微生物实验-细菌培养、接种.ppt

第二次实验课.内内 容容1.细菌培养法（录象）细菌培养法（录象）2.基础培养基制备（讲解示教）基础培养基制备（讲解示教）3.细菌接种法（一份细菌接种法（一份/组）讲解组）讲解4.人体、物品中细菌检查（一份人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解组）讲解5.飞沫、空气中细菌检查（一份飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解桌）讲解6.观察细菌代谢产物（讲解）观察细菌代谢产物（讲解）7.第一次实验报告评讲第一次实验报告评讲.基础培养基的制备基础培养基的制备去筋膜黄牛肉绞碎去筋膜黄牛肉绞碎500g加入加入1000ml蒸馏水蒸馏水直接煮沸直接煮沸2小时小时调整酸碱度至调整酸碱度至pH 7.6过滤，补足失水过滤，补足失水重新校正重新校正pH一次一次分装，高压灭菌，分装，高压灭菌，15磅（磅（121.3）1520分钟分钟检菌如无细菌生长检菌如无细菌生长（液体透明）即可应用（液体透明）即可应用脱脂纱布过滤，按比例加入脱脂纱布过滤，按比例加入1蛋白胨、蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至加热溶解补足水至1000ml4浸泡过夜煮沸半小时浸泡过夜煮沸半小时.人体、物品中细菌检查人体、物品中细菌检查手衣发钱材料：普通平板材料：普通平板 （1份份/组）组）盖上，标记盖上，标记 ,置置 3737，18-24h18-24h后观察后观察。.飞沫、空气中细菌检查飞沫、空气中细菌检查材料：血平板材料：血平板（1份份/组）组）距口1520cm用力咳嗽三次置空气中（避日光照射）30分钟飞飞 沫沫空空 气气盖上，标记盖上，标记 ,置置 3737，18-24h18-24h后观察。后观察。.结果观察结果观察血平板血平板表皮葡萄球菌在血表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上琼脂平板培养基上形成不溶血的菌落。形成不溶血的菌落。甲型溶血性链球菌形甲型溶血性链球菌形成的成的溶血现象也称溶血现象也称为甲型溶血现象或草为甲型溶血现象或草绿色溶血现象，属于绿色溶血现象，属于不完全溶血。不完全溶血。金黄色葡萄球菌形成金黄色葡萄球菌形成的的溶血现象也称为乙溶血现象也称为乙型溶血现象，属于完型溶血现象，属于完全溶血。全溶血。.细菌培养接种法细菌培养接种法平板划线法平板划线法菌种：混合菌液菌种：混合菌液材料：普通平板材料：普通平板用具：接种环用具：接种环方法：分区划线方法：分区划线1区区2区区3区区4区区原始区域.半固体培养基斜面培养基 细菌培养接种法细菌培养接种法-斜面接种、液体接种、半固体斜面接种、液体接种、半固体菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液体、半固体培养基用具：接种环、接种针液体培养基.结果观察结果观察普通平板普通平板普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。.结果观察结果观察液体培养基液体培养基.结果观察结果观察斜面培养基斜面培养基琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成的菌苔生长现象菌苔菌苔（mossy）指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形成的一层培养物.结果观察结果观察半固体培养基半固体培养基1、扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。即即无鞭毛的细菌：沿穿刺线生长 2 1 1 2.细菌代谢产物观察细菌代谢产物观察 细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样，产生的代谢产物也不一样。常见：糖发酵试验吲哚（indol）试验甲基红（methyl red）实验VP（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验尿素酶试验 硫化氢试验.糖发酵试验糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。.甲基红（甲基红（methyl red）实验）实验M -甲基红（methyl red）实验葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基红 -葡萄糖丙酮酸 甲基红 +.吲哚（吲哚（indol）试验）试验I-吲哚（吲哚（indol）试验）试验色氨酸色氨酸吲哚吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚 对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛 .枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验利用枸橼酸盐生长 +不能利用 -.硫化氢试验硫化氢试验硫化氢试验（醋酸铅培养基）某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（）。.尿素酶试验尿素酶试验 产生氨使培养基变碱，指示剂显红色，为阳性。如：变形杆菌为阳性。.IMViC试验试验I-吲哚吲哚（indol）试验试验M -甲基红甲基红（methyl red）试验试验V -VP（Voges-Proskauer）试验试验C -枸橼酸盐利用枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验试验IMViC试验试验 I M Vi C试验试验 大肠埃希菌大肠埃希菌 +-产气杆菌产气杆菌 -+IMViC试验：试验：是吲哚、甲基红、是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定肠道杆菌的鉴定。.实验小结实验小结1、三类培养基液体培养基用于增菌；均匀混浊、沉淀、表面生长 半固体培养基观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长 固体培养基分离纯化；保存菌种（1个月）菌落、菌苔2、IMViC试验.第三次实验课内容第三次实验课内容1、热力对细菌和芽胞的杀菌作用、热力对细菌和芽胞的杀菌作用2、紫外线的杀菌作用、紫外线的杀菌作用3、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验4、耐药性变异；、耐药性变异；5、细菌的鞭毛变异；、细菌的鞭毛变异；6、高压灭菌器的使用；、高压灭菌器的使用；7、细菌的鉴定程序；、细菌的鉴定程序；8、全自动微生物分析仪的基本原理及简单操作步骤、全自动微生物分析仪的基本原理及简单操作步骤.