乙肝母婴阻断检测技术要点--医学课件.ppt
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1、预防乙肝母婴传播检测及干预要点预防乙肝母婴传播检测及干预要点.预防乙肝母婴传播预防乙肝母婴传播一、概述一、概述二、乙型肝炎病毒的检测二、乙型肝炎病毒的检测三、慢性三、慢性HBV感染临床诊断感染临床诊断四、慢性四、慢性HBV感染者孕前孕期保健感染者孕前孕期保健 五、预防乙肝母婴传播干预要点五、预防乙肝母婴传播干预要点预防乙肝母婴传播预防乙肝母婴传播n n一、概述一、概述 1、乙型肝炎病毒的流行病学、乙型肝炎病毒的流行病学 2、乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒 3、传播途径、传播途径 4、HBV感染自然史感染自然史 1、乙型肝炎病毒的、乙型肝炎病毒的流行病学流行病学n n世界性分布世界性分布 WHO 2
2、0亿人感染过亿人感染过HBV 3.5亿人为慢性亿人为慢性HBV感染者感染者 约约100万人万人/年年 死于死于HBV感染所致的感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝衰竭、肝硬化和HCC n nHBsAg(+)率率2%低度流行区低度流行区 2%-8%中低度流行中低度流行 8%高度流行区高度流行区 n n 1992年年 9.75%中国卫生部 2008n n2006年 1-59岁 降至7.18%1-4 岁 0.96%5-14岁 2.42%15-59岁 8.57%1992年 以来儿童HBV感染者减少1900万 现有慢性现有慢性HBV感染者约感染者约9300万人,慢万人,慢性乙型肝炎患者约性乙型肝炎患者约2000
3、万例万例 n nWHO 2001年指南指出年指南指出HBsAg携带者携带者中中90%是围产期感染。是围产期感染。2、乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒n n病原:病原:HBV (hepatitis B virus)嗜肝嗜肝DNA病毒科病毒科 HBV的抵抗力较强,但的抵抗力较强,但65 10小时、小时、煮沸煮沸10分钟或高压蒸气均可灭活。环氧乙分钟或高压蒸气均可灭活。环氧乙烷烷(仍保留抗原性及免疫原性仍保留抗原性及免疫原性)、戊二醛、戊二醛、过氧乙酸和碘伏也有较好的灭活效果。过氧乙酸和碘伏也有较好的灭活效果。对干燥、紫外线均有耐受性。对干燥、紫外线均有耐受性。.uuHBVHBV阳性的血清中有三种颗粒:阳
4、性的血清中有三种颗粒:.完整的完整的HBVHBV颗粒,直径为颗粒,直径为42nm42nm,又名,又名DaneDane颗粒,颗粒,19651965年由丹娜年由丹娜发现,颗粒分为外壳和核心两部分。发现,颗粒分为外壳和核心两部分。.小球形颗粒,阳性血清中最多的颗粒,直径约小球形颗粒,阳性血清中最多的颗粒,直径约22nm22nm。含有表面抗原,含有表面抗原,不含核酸,为不完整的不含核酸,为不完整的HBVHBV颗粒,无传染性颗粒,无传染性.管形颗粒,直径约管形颗粒,直径约22nm22nm,长度,长度1001001000nm1000nm。实际上是一串小球。实际上是一串小球形颗粒聚合在一起形成,含有表面抗原
5、,不含核酸,无传染性。形颗粒聚合在一起形成,含有表面抗原,不含核酸,无传染性。3、传播途径、传播途径血液、体液(唾液、精液、阴 道分泌物、乳汁、泪液、尿液)母婴输血及血制品性传播皮肤、粘膜 HBV不经呼吸道和消化道传播不经呼吸道和消化道传播,未发现未发现HBV能经吸血昆虫(蚊、臭虫等)传播能经吸血昆虫(蚊、臭虫等)传播 n n 传染源:携带者、急慢性病人传染源:携带者、急慢性病人 传染性传染性 主要取决于血液中主要取决于血液中HBV DNA 水平,与血清水平,与血清ALT、AST或胆红素水或胆红素水 平无关。平无关。n n 人群易感性人群易感性 普遍易感普遍易感 新生儿、易感儿童、高危人群新生
6、儿、易感儿童、高危人群重点预防n n 潜伏期:155个月4、HBV感染自然史感染自然史n n自然史自然史 感染时的年龄是影响慢性化的最主要因感染时的年龄是影响慢性化的最主要因素。素。围产期和婴幼儿时期感染围产期和婴幼儿时期感染HBV,分别,分别有有90%和25%30%发展成慢性感染,发展成慢性感染,而而5岁以后感染者仅有岁以后感染者仅有5%10%发展为慢发展为慢性感染性感染 n n婴幼儿期婴幼儿期 免疫耐受期免疫耐受期 免疫清除期免疫清除期 非活动或低(非)复制期非活动或低(非)复制期 再活动期再活动期 免疫耐受期:免疫耐受期:血清血清HBsAg和和HBeAg阳性,阳性,HBVDNA载量高(载
7、量高(2106 IU/ml,107拷贝拷贝/ml),),ALT水平正常,肝组织学无明显异水平正常,肝组织学无明显异常常HBeAganti-HBeHBVDNAALT 肝组织无明显异常 肝组织坏死炎症表现 肝组织无明显异常 肝组织坏死炎症慢性慢性HBVHBV感染的自然病程感染的自然病程 免疫耐受 免疫清除 非活动或低复制期 再活动活动性慢性乙型肝炎肝硬化HBsAg活动性慢性乙型肝炎肝硬化二、乙型肝炎病毒的检测二、乙型肝炎病毒的检测 1、乙型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测 2、乙型肝炎病毒血清学标志物、乙型肝炎病毒血清学标志物 3、慢性、慢性HBV感染临床诊断感染临床诊断 检测方法检测方法n n
8、检测方法:酶联免疫吸附试验(检测方法:酶联免疫吸附试验(ELISA)、)、金标记免疫分析(胶体金)、化学发光免金标记免疫分析(胶体金)、化学发光免疫试验(疫试验(CLIA)等。)等。n n推荐使用酶联免疫吸附试验。推荐使用酶联免疫吸附试验。n n定量、定性定量、定性检测流程检测流程n n孕产妇初次接受孕产期保健时,提供乙肝孕产妇初次接受孕产期保健时,提供乙肝表面抗原检测。检测结果阳性,报告表面抗原检测。检测结果阳性,报告“乙乙肝表面抗原阳性肝表面抗原阳性”,确定乙肝病毒感染。,确定乙肝病毒感染。n n有条件的地区,可在筛查时直接进行乙肝有条件的地区,可在筛查时直接进行乙肝病毒感染血清学标志物(
9、两对半)检测。病毒感染血清学标志物(两对半)检测。乙肝病毒感染血清学标志物乙肝病毒感染血清学标志物n n乙肝表面抗原(乙肝表面抗原(HBsAg)n n乙肝表面抗体(抗乙肝表面抗体(抗HBs)n n乙肝乙肝e抗原(抗原(HBeAg)n n乙肝乙肝e抗体(抗抗体(抗HBe)n n乙肝核心抗体(抗乙肝核心抗体(抗HBc)n nHBVDNA乙肝病毒感染标志物乙肝病毒感染标志物抗原抗原抗原抗原抗体抗体抗体抗体外外外外 膜膜膜膜HBsAgHBsAgHBsAbHBsAb核壳分泌蛋白核壳分泌蛋白核壳分泌蛋白核壳分泌蛋白HBeAgHBeAgHBeAbHBeAb核壳结构蛋白核壳结构蛋白核壳结构蛋白核壳结构蛋白HB
10、cAb HBcAb 乙肝乙肝“两对半两对半”酶联免疫吸附分析技术原理:先将已知的抗体或抗原结合在某种固相载体上,并技术原理:先将已知的抗体或抗原结合在某种固相载体上,并保持其免疫活性。测定时,将待检标本和酶标抗原或抗体按保持其免疫活性。测定时,将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。用洗不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离部分。最后加入底物显涤的方法分离抗原抗体复合物和游离部分。最后加入底物显色,根据颜色深浅进行定性或定量测定。色,根据颜色深浅进行定性或定量测定。n n用于测定抗原的技术类型有:双抗体夹心法、双
11、位点一步法、用于测定抗原的技术类型有:双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法。竞争法。n n用于测定抗体的技术类型有:间接法、双抗原夹心法、竞争用于测定抗体的技术类型有:间接法、双抗原夹心法、竞争法。法。乙肝五项方法学乙肝五项方法学n n乙肝表面抗原(乙肝表面抗原(HBsAg):双抗体夹心法):双抗体夹心法n n乙肝表面抗体(抗乙肝表面抗体(抗HBs):双抗原夹心法):双抗原夹心法n n乙肝乙肝e抗原(抗原(HBeAg):双抗体夹心法):双抗体夹心法n n乙肝乙肝e抗体(抗抗体(抗HBe):竞争法):竞争法n n乙肝核心抗体(抗乙肝核心抗体(抗HBc):竞争法):竞争法n n双抗体夹心法、双抗原夹
12、心法:一定范围双抗体夹心法、双抗原夹心法:一定范围内,显色程度与待测成分的含量成正比。内,显色程度与待测成分的含量成正比。n n竞争法:显色程度与待测成分的含量成反竞争法:显色程度与待测成分的含量成反比比竞争法原理n n以乙肝乙肝e抗体(抗抗体(抗HBe)检测为例:)检测为例:n n在微孔板上预包被在微孔板上预包被HBeAg,加入待测样本,加入待测样本和酶标抗体(抗和酶标抗体(抗HBe-HRP)试剂进行温试剂进行温育,酶标抗体和样本中的抗育,酶标抗体和样本中的抗HBe竞争酶标竞争酶标板上包被的抗原,若样本中无抗板上包被的抗原,若样本中无抗HBe时,时,酶标抗体与包被抗原结合形成酶标抗体与包被抗
13、原结合形成“包被抗原包被抗原-酶标抗体复合物酶标抗体复合物”,洗板后加入酶底物显,洗板后加入酶底物显色溶液进行显色反应。若样本中存在抗色溶液进行显色反应。若样本中存在抗HBe时,会与酶标抗体竞争形成时,会与酶标抗体竞争形成“包被抗包被抗原原-抗体复合物抗体复合物”,不显色。,不显色。乙肝五项检测的影响因素乙肝五项检测的影响因素1.1.1.1.样本采集与处理的影响样本采集与处理的影响样本采集与处理的影响样本采集与处理的影响2.2.2.2.干扰物质的影响:常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、干扰物质的影响:常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、干扰物质的影响:常见的干扰物质有
14、:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、干扰物质的影响:常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig Ig Ig Ig 抗体、交叉反应物质和其它抗体、交叉反应物质和其它抗体、交叉反应物质和其它抗体、交叉反应物质和其它物质等物质等物质等物质等3.3.3.3.药物的影响:高效价的乙肝免疫球蛋白会与药物的影响:高效价的乙肝免疫球蛋白会与药物的影响:高效价的乙肝免疫球蛋白会与药物的影响:高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg形成复合物,影响
15、形成复合物,影响形成复合物,影响形成复合物,影响HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg的检出的检出的检出的检出4.4.4.4.HooKHooKHooKHooK效应影响:随着效应影响:随着效应影响:随着效应影响:随着ELISAELISAELISAELISA一步法的应用,一些标本中抗原含量过高,一步法的应用,一些标本中抗原含量过高,一步法的应用,一些标本中抗原含量过高,一步法的应用,一些标本中抗原含量过高,产生产生产生产生HooKHooKHooKHooK效应。影响检测结果,采用同步稀释测定或使用线性范围高的效应。影响检测结果,采用同步稀释测定或使用线性范围高的效应。影响检测结果,采用同步稀释测定
16、或使用线性范围高的效应。影响检测结果,采用同步稀释测定或使用线性范围高的两对半定量法可以减两对半定量法可以减两对半定量法可以减两对半定量法可以减HooKHooKHooKHooK反应的发生反应的发生反应的发生反应的发生5.5.5.5.试剂的影响试剂的影响试剂的影响试剂的影响免疫金标记技术:n n胶体金是一种是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原胶体金是一种是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种免疫标记技术,胶体金是由氯金酸抗体的一种免疫标记技术,胶体金是由氯金酸(HAuCl4)(HAuCl4)在还原剂的作用下,聚合成一定大小的金颗在还原剂的作用下,聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种
17、稳定的胶体状态,故称粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合而不影响蛋白质的分子的正电荷基团形成牢固的结合而不影响蛋白质的生物特性。生物特性。n n免疫金标记技术:免疫金标记技术:主要利用了金颗粒具有高电子密主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量肉眼可
18、见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。的快速免疫检测方法中。HBsAg阳阳性性,目目前前感感染染,患患者者或或病病毒毒携携带者。带者。HBsAg一一般般于于感感染染后后4-6周周阳阳转转,当当出出现现ALT异异常常、肝肝炎炎症症状状和和体体征征时时,血血清清中中HBsAg达高峰。达高峰。自自限限性性HBV感感染染中中,HBsAg持持续续约约1-6周后消失。周后消失。慢性慢性HBV感染时,感染时,HBsAg可持续存在。可持续存在。HBsAg阳性见于:阳性见于:!急性乙肝急性乙肝慢性乙肝;慢性乙肝;HBsAg携带者;携带者;乙肝后肝硬化和原发性肝细胞癌。乙肝后肝硬化和原发性
19、肝细胞癌。.抗抗HBs是是保保护护性性抗抗体体。抗抗HBs阳阳性性,曾曾感感染或免疫,机体已产生免疫力。染或免疫,机体已产生免疫力。见于:见于:1.感感染染HBV后后的的恢恢复复期期,在在HBsAg消消失失后后间隔一定时间抗间隔一定时间抗-HBs出现;出现;2.隐隐性性感感染染的的健健康康人人,小小量量多多次次接接触触HBV,自身产生了免疫力;自身产生了免疫力;3.注注射射乙乙肝肝疫疫苗苗或或乙乙肝肝免免疫疫球球蛋蛋白白后后,产产生生免疫。免疫。4.急性重型肝炎急性重型肝炎 抗抗-HBc 总抗体总抗体 一般在一般在HBsAg出现出现3-5周后阳转周后阳转 抗抗-HBc-IgG,感染过,感染过H
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