生化检验项目校准ppt.ppt
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1、生化检验项目校准泸州市人民医院泸州市人民医院 校准:在规定条件下,为确定测量仪器校准:在规定条件下,为确定测量仪器(或或测量系统测量系统)所指示的量值,或实物量具所指示的量值,或实物量具(或参考或参考物质物质)所代表的值,与对应的由标准所复现的量所代表的值,与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。值之间关系的一组操作。仪器的性能验证:仪器的性能验证:零点漂移零点漂移 波长准确度及重复性波长准确度及重复性 杂散光杂散光 吸光度正确度吸光度正确度 吸光度重复性吸光度重复性 吸光度线性误差吸光度线性误差 交叉污染率交叉污染率 温度正确度温度正确度 比色杯间差距比色杯间差距检测项目校准检测项目校
2、准 参考方法参考方法参考方法参考方法 决定性方法决定性方法决定性方法决定性方法 厂家方法厂家方法厂家方法厂家方法 常规分析常规分析常规分析常规分析 一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品二级标准品二级标准品二级标准品二级标准品校校校校 准准准准 品品品品校准目的是准确度的传递校准目的是准确度的传递溯溯溯溯源源源源校校校校准准准准项目校准主要涉及内容项目校准主要涉及内容校准方法的选择校准方法的选择校准品的选择及准备校准品的选择及准备校准频率的选择校准频率的选择校准后的验证校准后的验证问题讨论问题讨论校准方法的选择校准方法的选择线性校准方法需选用线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物个或多
3、个已知浓度的标准物质或校准品,质或校准品,1点线性校准通常被定义为点线性校准通常被定义为K因子校因子校准,仅空白溶液用于校准;在生化分析仪上最常准,仅空白溶液用于校准;在生化分析仪上最常用的用的2点线性校准等同于分析化学中的外标点线性校准等同于分析化学中的外标2点法,点法,需使用空白溶液和需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。个已知浓度的校准品。线性如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反应(如免疫分析方法),则应选用非线性校准模式,应(如免疫分析方法),则应选用非线性校准模式,需涉及需涉及3至至6个校准品,采用曲线拟合、多项式、对个校准品,采用
4、曲线拟合、多项式、对数等方式建立非线性函数数等方式建立非线性函数。非线性K K因子法(因子法(+-+-):):理论理论k k值:根据理论摩尔消光系数来计算。通常试值:根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生产厂家给出的剂生产厂家给出的k k值都属于。值都属于。实测实测K K值:是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置值:是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K K值值校准校准k k值:是根据仪器当前的实际状态,试剂的稳值:是根据仪器当前的实际状态,试剂的稳定性等通过校准品校准后得到的定性等通过校准品校准后得到的K K值。值。K K因数法适用的分析方法有一点终点法,两点因数法适用的分析方法有一点终点法,两点
5、终点法,两点速率法,多点速率法。终点法,两点速率法,多点速率法。线性校准(线性校准(LinearLinear):其反应为线性(直线),):其反应为线性(直线),一般只需一个校准品进行校准。一般只需一个校准品进行校准。非线性法:又称非直线性校准法非线性法:又称非直线性校准法 非线性法包非线性法包括括logit-loglogit-log法、指数函数法、样条函数法等法、指数函数法、样条函数法等方法方法Logit-log3pLogit-log3p对数函数法中的一种,适用于浓对数函数法中的一种,适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P P表表示参数之意,由示参数
6、之意,由3 3个参数(个参数(S1AbsS1Abs、k k、a a)参与)参与计算。计算。S1AbsS1Abs表示试剂空白,表示试剂空白,K K表示校准所得斜表示校准所得斜率,率,a a表示近似常数。表示近似常数。logit-log4plogit-log4p对数函数法中的一种,适用于浓度升对数函数法中的一种,适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。高而吸光度表现为收束的工作曲线。样条函数法(样条函数法(splinespline):是将每一标准液测定的):是将每一标准液测定的吸光度连接起来(点对点),形成一个完整曲线,吸光度连接起来(点对点),形成一个完整曲线,即为曲线拟合。该曲线拟合优于折
7、线法校准。即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。logit-logXplogit-logXp与样条函数法与样条函数法抛物线型抛物线型(左下图左下图),则多考虑用,则多考虑用logiclogic方法拟合。方法拟合。曲线类型不确定时,或校准曲线类型如图曲线类型不确定时,或校准曲线类型如图12-3712-37所示所示的的S S型非线性校准类型,则多考虑型非线性校准类型,则多考虑SplainSplain方法拟合。方法拟合。校准品的选择及准备校准品的选择及准备校准品:含有已知量的欲测物,用以校准该测定方法的数值,它与该方法、试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统性误差
8、。l最好为人血清基质,减少基质效应l仪器、试剂、校准品的配套性l如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质l要有明确的不确定度l冰冻产品的处理步骤冰冻产品的处理步骤:从从-70-70或或-20-20冰箱中取出冰箱中取出样本,置室温(样本,置室温(18-2518-25)下平衡,使之完全融化,下平衡,使之完全融化,温和混匀。温和混匀。l冻干产品的复溶步骤:冻干产品的复溶步骤:从冰箱中取出样本,置室从冰箱中取出样本,置室温(温(18-2518-25)下平衡,并放置在水平桌面上,轻下平衡,并放置在水平桌面上,轻拍小瓶,以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部,小拍小瓶,以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部,小心拔开
9、胶塞,采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确心拔开胶塞,采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水,压胶塞到原位后置室温加入规定体积的去离子水,压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解,温和混匀。下使之完全溶解,温和混匀。应按厂家提供说明书操作应按厂家提供说明书操作。校准品浓度水平及个数选择校准品浓度水平及个数选择校准至少包含你需要报告结果的内容校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。范围。校准范围也定义为分析方法的工作范围。校准范围也定义为分析方法的工作范围。个数要与仪器要求相匹配个数要与仪器要求相匹配案例分析案例分析一、现象:一、现象:某品牌某品牌HCYHCY试剂(仪器:雅培试剂(仪器:雅
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