金黄色葡萄球菌的检测技术.ppt

食品中金黄色葡萄球菌检验技术食品中金黄色葡萄球菌检验技术 1第二节食品中金黄色葡萄球菌检验第二节食品中金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、土壤、水及人和动物的排泄物中都可以找到。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大责更多占百分之45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。2黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：中毒食品以奶、肉、蛋、鱼及其纸品常见。金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：1）食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染。2）食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到污染，产生了肠毒素，引起食物中毒。3）熟食制品包装不严，运输过程受到污染。4）奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体的其他部分的污染。3一.生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.51毫米左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。4大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，称金黄色葡萄球菌。5大多数菌株最适生长温度30-37，最适PH为7.0-7.5；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。6头孢呋辛酯头孢呋辛酯-适应症适应症 皮疹皮疹本品适用于溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林株除外）及流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌敏感菌株所致成人急性咽炎或扁桃体炎、急性中耳炎、上颌窦炎、慢性支气管炎急性发作、急性支气管炎、单纯性尿路感染、皮肤软组织感染及无并发症淋病奈瑟菌性尿道炎和宫颈炎。儿童咽炎或扁桃体炎、急性中耳炎及脓疱病等。7二、检验所需器材金黄色葡萄球菌检验的器材主要有：胰酪胨大豆肉汤、7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker琼脂平板、肉浸液肉汤、灭菌盐水、兔血浆及显微镜、培养箱、离心机、1ml和10ml灭菌吸管、灭菌试管、灭菌平皿、均质器、载玻片、L形涂布棒、酒精、接种环等。8三、检样器材检样25g（ml）+225ml灭菌生理盐直接计数方法增菌培养方法Baird-Parker平板7.5%氯化钠肉汤或0.3ml、0.3ml、0.4ml胰酪胨大豆肉汤血平板血平板，Baird-Parker平板涂片染色观察溶血血浆凝固酶试验报告9四、操作方法1.检样处理无菌操作称取25g（25ml）检样，加入到盛有225ml灭菌生理盐水的灭菌容器内制成1:10检样菌悬液。2.增菌培养吸取5ml的1：10检样混悬液，接种于50ml的7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基内，置（36+1）培养箱内培养24h。3.分离培养用接种环从有细菌生长的增菌培养基中取菌一环，划线接种于血平板和Baird-Parker平板，（36+1）培养24h。4.观察菌落形态观察血平板和Baird-Parker平板上可疑金黄色葡萄球菌菌落形态。105.革兰氏染色 挑取血平板和Baird-Parker平板上金黄色葡萄球菌可疑菌落进行革兰氏染色镜检。6.血浆凝固酶试验 挑取可疑金黄色葡萄球菌接种到葡萄糖肉汤培养基内，于(36+1)培养24h。吸取1:4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，放(36+1)温箱或水浴内，每30min观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌珠及肉汤作为对照。112.直接计数方法1）检样处理同“增菌培养法”。2）样品稀释吸取上述1:10混悬液，进行10倍递增稀释。3）分离接种根据样品污染情况，选择适宜浓度的稀释液1ml，分别加入三个Baird-Parker平板，每个平板接种量分别为 0.3,0.3,0.4ml，然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分不易吸收，可将平板放在(36+1)温箱1h，等水分蒸发后反转平皿置(36+1)温箱培养。4）菌落计数在三个平板上将周围有浑浊带的黑色菌落计数。5）接种血平板任选5个菌落，分别接种血平板，（36+1）培养24h后进行革兰氏染色镜检。6）血浆凝固酶试验步骤同增菌培养法。7）报告将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。12