本(含活检2块以上标本)306例,宫颈标本(含活检 2块以上标本)287例,乳腺肿瘤标本185例,前列腺标本(含穿刺2块以上标本)132例,绒毛组织127例,卵巢肿瘤标本91例,阑尾标本76例,扁桃体标本72例,甲状腺标本(含穿刺2块以上标本)64例,肺组织标
21、本(含穿刺2块以上标本)42例,淋巴结(含穿刺2块以上标本)23 例。患者年龄 18.5 85.6 岁,平均年龄(42.8 10.6)岁。本研究获得佛山市中医院医学伦理委员会批准(编号:【2012】043)。1.1.3组织学类型本文的代表性病例骨肿瘤分类、脂肪细胞肿瘤、结直肠肿瘤诊断依据参考文献7-9 的分类标准执行。1.2实验方法1.2.1实验分组及处理方法标本离体后30 min内固定8 12 h,大标本同一病变部位取材2块(组织块取材大小1 cm 1 cm 0.1 cm,对于骨组织应脱钙,脂肪组织应脱脂后再进入该流程),小标本随机分成两份,随机分成两组。环保快速组:采用环保型样本释放剂联合
22、超声波的快速处理模式制作病理组织切片,具体流程为:50 环保型样本释放剂 30 min,50 环保型样本释放剂 30 min,62 石蜡 30 min。传统组:采用甲醛、乙醇、二甲苯,按照常规的处理模式制作病理组织切片,具体流程为:4%中性缓冲甲醛2 h,75%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇各1 h,100%乙醇 50 min,二甲苯、二甲苯各50 min,62 石蜡、石蜡、石蜡、石蜡各45 min。包埋,切片2 518张、裱片。行HE染色,经两位资深病理医师共同确诊。对于需要做IHC的标本,根据病理医师开具的免疫组化抗体检测项目,重新切片 5 791 张,
23、行 IHC 染色。对于诊断为ALT/WDL的15例标本,再次切片15张,使用FISH法行MDM2基因检测。1.2.2HE染色流程、评分及质量等级判定HE染色流程参考文献 10 进行:二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱二甲苯、水洗、苏木精液染色、水洗、盐酸-乙醇分化、水洗、氨水返蓝、水洗、伊红液染色、梯度乙醇脱水、二甲苯透明和封片。HE染色流程、评分及质量等级判定参考文献 11 进行。评判指标包括蜡块评分指标和HE评分指标。蜡块评分指标主要是脱水不良率(10分)和组织硬度(10分);HE评分指标主要是裂隙及颤痕(评估组织收缩程度,20分)、细胞核与细胞质染色对比(评估脱水方案是否影响染色,20 分)、透明度
24、情况(评估脱水是否彻底,20分)、染色均匀(10分)、组织掉片(10分)等。HE染色质量等级(包括蜡块评分点和HE评分指标)分为:优质片、良好片、合格片、不合格片。优质片 90分,良好片72 89分,合格片60 74分,不合格 59分。HE染色优良切片是指达到行业优良标准要求的HE染色切片,包括优质片、良好片。HE染色切片优良率=HE染色优良切片/同期HE染色切片总数 100%。1.2.3IHC 染色流程、结果判读及质量等级判定IHC染色流程参考文献 12 进行:切片水化、抗原修复、消除内源性过氧化物酶、PBS 冲洗、血清封闭、一抗体孵育、PBS冲洗、二抗体孵育、PBS冲洗、苏木素复染,流水冲
25、洗,脱水透明,封片。结果判读:阳性物呈棕色,细胞核蓝色。根据所检测的抗原不同,按照说明书分别定位在细胞膜,细胞浆,细胞核等。本文的代表性IHC染色项目:SATB2阳性表达定位在细胞核;S100阳性表达定位在细胞质/细胞核。IHC染色优良切片是指达到行业优良标准要求的IHC染色切片,包括优质片、良好片。IHC染色切片优良率=IHC染色优良切片/同期IHC染色切片总数 100%。IHC染色质量等级判定参考文献13进行,指标为:阳性定位(20分)、非特异性着色(20分)、染色均匀(20分)、组织掉片(20分)、染色强度(10分)、染色敏感度评估(10分)。IHC染色质量等级分为:优质片、良好片、合格
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