肿瘤免疫治疗思考和对策.ppt

肿瘤免疫治疗思考肿瘤免疫治疗思考和对策和对策肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗z主要通过相关的技术方法增强肿瘤抗原的主要通过相关的技术方法增强肿瘤抗原的免疫原性，进而诱导机体产生肿瘤特异性免疫原性，进而诱导机体产生肿瘤特异性的细胞免疫应答来消除肿瘤。的细胞免疫应答来消除肿瘤。z肿瘤相关及特异性抗原的存在是肿瘤免疫肿瘤相关及特异性抗原的存在是肿瘤免疫治疗的基础，但因受到肿瘤细胞本身及外治疗的基础，但因受到肿瘤细胞本身及外在多种因素的影响，怎样诱导有效的肿瘤在多种因素的影响，怎样诱导有效的肿瘤免疫应答，是一个令人困扰的问题。免疫应答，是一个令人困扰的问题。z1.1.1.1.非特异性主动免疫疗法非特异性主动免疫疗法非特异性主动免疫疗法非特异性主动免疫疗法 非特异性刺激因子非特异性刺激因子非特异性刺激因子非特异性刺激因子 细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子z2.2.2.2.特异性主动免疫疗法特异性主动免疫疗法特异性主动免疫疗法特异性主动免疫疗法 肿瘤疫苗：肿瘤疫苗：肿瘤疫苗：肿瘤疫苗：包包包包括括括括处处处处理理理理的的的的瘤瘤瘤瘤细细细细胞胞胞胞、肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤抗抗抗抗原原原原肽肽肽肽和和和和人人人人工工工工 合合合合成成成成肽肽肽肽抗原作为疫苗、癌基因产物。抗原作为疫苗、癌基因产物。抗原作为疫苗、癌基因产物。抗原作为疫苗、癌基因产物。肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性DCDCDCDC疫苗疫苗疫苗疫苗肿瘤的主动免疫治疗肿瘤的主动免疫治疗z1 1 1 1、过继性细胞免疫治疗、过继性细胞免疫治疗、过继性细胞免疫治疗、过继性细胞免疫治疗 LAKLAKLAKLAK、TILTILTILTIL、CTLCTLCTLCTLz2 2 2 2、肿瘤的抗体导向治疗、肿瘤的抗体导向治疗、肿瘤的抗体导向治疗、肿瘤的抗体导向治疗 抗体偶联物抗体偶联物抗体偶联物抗体偶联物 双特异性抗体双特异性抗体双特异性抗体双特异性抗体z3 3 3 3、特异性免疫治疗、特异性免疫治疗、特异性免疫治疗、特异性免疫治疗 分子疫苗分子疫苗分子疫苗分子疫苗 肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性CTLCTLCTLCTL细胞治疗细胞治疗细胞治疗细胞治疗 肿瘤的被动免疫治疗肿瘤的被动免疫治疗影响宿主肿瘤免疫的因素影响宿主肿瘤免疫的因素z肿瘤细胞低表达肿瘤细胞低表达肿瘤细胞低表达肿瘤细胞低表达MHCMHCMHCMHC分子分子分子分子z肿瘤细胞缺乏共刺激分子肿瘤细胞缺乏共刺激分子肿瘤细胞缺乏共刺激分子肿瘤细胞缺乏共刺激分子z肿瘤抗原是沉默抗原或为低免疫原性肿瘤抗原是沉默抗原或为低免疫原性肿瘤抗原是沉默抗原或为低免疫原性肿瘤抗原是沉默抗原或为低免疫原性z肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T细胞克隆丢失细胞克隆丢失细胞克隆丢失细胞克隆丢失z肿瘤细胞产生大量抑制因子肿瘤细胞产生大量抑制因子肿瘤细胞产生大量抑制因子肿瘤细胞产生大量抑制因子z肿瘤细胞增殖超过免疫细胞对其杀伤能力肿瘤细胞增殖超过免疫细胞对其杀伤能力肿瘤细胞增殖超过免疫细胞对其杀伤能力肿瘤细胞增殖超过免疫细胞对其杀伤能力第一信号第一信号第一信号第一信号MHCMHCMHCMHCTCRTCRCD4+TCD4+T共刺激分子共刺激分子共刺激分子共刺激分子CD28CD28共刺激分子共刺激分子共刺激分子共刺激分子B7B7肿瘤抗原肿瘤抗原肿瘤抗原肿瘤抗原第二信号第二信号第二信号第二信号第一信号第一信号第一信号第一信号MHCMHCTCRTCRCD4+TCD4+T共刺激分子共刺激分子共刺激分子共刺激分子CD28CD28共刺激分子（沉默型共刺激分子（沉默型共刺激分子（沉默型共刺激分子（沉默型/低免疫原）低免疫原）低免疫原）低免疫原）B7B7肿瘤抗原肿瘤抗原肿瘤抗原肿瘤抗原第二信号第二信号第二信号第二信号MHCMHC激发有效激发有效T细胞介导的抗肿瘤反应细胞介导的抗肿瘤反应的物质基础的物质基础z肿瘤抗原多肽必需经过抗原递呈细胞肿瘤抗原多肽必需经过抗原递呈细胞肿瘤抗原多肽必需经过抗原递呈细胞肿瘤抗原多肽必需经过抗原递呈细胞（APCAPC）加工处理后，形成）加工处理后，形成）加工处理后，形成）加工处理后，形成MHCMHC分子复合物，分子复合物，分子复合物，分子复合物，才能被才能被才能被才能被TCRTCR识别，产生识别，产生识别，产生识别，产生抗原特异性激发信号抗原特异性激发信号抗原特异性激发信号抗原特异性激发信号；z还需依赖于还需依赖于还需依赖于还需依赖于APCAPC表达的共刺激分子与表达的共刺激分子与表达的共刺激分子与表达的共刺激分子与T T细胞上细胞上细胞上细胞上表达的相应分子结合后产生的表达的相应分子结合后产生的表达的相应分子结合后产生的表达的相应分子结合后产生的共刺激信号共刺激信号共刺激信号共刺激信号。一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用z树突状细胞（DC）是机体内最重要的一群抗原提呈细胞，是机体免疫应答的有力启动者，以DC为物质基础的免疫疗法是近年来新发展起来的一种新的生物治疗手段。DC激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节z1.肿瘤特异性抗原的递呈；肿瘤特异性抗原的递呈；z2.肿瘤特异性肿瘤特异性CTL细胞和非特异性杀伤细胞细胞和非特异性杀伤细胞的活化；的活化；z3.效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤的效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤的限制因素的识别。限制因素的识别。z主要目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性的、主要目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性的、持久的免疫应答。持久的免疫应答。主要治疗策略主要治疗策略z（1）直接输注）直接输注DCs，以激发机体免疫功能，以激发机体免疫功能的主动免疫；的主动免疫；z（2）以经自体）以经自体DCs体外扩增、激活的体外扩增、激活的T淋淋巴细胞（巴细胞（CTL）为物质基础的过继免疫疗）为物质基础的过继免疫疗法，使肿瘤患者产生有效、持久的抗肿瘤法，使肿瘤患者产生有效、持久的抗肿瘤免疫效应。免疫效应。3.DC体外扩增的方法zDC在组织中含量甚微，细胞表面缺乏特征性的标志，不易与其它细胞分离。细胞来源的困难一度限制了对DC生物学特性等方面的深入研究。z在应用中发现治疗时使用的DC可能并不完全成熟，相当一部分回输的DC是非功能性的幼稚DC，从而大大降低了治疗效果；而如果仅仅应用未成熟的DC往往只能导致机体的免疫耐受。国内外许多实验室都致力于研究通过体外培养获得大量高纯度功能性成熟DC的方法 z目前用于临床和实验研究的DC大多是通过体外分离DC的前体细胞，在含有有关细胞因子的培养体系中诱导获得。z骨髓、脐血、外周血CD34+细胞或外周血单个核细胞均可作为体外培养DC的来源。z适当的细胞因子配伍和应用顺序对DC的培养具有重要作用。肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性DCs的制备的制备z细胞性肿瘤抗原体外冲击DC：包括采用灭活的肿瘤细胞或凋亡的肿瘤细胞负载DC;z合成的肿瘤细胞抗原或抗原肽体外冲击DC;z肿瘤抗原提取物负载DC：目前常用的提取物包括肿瘤细胞碎片、酸性洗脱肽及mRNA抽提物;z基因修饰的DC：包括肿瘤抗原编码的基因及某些细胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通过病毒导入DC。二、细胞毒性二、细胞毒性T细胞在肿瘤免疫中的运用细胞在肿瘤免疫中的运用zCTL抗凋亡能力测定 FLIP、Bcl-2、Baxz51Cr释放试验 对相应肿瘤细胞的杀伤作用 对自体PBMC的杀伤作用zT细胞趋化实验A病人选择病人选择z 已经病理组织学确诊为非小细胞肺癌z 已失去手术机会或不愿接受手术治疗z 住院病人z 临床分期（TNM）：期及期以上 z 年龄65岁z 预计生存期1.0年z 生存质量评分60分z 心、肝、肾等脏器功能基本正常z 知情同意的志愿受试者B肿瘤治疗肿瘤治疗za）将病人随机分为A、B、C三组，zA组：对照组，行常规的正规放疗或化疗；zB组：试验组，正规化疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zC组：试验组，正规放疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zb)肿瘤抗原特异性CTL输注程序：在减瘤治疗后，分3次回输体外扩增的自体T淋巴细胞（1109/次），即在最大程度降低机体的肿瘤负荷后，重建患者的细胞免疫功能。C疗效评价疗效评价za)二个疗程后，按WHO的判定标准，评定疗效zl CR（完全缓解）zl PR（部分缓解）zl MR（稳定）zl NC或PD（无变化或进展）zb)生存质量评分（Karnofsky的标准）z根据肿瘤患者治疗前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭理解与配合、同事的理解与配合、自身对癌症的认识、对治疗的态度、行为状态、日常活动z情况、面部的表情等进行等级综合评分。z c）临床症状体征改变的分析。zd）生存期、中位生存期的分析。ze）免疫功能状况的分析z 采用免疫荧光标记法分析患者治疗前后的T细胞及其亚群 功 能 变 化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-+、CD8+-IFN-+、CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L）z 采用ELISA法分析患者治疗前后的血清细胞因子水平变化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL-12、IFN-）z 患者治疗前后自体T淋巴细胞对相应肿瘤细胞的杀伤效应测定（51Cr释放试验）z 肽-MHC四聚体的测定三、免疫分子的分析及临床意义三、免疫分子的分析及临床意义Dual Parameter Histograms1 1FSC SizeSSC granularity3 32 2LymphsMonosGrans25抗抗体体的的基基本本结结构构是是一一个个Y Y型型的的多多肽肽链链，由由两两条条完完全全相相同同的的重重链链和轻链组成。和轻链组成。抗抗体体（Antibody,AbAntibody,Ab）是是血血液液和和组组织织液液中中的的一一类类糖糖蛋蛋白白，以以球球蛋蛋白白的的形形式式存存在在血血清清中中，也也是是B B淋淋巴巴细细胞胞识识别别抗抗原原后后增增殖殖分分化化为为浆浆细细胞胞所所产产生生的的体体液液免免疫疫应应答答效效应应分分子子，也也被被称称之之免免疫疫球蛋白球蛋白（Immunoglobulin,IgImmunoglobulin,Ig）。杂交瘤技术的创立和单克隆抗体杂交瘤技术的创立和单克隆抗体的研制及运用的研制及运用MilsteinMilstein和和KohlerKohler巧巧妙妙地地提提出出将将抗抗体体生生成成细细胞胞和和肿肿瘤瘤细细胞胞融融合合而而构构建建能能分分泌泌结结构构均均一一的的特特异异性性抗抗体体分分子子，这这为为抗抗体体的的运运用用和和产产业业化化带带来来革革命命性性突突破破。单单抗抗作作为为临临床床诊诊断断、治治疗疗、预预防防以以及及基基础础理理论论研研究究的的新新型型制剂，已日益显示出重要的作用和广泛的应用前景。制剂，已日益显示出重要的作用和广泛的应用前景。体外诊断试剂体外诊断试剂体内诊断体内诊断体内治疗：抑制移植排斥反应，抗肿瘤、抗感染。体内治疗：抑制移植排斥反应，抗肿瘤、抗感染。