食品酶学-葡萄糖氧化酶11.ppt
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1、括摄商熔另尤梳沫阁暑尿瞳草瓣北尤齿锥交嗓瘫乏奴瑞逢客惮庇接伞骂腔食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11第第11章章葡萄糖氧化酶蕴剑毯哮冠蠢枢弃北欠锨畸仁屿邵求趋胆腺钓咨寡扳余粥坠孤眯赌阑傀悔食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶EC1.1.3.4n葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase GODGlucose oxidase GOD)的系统名称的系统名称(-D-葡萄糖:氧葡萄糖:氧氧化还原酶:氧化还原酶:EC1.1.3.4),最先于最先于19281928年在黑曲霉和灰绿青霉中发现。年在黑曲霉和灰绿青霉中发现。n能够在氧存在的条
2、件下,催化葡萄糖氧化成能够在氧存在的条件下,催化葡萄糖氧化成-D-葡葡萄糖酸内酯,对萄糖酸内酯,对-D-吡喃葡萄糖表现出很强烈的特吡喃葡萄糖表现出很强烈的特异性。异性。n该酶在临床检测及食品工业中有广泛用途该酶在临床检测及食品工业中有广泛用途葡萄糖葡萄糖+O+O2 2+H+H2 2O O 葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内酯+H+H2 2O O2 2 骆效斯接篱筹讥祖哆邦蕊这周论奄筏滩浆舱挟栓盛亩侣经久拈很犀处秀遂食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11O2(非酶水解)(非酶水解)H2OG:-D-葡萄糖,L:-D-葡萄糖酸内酯狈捂盼飞贬沽烽瞩频邀示啥鳞云佛毗囤描窄低迷冈串狡姥摊犊帚且荐情撼食品
3、酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11、葡萄糖氧化酶的性质、葡萄糖氧化酶的性质n1.特异性特异性:对:对-D-吡喃葡萄糖表现出很强吡喃葡萄糖表现出很强烈的特异性。烈的特异性。蹈分怀秩陈陋畅醇谎综的扬砷度训渝唬礼骤吹萍搽因刃愧颧腺查懒匝币求食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11n2.pH2.pH对酶活力的影响对酶活力的影响n葡萄糖氧化酶的活力葡萄糖氧化酶的活力-pH-pH曲线在曲线在pH4.5-pH7 pH4.5-pH7 之间之间有一段平坦部分,而在两侧都急剧地下降。有一段平坦部分,而在两侧都急剧地下降。n曲线在高曲线在高pHpH一侧下降是由于酶的不稳定性;一侧下降是由于
4、酶的不稳定性;n在低在低pHpH一侧下降是由于一侧下降是由于pHpH对酶的反应速度的真实对酶的反应速度的真实影响影响n底物起稳定酶活性作用底物起稳定酶活性作用钎惮舔唾因狄而锋藩恒诡涅糟鉴络烬框撂忱上胯霓社麦彰鱼笼畦挪涪澎氮食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11n3.3.温度对酶活力的影响温度对酶活力的影响n葡萄糖氧化酶反应体系含有气体反应物氧,葡萄糖氧化酶反应体系含有气体反应物氧,因此,反应温度的改变意味着氧在反应体因此,反应温度的改变意味着氧在反应体系中浓度的改变。系中浓度的改变。n当温度升高时,反应体系氧的溶解度下降,当温度升高时,反应体系氧的溶解度下降,这就抵消了温度升高对
5、酶反应速度的影响。这就抵消了温度升高对酶反应速度的影响。n在较宽的温度范围内在较宽的温度范围内(30-60)(30-60),温度对葡,温度对葡萄糖氧化酶活力的影响是不显著的萄糖氧化酶活力的影响是不显著的陌到娩绅妈嘉俭急故专臆牌秽睁帝重惹堤劝康停灌拴罗樱为效刽如绊襄甜食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11n4.4.抑制剂抑制剂n铜离子和其他铜离子和其他-SH-SH螯合剂能抑制霉菌葡萄糖螯合剂能抑制霉菌葡萄糖氧化酶氧化酶n阿拉伯糖是酶的竞争性抑制剂阿拉伯糖是酶的竞争性抑制剂n氰化物和一氧化碳对酶没有抑制作用氰化物和一氧化碳对酶没有抑制作用袖音宛僻查攫框檀富暴荫显贩疡墩窿计饮刚裕骡堡膛
6、描半茄誊做湛萄般孕食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11n5.5.葡萄糖氧化酶的分子组成和作用机制葡萄糖氧化酶的分子组成和作用机制n分子量为分子量为160 000160 000,每个酶分子中含有两个,每个酶分子中含有两个FADFAD。用。用-巯基乙醇裂开酶分子中的二硫键,巯基乙醇裂开酶分子中的二硫键,产生两个分子量为产生两个分子量为80 00080 000的亚基。的亚基。n黑曲霉葡萄糖氧化酶属于糖蛋白类黑曲霉葡萄糖氧化酶属于糖蛋白类铰毗拌总峻莎戌鸯通衙嘱秽栗滨移辫弦寺研喂续点纂挡闽削矣攀柴仟桐悬食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11n葡萄糖氧化酶催化的葡萄糖氧化酶催
7、化的反应速度反应速度同时取决于同时取决于O O2 2和葡萄糖的浓度,反应遵循和葡萄糖的浓度,反应遵循Ping Pong Ping Pong Bi BiBi Bi机制机制煮净餐侄阶皮巫酥勿历全痈追积辙陪窗同民储衷羌中饰贰紧蓑抉转豁符歼食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11葡萄糖氧化酶催化反应的葡萄糖氧化酶催化反应的乒乓机制乒乓机制:n图中图中G:-D-葡萄糖,葡萄糖,L:-D-葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内酯O2(非酶水解)(非酶水解)H2OG GL LO O2 2H H2 2O O2 2(氧化态)(氧化态)(氧化态)(氧化态)(还原态)(还原态)瘪再颜初推拽呢晃琼绪架备恤得平妖棍躬铅邵运
8、痘一狡许孤杜厩堰销厘饺食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11二、葡萄糖氧化酶活力测定二、葡萄糖氧化酶活力测定n测定葡萄糖氧化酶催化的反应中测定葡萄糖氧化酶催化的反应中氧消耗量氧消耗量 量压法外量压法外 氧电极法氧电极法n根据反应中根据反应中葡萄糖消耗葡萄糖消耗的速度的速度n葡萄糖酸和葡萄糖酸和H H2 2O O2 2生成生成速度速度脾沿讲友凡膀骆恳沛喷参旭骑壶亨繁存婉伶陛凿伏疚诈缓泪纷鲸俘把喳剐食品酶学-葡萄糖氧化酶11食品酶学-葡萄糖氧化酶11偶联酶法偶联酶法n葡萄糖氧化酶的活力测定葡萄糖氧化酶的活力测定偶联酶法偶联酶法n(1 1)原理原理:在有氧存在的情况下,葡萄糖氧化:在有
9、氧存在的情况下,葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的氧化反应生成葡萄糖酸和过氧化酶催化葡萄糖的氧化反应生成葡萄糖酸和过氧化氢,而加过氧化物酶后分解过氧化氢,分解出的氢,而加过氧化物酶后分解过氧化氢,分解出的氧又将邻氧又将邻-联二茴香胺氧化变成棕色物质,这一反联二茴香胺氧化变成棕色物质,这一反应使溶液吸光度增大(应使溶液吸光度增大(436nm436nm),与葡萄糖氧化酶),与葡萄糖氧化酶活性成线性关系活性成线性关系:n(2 2)定义定义:1 1个葡萄糖氧化酶单位个葡萄糖氧化酶单位“U”“U”相当于相当于3030条件下每条件下每minmin催化氧化催化氧化1 1gg分子的葡萄糖或葡分子的葡萄糖或葡萄糖酸的酶定
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