黄粉虫不同酶解液及其抗氧化作用的比较研究.pdf
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1、第9 期(总第58 4期)2023年9 月文章编号:16 7 1-9 6 46(2 0 2 3)0 9 b-0030-04黄粉虫不同酶解液及其抗氧化作用的比较研究农产品加工Farm Products ProcessingNo.9Sep.张玲1,宋艳军,*韩基明1(1.山西农业大学山西功能食品研究院,山西太原0 30 0 31;2.中阳县仁味仁农产品加工有限公司,山西吕梁0 3340 0)摘要:以黄粉虫为原料,利用减提酸沉法提取黄粉虫蛋白,并选取不同的酶对黄粉虫蛋白进行酶解,分析比较其酶解液中多肽含量、SOD酶活及总抗氧化能力。结果表明,黄粉虫蛋白分别经胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解后其多
2、肽得率分别为7 9.6%,6 0.4%,6 4.8%;S0D酶活力分别为8 2.0 3,8 2.7 3,8 2.31U/mL;黄粉虫胰蛋白酶酶解液的总抗氧化能力为:相当于1.57 53mmol/L的FeSO04,0.9 17 3m m o l/L 的Trolox;碱性蛋白酶酶解液的总抗氧化能力为:相当于1.0 38 3mmol/L的FeS04,0.8 8 10 m m o l/L 的Trolox;木瓜蛋白酶酶解液的总抗氧化能力为:相当于0.9 39 4mmol/L的FeSO4,0.7 46 6 m m o l/L 的Trolox。黄粉虫不同酶解液都具有一定的抗氧化活性,其胰蛋白酶酶解液多肽得率
3、较高,总抗氧化能力较强。关键词:黄粉虫;酶解;多肽;总抗氧化能力中图分类号:TS201.2The Study on Total-antioxidant Capacity of the Enzyme-lysates of(1.Institute of Functional Food of Shanxi,Shanxi Agricultural University,Taiyuan,Shanxi 030031,China;2.Zhongyang Renweiren Agricultural Products Processing Co.,Ltd.,Lvliang,Shanxi 033400,Chin
4、a)Abstract:In this experiment,the protein was extracted from Tenebrio molitor L used as raw materials with the method ofSubtraction acid precipitation and the content of polypeptide and the vitality of SOD and the total-antioxidant capacity ofenzyme hydrolysates were analyzed.The results showed that
5、 the polypeptide yield of hydrolysates of Tenebrio molitor proteinhydrolyzed with the trypsin,alkaline protease and papain were 79.6%,60.4%,64.8%.The activity of SOD in thehydrolysates were 82.03,82.73,82.31 U/mL respectively.The FeSO4-equivalent and the Trolox-equivalent antioxidant ca-pacity of hy
6、drolyzates with trypsin,alkaline protease and papain were 1.575 3 mmol/L and 0.917 3 mmol/L,1.038 3 mmol/Land 0.881 0 mmol/L,0.939 4 mmol/L and 0.746 6 mmol/L,respectively.Different hydrolysates of Tenebrio molitor hadcertain antioxidant activity,especially in the trypsin hydrolysate had higher pept
7、ide yield and stronger total antioxidant activitycompared to the others.Key words:Tenebrio molitor L;enzyme hydrolysis;polypeptide;total-antioxidant capacity文献标志码:ATenebrio molitor L.ZHANG Ling,SONG Yanjun?,HAN Jimingdoi:10.16693/ki.1671-9646(x).2023.09.038黄粉虫是一种人工养殖的昆虫,繁殖速度快,俗称面包虫,营养丰富,尤其是蛋白含量高达50%
8、左右,且研究表明黄粉虫具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂等多种功效作用-2,目前主要作为饲料在饲养上应用较多,附加值相对较低。黄粉虫蛋白酶解的研究较多,主要通过酶解蛋白的方式制备抗氧化肽、抗菌肽、降血压肽和抗肿瘤肽等生物活性肽 4-6。以黄粉虫为原料,选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶水解黄粉虫蛋白,比较各种酶水解液中多肽得率及其总抗氧化能力的强弱,为黄粉虫蛋白肽制收稿日期:2 0 2 3-0 4-19基金项目:吕梁市重点研发项目(2 0 2 1NYGG-2-22)。作者简介:张玲(19 8 2 一),女,博士,副研究员,研究方向为农产品贮藏与加工。通讯作者:韩基明(19 6 7 一),男,本科,副
9、研究员,研究方向为农产品贮藏与加工。备过程中酶的选择及功能作用的研究提供基础的理论参考。1材料与设备1.1试验材料黄粉虫,中阳县仁味仁农产品加工有限公司提供;碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶,中国医药上海化学有限公司提供;四肽标准品(Cly-Cly-Tyr-Arg),D PPH,S i g m a 公司提供;总超氧化物歧化酶(T-SOD),南京建成公司提供;总抗氧化能力2023年第9 期(T-AOC)测定试剂盒,南京建成公司提供;其他试剂均为分析纯。1.2仪器与设备CP224C型电子天平,奥豪斯仪器(上海)有限公司产品;HPG-9075型电热鼓风干燥箱,北京东联哈尔仪器制造有限公司产品;JB-
10、3型磁力搅拌器,上海智光仪器仪表有限公司产品;PHBJ-260型便携式pH计,上海仪电科学仪器股份有限公司产品;LD5-10型低速离心机,北京雷勃尔医疗器械有限公司产品;SSW型电热恒温水槽,上海博迅实业有限公司产品;JDG-0.2型真空冷冻干燥机,兰州科技真空冷冻干燥技术有限公司产品。2试验方法2.1黄粉虫蛋白的制备碱提酸沉法:黄粉虫烘干粉碎,乙醚脱脂后溶于2 0 倍的蒸馏水中,用1mol/L的NaOH溶液调pH值至8.5,不断搅拌30 min并保持其pH值不变,以转速50 0 0 r/min离心2 0 min,取上清液,用1mol/L盐酸调节pH值为4,室温下以转速50 0 0 r/min
11、离心20min,沉淀出的蛋白用蒸馏水洗涤,重复2 次。之后将蛋白的水溶液调节pH值至7(提高蛋白质的溶解性),冷冻干燥得黄粉虫蛋白粉。2.2黄粉虫蛋白含量及成分的测定水分的测定闪:常压直接干燥法2003);脂肪的测定8:索氏抽提法(GB/T5009.6一2003);蛋白质的测定 9 :微量凯氏定(GB/TFe2+-TPTZ,于波长59 3nm处测定吸光度可以计算出5009.52003);灰分的测定 10 :高温灼烧法(G B/T样品中总抗氧化能力,其总抗氧化能力用FeSO4标5009.42003)。准溶液的浓度来表示。ABTS法测定原理:ABTS在2.3黄粉虫酶解液中多肽含量的测定适当的氧化剂
12、作用下氧化成绿色的ABTS+,在抗氧(1)四肽标准曲线的制作。取10 个10 mL的化物存在时,ABTS+的产生会被抑制,在波长容量瓶,用5%的TCA依次配制0,0.0 5,0.10,405nm或7 34nm处测定ABTS+的吸光度即可测定0.25,0.50,1.0 0,2.0 0 mg/mL 的 Gly-Gly-Tyr-Arg并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox作为参考标四肽标准溶液,然后分别取6.0 mL标准溶液,加入准,其是一种VE的类似物,具有和VE相近的抗氧4.0mL双缩脲试剂,混合均匀,静置10 min,以转化能力。按照试剂盒说明书测定,试验选取2 种方速50 0 0 r/mi
13、n离心10 min,取上清液于波长540 nm法对黄粉虫酶解液的总抗氧化能力进行测定。处测定OD值(以第一管做空白对照)。以肽的质量3结果与分析浓度为横坐标(mg/mL),O D 值为纵坐标,制作标准曲线。(2)酶解液多肽含量的测定。取2.5mL样品溶液,加人2.5 mL10%(W/V)的三氯乙酸(TCA)水溶液,于漩涡混合仪上混合均匀,静置10 min,然后以转速50 0 0 r/min离心10 min,将上清液全部转移到50 mL容量瓶中,并用5%的TCA定容至刻度,摇匀。然后取6.0 mL上述溶液置于另一试管中,加人双缩脲试剂4.0 mL(样液:双缩脲试剂=3:2,V/V),于漩涡混合仪
14、上混合均匀,静置10 min,以转速50 0 0 r/min离心10 min,取上清液于波长540 nm张玲,等:黄粉虫不同酶解液及其抗氧化作用的比较研究各酶的酶解条件进行酶解。胰蛋白酶酶解条件:底物质量分数2%,酶添加量2%,pH值8.0,酶解温度50,酶解时间2 h。木瓜蛋白酶酶解条件:底物质量分数2%,酶添加量2%,pH值7.0,酶解温度6 0,酶解时间2 h。中性蛋白酶酶解条件:底物质量分数2%,酶添加量2%,pH值7.0,酶解温度6 0,酶解时间2 h。酶解结束后,沸水浴10 min灭酶,冷却离心,取上清液得黄粉虫酶解液待测。2.5黄粉虫酶解液中SOD酶活的测定按照试剂盒说明书测定。
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- 黄粉虫 不同 酶解液 及其 氧化 作用 比较 研究
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