基于电导率-含水量曲线法制备、优化广藿香挥发油微乳的研究.pdf

2023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.8基于电导率-含水量曲线法制备、优化广藿香挥发油微乳的研究*钟文嘉，黄益穗，刘灼波（广州中医药大学第一附属医院，广东广州510405）摘要目的：探讨电导率-含水量曲线法的可靠性，并使用该方法确定O/W型微乳成型临界点，制备及优化广藿香挥发油微乳。方法：比较目测法和电导率-含水量曲线法确定O/W型微乳成型临界点的精确性；伪三元相图筛选油相、表面活性剂、助表面活性剂的类型、Km值；以微乳的平均粒径、多分散系数（PDI）作为评价指标，响应面法优化广藿香挥发油微乳的配制条件；优化后的微乳分别遮光、不遮光、高速离心等方法考察其稳定性。结果：电导率-含水量曲线法确定的O/W型微乳成型临界点更为精确；伪三元相图筛选出的微乳处方为m广藿香挥发油/mIPM=（1：1）、TW80、PEG400；响应面法筛选出的最优处方为：广藿香挥发油为10.07%，IPM为10.07%，TW80为60.43%，PEG400为19.43%，Km值为3.11，搅拌速率为622r/min，该工艺下制得的微乳的平均粒径为（17.68依0.47）nm、PDI为（0.074依0.003）；优化后的微乳稳定性较好。结论：电导率-含水量曲线法确定的O/W型微乳成型临界点精确性高，使用该方法筛选、优化微乳后，获得的广藿香挥发油微乳稳定性好。关键词广藿香挥发油；电导率-含水量曲线法；目测法；渗滤电导模型；单因素试验；响应面试验中图分类号R283.6文献标识码A文章编号1672-951X（2023）08-0030-05DOI：10.13862/43-1446/r.2023.08.006Study on Preparation and Optimization of Pogostemon Cablin Volatile OilMicroemulsion Based on Conductivity-Water Content Curve MethodAbstractObjective:To explore the reliability of the conductivity-water content curve method,and use thismethodtodeterminethecriticalpointofO/W microemulsionformation,preparationandoptimizationofpogostemon cablin volatile oil microemulsion.Methods:The accuracy of visual method and conductivity-watercontent curve method for determining the critical point of O/W microemulsion forming was compared.Thepseudo-ternary phase diagram was used to screen the type and Km value of oil phase,surfactant andcosurfactant.The average particle size and polydispersity index(PDI)of microemulsion were used as evaluationindexes,and the preparation conditions of pogostemon cablin volatile oil microemulsion were optimized byresponse surface method.The stability of the optimized microemulsion was investigated by shading,non-shadingandhigh-speedcentrifugation.Results:ThecriticalpointofO/Wmicroemulsionformingdeterminedbyconductivity-water content curve method was more accurate.The microemulsion prescription screened by pseudo-ternary phase diagram was mpogostemon cablin oil/mIPM=(1:1),TW80,PEG400.The optimal prescription screened byresponse surface methodology was as follows:pogostemon cablin volatile oil was 10.07%,IPM was 10.07%,TW80 was 60.43%,PEG400 was 19.43%,Km was 3.11,and the stirring rate was 622 r/min.The averageparticle size of the microemulsion prepared by this process was(17.68依0.47)nm,and the PDI was(0.074依0.003).The optimized microemulsion has good stability.Conclusion:The accuracy of the critical point of O/Wmicroemulsiondeterminedbytheconductivity-watercontentcurvemethodishigh.Afterscreeningandoptimizing the microemulsion by this method,the obtained pogostemon cablin volatile oil microemulsion has goodstability.Keywordspogostemoncablinvolatileoil;conductivity-watercontentcurvemethod;visualmethod;percolation conductance model;single factor test;response surface test引用：钟文嘉，黄益穗，刘灼波.基于电导率-含水量曲线法制备、优化广藿香挥发油微乳的研究J.中医药导报,2023,29(8):30-34,52.*基金项目：广东省中医药局科研项目（20222054）302023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.8广藿香挥发油是广藿香的主要药用有效成分1，具有芳香化浊、解暑的功效2。现代药理学表明，广藿香挥发油具有抗菌、抗炎、调整胃肠运动功能等作用3。由于广藿香挥发油具脂溶性，口服入药难于在胃肠道被吸收，制成微乳制剂（O/W型）可改善其在胃肠道的吸收性，从而提高生物利用度4。微乳制剂是由一定比例的油相、水相、表面活性剂和助表面活性剂配制而成的热力学稳定体系，其粒径一般介于10100 nm之间。要获得稳定性好的O/W型微乳，找准O/W型微乳成型临界点尤为重要。目前的报道5-6多为目测法，即肉眼观察体系由混浊至澄清作为O/W型微乳成型临界点；也有报道7-9提到建立电导率-含水量曲线法，以电导率最大值时对应的含水量值作为O/W型微乳成型临界点，但是没有采用更为直观的指标来证实电导率-含水量曲线法的精确性。本研究基于此背景，分别采用目测法、电导率-含水量曲线法确定微乳的O/W型微乳成型临界点，按各自获得的临界点分别配制微乳，通过比较平均粒径、多分散系数（polydiseperse Index，PDI），证实电导率-含水量曲线法比目测法确定的O/W型微乳成型临界点更为精确，并在此基础上，使用该方法制备并优化广藿香挥发油微乳，以期为中药微乳制剂的工业化发展提供借鉴。1仪器与试药1.1仪器Zetasizer Nano ZS90型纳米粒径电位分析仪（MALVERN公司）；HT7700型透射式电子显微镜（HITACHI公司）；MS603S型天平（美国梅特勒-托利多公司）；二级反渗透纯化水制水机（广州万冠制药设备公司）。1.2试药广藿香挥发油（批号：P905696-23）、肉豆蔻酸异丙酯（IPM）（批号：1811858）均购于上海麦克林生化科技有限公司；油酸（OA）（批号：20220120）、吐温80（TW80）（批号：20211201）、聚乙二醇400（PEG400）（批号：20211215）、1,2-丙二醇（批号：20210901）、无水乙醇（批号：20211201）均购于天津大茂化学试剂厂；聚氧乙烯氢化蓖麻油（RH40）（批号：2022032038R）购于广东翁江试剂公司；所有试剂均为分析纯，药用级别纯化水等。2方法与结果2.1目测法和电导率-含水量曲线法制备空白微乳和广藿香挥发油微乳从预试验筛选出3个稳定的空白微乳处方，分别制备3个空白微乳和3个载药微乳。（见表1）（1）电导率-含水量曲线法：以处方3为例，将助表面活性剂、表面活性剂先混匀，再加入油相，在500 r/min转速下磁力搅拌10 min，获得4 g的微乳原液，然后加入0.2 g的纯化水，搅拌20 s后，测电导率值并记录，重复上述操作步骤，直至测得微乳含水量80%时电导率值，将得到的微乳含水量值、对应的电导率值，使用软件Origin 2021绘制电导率-含水量曲线，将电导率获得最大值时，对应的含水量值作为O/W型微乳成型临界点。（见图1）（2）目测法：将助表面活性剂、表面活性剂先混匀，再加入油相，500 r/min转速下磁力搅拌10 min，获得4 g的微乳原液，然后慢慢加入纯化水，搅拌，观察微乳状态，重复上述操作，直至微乳由混浊状态变为澄清，记录加入纯化水的质量，此时微乳的含水量值即为O/W型微乳成型临界点。上述两种配制方法，由3名操作人员单独进行，将获得的实验结果取平均值，作为目测法和电导率-含水量曲线法的O/W型微乳成型临界点，然后进一步比较两种方法制备的微乳的平均粒径和多分散系数（PDI）。由于单独使用广藿香挥发油作为油相取代处方1、2的OA、处方3的IPM，均不能获得稳定的微乳（出现混浊、分层）；将广藿香挥发油与OA、广藿香挥发油与IPM按质量比2颐1混匀后，作为混合油相，按表1处方1、2、3的配比，获得微乳的平均粒径、PDI偏大，稳定性一般；将广藿香挥发油与OA、广藿香挥发油与IPM按质量比1颐1混匀后，获得微乳的平均粒径、PDI均较小，稳定性较好，故选定该比例作为混合油相，备用。表 1空白微乳和载药微乳处方组成、配比处方组成m表面活性剂/m油相/油相表面活性剂助表面活性剂水相m助表面活性剂m总表面活性剂1OATW801,2-丙二醇纯化水2颐11颐202OARH40无水乙醇纯化水3颐11颐103IPMRH40PEG400纯化水1颐11颐94m广藿香挥发油/mOA=1:1TW801,2-丙二醇纯化水2颐11颐205m广藿香挥发油/mOA=1:1RH40无水乙醇纯化水3颐11颐106m广藿香挥发油mIPM=1:1RH40PEG400纯化水1颐11颐9图 1处方 3 空白微乳、处方 6 载药微乳的电导率-含水量曲线图2.2目测法和电导率-含水量曲线法结果对比依据“2.1”项表格的处方单独进行，将获得的实验结果取平均值，作为目测法和电导率-含水量曲线法的O/W型微乳成型临界点。各取两种方法获得的微乳适量，稀释100倍后测量平均粒径、PDI，实验结果见表2。结果表明，目测法测得的O/W型微乳成型临界点普遍靠前，在该临界点下测得微乳的平均粒径、PDI比电导率-含水量曲线法偏大，将处方16微乳各取适量，分别滴入亚甲基蓝试剂和苏丹芋试剂，静置观察，可见上述微乳中，亚甲基蓝试剂的扩散速度均明显大于苏丹芋试剂，表明上述微乳类型均为O/W型。该实验证实了目测法和电导率-含水量曲线法均能对O/W型微乳成型临界点有较准确的判断，但是电导率-含水量曲线法精确度更高，获得的微乳更为稳定，证实了目测法确定的O/W型微乳成型临界点，体系可能处于W/O型和O/W型双连续相转变为O/W型的最后阶段10-11，尚未完全转变为O/W型。该结果也进一步验证了电导率-含水量曲线法确定的临界点比目测法更为精确。序号电导率/（滋s/cm）电导率/（滋s/cm）312023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.8表 2目测法、电导率-含水量曲线法检测结果目测法电导率-含水量曲线法临界点/%平均粒径/nmPDI临界点/%平均粒径/nmPDI159.1822.680.14169.2318.820.122262.9626.190.15773.3323.810.139356.6227.060.17267.2125.790.153457.4524.290.14565.5222.180.125565.5227.460.13669.2325.160.133654.5528.390.16968.2525.740.1582.3工艺筛选2.3.1电导率-含水量曲线法制备工艺的设定将广藿香挥发油分别与OA、IPM按质量比1颐1的比例混匀，作为油相备用，选取预试验中筛选出的RH40、TW80作为表面活性剂，PEG400、1,2-丙二醇、无水乙醇作为助表面活性剂。选择在室温（25 益）下进行试验，首先使用磁力搅拌器在500 r/min转速下将表面活性剂和助表面活性剂按照固定质量配比Km值（Km值=表面活性剂/助表面活性剂）为2颐1混匀，再按（含药油相/总表面活性剂）质量比分别为1颐9、2颐8、3颐7、4颐6、5颐5、6颐4、7颐3、8颐2、9颐1，在500r/min转速下搅拌10min制成微乳原液4g，然后加入0.2 g纯化水，搅拌20 s，测电导率，再加入0.2 g纯化水，搅拌，测电导率，直至体系含水量为80%时，将获得的含水量、电导率值输入Origin 2021绘图，建立电导率-含水量曲线，将电导率最大时的含水量值作为O/W型微乳成型临界点，对于不能成乳或者成乳后平均粒径未在10100 nm范围的处方予以剔除；此外，部分微乳成乳后，静置24 h又重新出现混浊，这类处方也予以剔除；最后，根据油相、总表面活性剂、水相的占比，使用Origin 2021软件给合格的微乳处方绘制伪三元相图。2.3.1.1油相、表面活性剂、助表面活性剂类型的选定按“2.3.1”项的方法，将不同类型的油相、表面活性剂、助表面活性剂一一组合，按照固定配比Km为2颐1，混合油相、总表面活性剂质量比分别为1颐9、2颐8、3颐7、4颐6、5颐5、6颐4、7颐3、8颐2、9颐1，配制微乳，将合格的微乳处方绘制伪三元相图。结果显示，图2D的微乳成乳区域最大，故选定广藿香挥发油/IPM作为含药油相，TW80作为表面活性剂、PEG400作为助表面活性剂，用于下阶段Km值的筛选。（见图2）2.3.1.2Km值的选定按“2.3.1”项的方法，将微乳处方广藿香挥发油/IPM，TW80、PEG400，选定Km为4颐1、3颐1、2颐1、1颐1，含药油相、总表面活性剂质量比分别为1颐9、2颐8、3颐7、4颐6、6颐4、5颐5、6颐4、7颐3、8颐2、9颐1，配制微乳，筛选Km值。结果显示，当Km值为3颐1时微乳成乳区域最大。（见图3）图 3不同 Km 值的伪三元相图2.3.2单因素试验“2.3.1.1”项和“2.3.1.2”项筛选结果表明，含药油相与总表面活性剂质量比为1颐9、2颐8、3颐7、4颐6、5颐5、6颐4时，可获得合格微乳，含药油相与总表面活性剂质量比为7颐3、8颐2、9颐1时不能配制成乳，故选定含药油相占比最小为10%，最大为60%（即广藿香挥发油占比5%30%）用于下一阶段响应面法工艺筛选；“2.3.1.2”项筛选结果表明，表面活性剂与助表面活性剂质量配比Km值为2颐1、3颐1时可获得较大的微乳成乳区域，当Km值为4颐1或1颐1时微乳成乳区域明显变小，说明上述两种质量配比下，不能获得较大的含药油相占比（微乳载药量）。当Km值跃4颐1或Km值约1颐1时，微乳成乳区域会进一步缩序号图 2不同微乳处方的伪三元相图322023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.8小，因此选定最大Km值为4颐1，最小Km值为1颐1进行下一阶段响应面法工艺筛选。试验过程中发现磁力搅拌器转速的不同，对微乳的成乳效果有一定的影响，为了考察磁力搅拌器转速对微乳成乳效果的影响，采取固定含药油相与总表面活性剂质量比为1颐9、Km为3颐1，考察磁力搅拌器转速对微乳成乳效果的影响。结果发现，磁力搅拌器转速低于500r/min时成乳时间较长，且搅拌不够均匀，不利于后续微乳的配制。当磁力搅拌器转速高于1 100 r/min时，过高的转速带动了烧杯的转动影响了搅拌效果，且过高的转速有可能将空气带入，制得的微乳有气泡分散在体系中。基于上述原因，选定磁力搅拌器转速为5001100 r/min。2.3.3响应面法工艺筛选12-132.3.3.1响应面法考察因素按“2.3.2”项的结果制定响应面法考察因素水平表。（见表3）表 3响应面法考察因素水平表14-15考察因素A/广藿香挥发油/%B/KmC/磁力搅拌转速/（r/min）-1.6825.001.00500-110.071.61622017.502.50800124.933.399781.68230.004.0011002.3.3.2方案设计及结果16使用软件Design-Expert 12.0对表3进行响应面法设计，统计结果，见表4。表 4工艺和结果试验号A/%CC/（r/min）平均粒径/nmPDI110.071.6162221.390.088224.931.6162233.670.147310.073.3962218.530.074424.933.3962237.530.242510.071.6197819.760.081624.931.6197824.390.096710.073.3997819.340.079824.933.3997840.490.29895.002.5080012.280.0711030.002.5080025.370.1011117.501.0080030.360.2161217.504.0080035.670.2431317.502.5050027.640.0831417.502.50110028.430.1181517.502.5080027.070.0761617.502.5080027.430.1111717.502.5080028.610.1201817.502.5080024.380.0691917.502.5080027.630.1132017.502.5080028.320.124对表4的获得的结果进行平均粒径、PDI的方差分析，见表56。结果显示，平均粒径、PDI获得的数学模型均为极显著性，且失拟项不具显著性，表明上述数学模型模拟的情况较为准确17-18。显著因素广藿香挥发油（%）、Km对粒径、PDI响应面分析见图4。平均粒径、PDI取最低值时拟合方程分别为：平均粒径=27.230+5.790A+1.875B-0.426C+2.905AB-0.688AC+1.835BC-2.912A2+2.105B2+0.344AC2；PDI=0.102+0.037A+0.024B+0.005C+0.039AB+0.001AC+0.015BC-0.006A2+0.044B2-0.001C2。由于平均粒径对微乳体系的影响更为重要，故选择最小平均粒径对应的点作为最优处方点，即广藿香挥发油为10.07%、IPM 为10.07%、TW80 为60.43%、PEG400 为19.43%，Km为3.11，搅拌速率为622 r/min，获得的平均粒径理论值为17.64 nm，PDI为0.069。表 5平均粒径的方差分析变异来源平方和自由度均方显著性模型814.76990.5314.230.000 1极显著A457.851457.8571.99约0.000 1极显著B48.03148.037.550.020 5显著C2.4712.470.390.546 9AB67.51167.5110.620.008 6AC3.7813.780.590.458 5BC26.94126.944.240.066 6A2122.191122.1919.210.001 4B263.86163.8610.040.010 0C21.7111.710.270.615 5残差63.60106.36失拟项52.16510.434.560.060 7不显著纯误差11.4452.29总变异878.3619表 6PDI 的方差分析变异来源平方和自由度均方显著性模型0.071 790.008 05.470.006 9 显著A0.019 210.019 213.160.004 6 显著B0.007 810.007 85.360.043 1 显著C0.000 310.000 30.192 50.670 1AB0.012 210.012 28.410.015 8AC6E-0616E-060.004 20.949 6BC0.001 810.001 81.220.295 9A20.000 610.000 60.392 60.544 9B20.028 510.028 519.550.001 3C20.000 010.000 00.013 60.909 6残差0.014 6100.001 5失拟项0.011 850.002 44.250.069 3 不显著纯误差0.002 850.000 6总变异0.086 319图4广藿香挥发油、Km 对平均粒径、PDI 的响应面图水平332023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.82.3.3.3最优工艺验证对“2.3.3.2”获得的最优点进行3批次验证。结果显示，平均粒径、PDI值和模拟结果非常接近，说明此处方筛选结果可靠。（见表7）表 7最优工艺验证试验号123平均粒径/nm17.3517.4718.2217.68依0.47PDI0.0740.0710.0760.074依0.0032.4微乳的理化性质及稳定性考察2.4.1微乳的电镜图取“2.3.3.3”项微乳适量滴至铜网上，静置10min后，使用滤纸吸干，再加入2%的磷钨酸负染10 min，再用滤纸吸干剩余液体，置于电镜下观察。图片显示微乳外观饱满、圆整，稳定性较好。（见图5）图 5微乳的形态2.4.2高速离心考察将微乳于5 000 r/min转速下高速离心30 min。结果显示，微乳依旧澄清、透明，未见分层，表明微乳稳定性好。2.4.3微乳类型鉴定及25益下遮光、不遮光考察取“2.3.3.3”项微乳适量，分别滴入亚甲基蓝和苏丹芋试剂，静置5 min。图6A、6B显示，亚甲基蓝在微乳中的扩散效果明显，而苏丹芋停留在液面几乎不扩散，表明该微乳为O/W型，再取“2.3.3.3”项微乳适量，在室温（25 益）条件下，分别作遮光处理和不作遮光处理，放置60 d后测平均粒径 PDI，试验平行3次。图6C、6D显示，两种状态下微乳的颜色无明显差异；遮光状态下，测得微乳的平均粒径为（19.23依0.26）nm、PDI为（0.085依0.005）；不遮光状态下，测得微乳的平均粒径为（19.47依0.31）nm、PDI为（0.089依0.009）。试验结果进一步证明，在25 益下，微乳放置60 d后平均粒径、PDI虽略为增大，但依旧稳定。注：A.滴入亚甲基蓝；B.滴入苏丹芋；C.不遮光；D.遮光。图 6不同状态下微乳的外观3讨论笔者查阅文献19发现可使用渗滤电导模型理论解释微乳的电导率-含水量曲线变化规律。以图1为例，微乳原液阶段，由于含水量为0，油的导电性又极低，此时电导率接近0。随着含水量的增加，体系间连续相依旧为油相，故电导率的增加较为缓慢。当含水量到达渗滤阈值20（渗滤阈值：导电微粒占整个体系的体积分数）后，带电液滴增加明显，故电导率增加迅速，此时体系为W/O型；随着含水量的进一步增加，微乳液滴与液滴之间发生碰撞，形成了导电链，微乳的电导率又进一步增加，直至电导率的顶点，此范围的微乳为W/O型和O/W型双连续型。当微乳的电导率到达顶点后，含水量的增加又稀释了带电的微乳液滴，从而电导率开始下降，此时体系转变为单一的O/W型。该理论可以有效解释微乳电导率的变化与微乳的相间关系，但是之前的报道没有采用直观的方式来证实该理论的可靠性，而本研究则通过拍摄微观状态下微乳的形态验证了该理论的可靠性。此外，试验过程中发现搅拌速率对微乳的成乳有一定的影响，但是实际筛选结果却并不显著，因此，微乳的搅拌速率适中即可，太快可减少乳化时间，但容易带入空气，太慢则成乳时间过长，或难于配制成乳。再者，适当增加微乳的载药量可减少服药量，但是载药量不宜一味增大，试验过程中发现微乳载药过大容易造成平均粒径增大破坏其稳定性，甚至出现分层、变混浊的现象，因此，要扩大中药微乳制剂，还须提高中药精制、提纯技术方可实现。本研究通过测定平均粒径、PDI及生物透射电镜观察的手段验证了电导率-含水量曲线法中电导率最大值作为O/W型微乳成型临界点的精确性，可以为中药微乳制剂的制备提供一定的参考。参考文献1 程灿，潘超美，吴婕，等.引种的印尼广藿香和肇庆广藿香不同部位挥发油气相色谱-质谱联用分析J.中药新药与临床药理，2021，32(4)：546-551.2 吴婕，潘超美，苏家贤，等.广藿香“发汗”对有效成分含量的影响及“发汗”工艺优化J.时珍国医国药，2020，31(5)：1116-1119.3 刘勇，王黎，张晨，等.广藿香挥发油提取工艺优化J.中兽医医药杂志，2021，40(4)：64-67.4 赵艺宁，韩叶枫，梁建坤，等.香叶木素自微乳的制备J.中成药，2022，44(5)：1588-1593.5 刘乐环，茅玉炜，黎翊君，等.姜黄素炎症靶向自微乳的制备及质量评价J.世界科学技术-中医药现代化，2016，18(12)：2154-2158.6 陆姗姗，陈军，赵玉荣，等.小茴香油微乳凝胶的制备及其体外透皮促渗行为研究J.中国现代应用药学，2022，39(8)：1067-1074.7 陈丽华，赵小婷，吴德智，等.电导率法筛选微乳处方及对其相行为的研究J.中国药学杂志，2011，46(1)：40-43.8 向大位，唐甜甜，彭金飞，等.电导率-含水量曲线法与目测法确定O/W型微乳成型临界值的比较J.药学学报，2010，45(8)：1052-1056.9 李得堂，张丽娟，唐洪梅，等.电导率-含水量曲线法测定O/W型微乳的稳定性J.华西药学杂志，2016，31(2)：191-193.10 李桂华，赵子晨，蒋满意，等.和厚朴酚自微乳给药系统制备工艺响应面法优化及质量评价研究（x依s）考察指标（下转第52页）342023 年8月第29卷第8期August.2023 Vol.29 No.8（上接第34页）J.中草药，2022，53(2)：362-371.11 李得堂，张丽娟，唐洪梅，等.应用电导率-含水量曲线法研究广东王不留行提取物为模型药物的O/W型微乳J.中国医院药学杂志，2016，36(1)：20-24.12 谭建伟，张睿，李兰兰，等.基于Box-Behnken响应面法优化生乳汤水提取工艺研究J.中医药导报，2022，28(10)：28-32.13 魏其云，甄世福，杨志军，等.Box-Behnken设计-响应面法优化复方白鲜皮湿疹方提取工艺J.中医药导报，2021，27(9)：55-59.14 何瑶，江华娟，成颜芬，等.基于Box-Behnken设计-响应面法与质量综合评价优化经典名方桃红四物汤煎煮工艺J.中草药，2021，52(22)：6845-6855.15 尹元元，耿燕娜，范明松.Box-Behnken设计-效应面法优化延胡索乙素聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒处方和体外释药行为研究J.中草药，2021，52(22)：6806-6815.16 韩德恩，辛玉凤，位恒超，等.Box-Behnken效应面法优化大黄素纳米结构脂质载体处方工艺及体外质量评价J.中国中药杂志，2022，47(4)：913-921.17 韩云凤，唐茜，石懿，等.基于熵权法-层次分析法结合响应面法优化养阴润目颗粒的提取工艺J.中国现代应用药学，2022，39(7)：896-903.18 顾生玖，姚志仁，顾超豪，等.基于响应面法优化紫花地丁多酚与黄酮的提取工艺J.食品研究与开发，2022，43(9)：88-95.19 郭荣，李干佐.阴离子型微乳液的电导行为及其溶液结构J.化学学报，1987，45(1)：55-58.20 满妍妍，张丽君，徐怀德，等.核桃油微乳制备及水、油渗滤阈值研究J.中国粮油学报，2015，30(4)：80-85.（收稿日期：2022-11-30编辑：刘颖）给出答案J.新民周刊，2020(11)：42-45.6 吴瑭.温病条辨M.北京：人民卫生出版社，1963.7 张洪春.中药新药治疗流行性感冒临床研究技术指导原则C/中华中医药学会2013年学术年会，2013.8 郑筱萸.中药新药临床研究指导原则：试行M.北京：中国医药科技出版社，2002.9 LAU S,PEK K,CHEW J,et al.The simplified nutri原tional appetite questionnaire(SNAQ)as a screening toolfor risk of malnutrition:Optimal cutoff,factor structure,andvalidationinhealthycommunity-dwellingolderadultsJ.Nutrients,2020,12(9):2885.10 谢凯，关胜男，荆惠，等.中医药辅助治疗重症肺炎的临床试验结局指标分析J.中国中药杂志，2022，47(20)：5642-5653.11 REN S Y，WANG W B，GAO R D，et al.Omicronvariant(B.1.1.529)of SARS-CoV-2：Mutation，infectivity，transmission，and vaccine resistanceJ.World J ClinCases，2022，10(1)：1-11.12 WANG Z L，YANG L Y.In the age of Omicron variant：Paxlovid raises new hopes of COVID-19 recoveryJ.JMed Virol，2022，94(5)：1766-1767.13 NAJJAR-DEBBINY R，GRONICH N，WEBER G，et al.Effectiveness of paxlovid in reducing severe coronavirusDisease 2019 and mortality in high-risk patients J.Clin Infect Dis，2023，76(3)：e342-e349.14 HAMMOND J，LEISTER-TEBBE H，GARDNER A，et al.Oral nirmatrelvir for high-risk，nonhospitalized adultswith covid-19J.N Engl J Med，2022，386(15)：1397-1408.15 赵四林，柳玉佳，范伏元，等.新型冠状病毒肺炎重症、危重症恢复期患者的中医药治疗策略J.湖南中医药大学学报，2020，40(4)：387-391.16 陈剑明，连博，陈腾飞，等.从中医药对新冠肺炎的诊治现状看中医急危重症医学的发展策略J.时珍国医国药，2021，32(2)：388-393.17 李士懋，田淑霄.温病忌汗又最喜汗解刍议J.辽宁中医杂志，1992，19(9)：16-17.18 李冀，徐佳悦，宋一婵，等.银翘散君药之辨J.中医药学报，2021，49(3)：69-71.19 吴瑭.温病条辨M.南京中医药大学温病学教研室，整理.北京：人民卫生出版社，2005：32.20 韩名媛，孙忠人，尹洪娜，等.揿针治疗过敏性鼻炎的研究进展J.中国中医急症，2021，30(10)：1859-1862.21 孙培林.针灸在新型冠状病毒肺炎治疗中的应用J.中医药导报，2020，26(10)：12-17，41.22 陈博武，杨梦琪，温宗麟，等.上海地区新型冠状病毒奥密克戎变异株感染轻症患者中医证候特征研究J.中医杂志，2022，63(15)：1436-1441.23 费长东，曲国纲，周大伟，等.中性粒细胞/淋巴细胞比值评估新冠肺炎患者预后价值研究J.人民军医，2021，64(5)：421-424.24 DYMICKA-PIEKARSKA V，WASILUK A.Procalcitonin(PCT)，contemporary indicator of infection and inflam原mationJ.Postepy Hig Med Dosw(Online)，2015，69：723-728.25 OUYANG W J，RUTZ S，CRELLIN N K，et al.Regulationandfunctions of theIL-10familyof cytokinesininflammation and diseaseJ.Annu Rev Immunol，2011，29：71-109.26 KAK G，RAZA M，TIWARI B K.Interferon-gamma(IFN-酌)：Exploring its implications in infectious diseasesJ.Biomol Concepts，2018，9(1)：64-79.（收稿日期：2022-09-06编辑：罗英姣）52