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《蛋白质与核酸修改》.ppt
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1、主讲主讲:王素青王素青ContentContent:氨基酸的结构特点、命名氨基酸的结构特点、命名氨基酸的物理、光谱、化学性质氨基酸的物理、光谱、化学性质氨基酸的制备氨基酸的制备肽和蛋白质的知识肽和蛋白质的知识1整理ppt2整理ppt3整理pptDNA重组技术重组技术(recombination DNA)人类基因组计划人类基因组计划(human genome project,HGP)20032003年年4 4月美、英、法、德、日、中六个国家共同宣布已月美、英、法、德、日、中六个国家共同宣布已完成人类生命的分子指南完成人类生命的分子指南由由3030亿个碱基对组成的人类亿个碱基对组成的人类基因组基因
2、组DNADNA的关键序列。的关键序列。4整理ppt5整理ppt(一)结构与构型(一)结构与构型 6整理ppt蛋白质所含氨基酸蛋白质所含氨基酸(-氨基酸氨基酸)都是都是L-构型构型7整理ppt(二)分类:氨基酸可按分子中氨基和羧基的相对数目也可按烃基的结构根据氨基与羧基的相对位置不同根据氨基与羧基的相对位置不同8整理ppt9整理ppt第二节第二节 氨基酸的物理性质与光谱性质氨基酸的物理性质与光谱性质-氨基酸都是氨基酸都是无色晶体无色晶体。因是在等电点成两性离子时结。因是在等电点成两性离子时结晶出来的,分子内有极强的静电引力,其晶出来的,分子内有极强的静电引力,其熔点较相应熔点较相应的胺或羧酸高的
3、胺或羧酸高,通常,通常在熔融时分解在熔融时分解。-氨基酸都溶于水氨基酸都溶于水,在等电点时溶解度最小在等电点时溶解度最小。由于具有。由于具有两性离子的结构,一般难溶于非极性溶剂。两性离子的结构,一般难溶于非极性溶剂。-氨基酸光谱性质:氨基酸光谱性质:IR:1720cm-1处不出现羧基的典型处不出现羧基的典型谱峰,在近谱峰,在近1600 cm-1处有一羧酸负离子的吸收峰。在处有一羧酸负离子的吸收峰。在3100-2600 cm-1间有一强而宽的间有一强而宽的N-H伸缩吸收峰。伸缩吸收峰。只有芳香族的只有芳香族的苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸有紫外吸收苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸有紫外吸收峰峰 10整理ppt
4、11整理ppt12整理pptSTRUCTURE ANALYSIS13整理ppt内盐内盐与强酸强碱反应与强酸强碱反应14整理ppt等电状态,净电荷为零等电状态,净电荷为零15整理pptpHpI pHpI pHpI 16整理ppt17整理ppt(氨基)和二硝基氟苯(氨基)和二硝基氟苯(DNFB)反应)反应 黄色黄色用用来来鉴鉴定定多多肽肽或或蛋蛋白白质质的的末末端端氨氨基基,用用于于测测定定氨氨基基酸酸在在蛋白质中的排列次序。蛋白质中的排列次序。18整理ppt不同的氨基酸其等电点也不相同:不同的氨基酸其等电点也不相同:中性中性-氨基酸的等电点在氨基酸的等电点在56.3之间;之间;酸性在酸性在2.8
5、.2之间;之间;碱性的在碱性的在9.710.7之间。之间。在等电点时,偶极离子的浓度最大,氨基酸的在等电点时,偶极离子的浓度最大,氨基酸的溶解度最小,因此可以通过调节等电点来溶解度最小,因此可以通过调节等电点来分离分离、提纯提纯氨基酸。氨基酸。19整理ppt定量计算定量计算氨基酸中氨基酸中氨基的含量氨基的含量,称为,称为Van Slyke氨氨基测定法基测定法20整理ppt5.5.(氨基)和甲醛反应(氨基)和甲醛反应6.6.氨基酸受热反应氨基酸受热反应 21整理ppt22整理ppt8.与茚三酮的反应与茚三酮的反应-氨氨基基酸酸在在碱碱性性溶溶液液中中,与与茚茚三三酮酮反反应应,生生成成蓝蓝紫紫色
6、色物物质质,这这是是鉴鉴定定氨氨基基酸酸的的灵灵敏敏方方法法,此此法法还还可可以以用用于于氨氨基基酸酸的的比比色色测测定定和和纸纸上上层层析的显色和刑侦中的指纹显示。析的显色和刑侦中的指纹显示。23整理ppt三、氨基酸的制备三、氨基酸的制备用用醛醛或或酮酮和和HCN加加成成得得氰氰醇醇,再再和和氨氨作作用用得得氨氨基基腈腈,水解后得氨基酸。,水解后得氨基酸。1由醛或酮制备由醛或酮制备24整理ppt-卤代酸与过量的浓氨水作用,发生亲核卤代酸与过量的浓氨水作用,发生亲核取代反应,生成取代反应,生成-氨基酸。氨基酸。2卤代酸氨解卤代酸氨解25整理ppt3.盖布瑞尔合成法盖布瑞尔合成法26整理ppt先
7、先将将丙丙二二酸酸酯酯转转化化成成N-邻邻苯苯二二甲甲酰酰亚亚胺胺基基丙丙二二酸酸酯酯,然然后后再烷基化,水解,脱羧,即可得再烷基化,水解,脱羧,即可得-氨基酸。氨基酸。蛋氨酸蛋氨酸4 4丙二酸酯法丙二酸酯法27整理ppt肽键肽键28整理ppt肽链肽链氮端(氮端(N端)端)碳端(碳端(C端)端)29整理ppt二、多肽结构的测定二、多肽结构的测定这些氨基酸是按什么次序结合的。这些氨基酸是按什么次序结合的。它是由哪些氨基酸组成的;它是由哪些氨基酸组成的;30整理ppt1.定量分析定量分析1.N端分析:端分析:2.端基分析端基分析31整理ppt异硫氰酸苯酯法(异硫氰酸苯酯法(Edman降解法):降解
8、法):32整理ppt2.C端分析端分析33整理ppt3.部分水解法部分水解法34整理ppt三、多肽的合成三、多肽的合成1.溶液法溶液法35整理ppt氨基的保护氨基的保护1.常用苄氧羰基,它与氨基相连时,在碱性常用苄氧羰基,它与氨基相连时,在碱性溶液中稳定,在酸性溶液中易水解。溶液中稳定,在酸性溶液中易水解。2.用叔丁氧羰基和对甲苯磺酰基用叔丁氧羰基和对甲苯磺酰基 36整理ppt羧基的保护与活化羧基的保护与活化羧基的保护:羧基的保护:常用苄酯基常用苄酯基 37整理ppt羧基的活化:羧基的活化:1.叠氮法叠氮法2.混酐法混酐法38整理ppt其它方法其它方法1.固相法固相法2.酶促法酶促法3.基因工
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