染色体的分带技术.ppt

.染色体的分带技术.目的要求 了解染色体C带、G带制备的基本原理，掌握染色体C带、G带的染色技术。.C带显示的实验原理vDNA分子经酸、碱、盐处理可以发生不同的变化，酸处理可以使DNA分子脱嘌呤，碱处理可以使DNA变性及溶解，2SSC溶液处理可以使DNA骨架断裂并使片断溶解。在C带显示过程中，染色体臂的DNA被酸、碱、盐选择性地破坏了，着色较浅，而结构性异染色质区哉DNA结构紧密，从而保护了C带区的异染色质免受酸、碱、盐的破坏，使其容易着色，从而产生C带。.实验用品1器材：显微镜、恒温水浴箱、载玻片、染色缸等；2试剂：0.2MHCl、5%Ba(OH)2、2SSC溶液、Giemsa染液、1/15M磷酸缓冲液等。3材料：小鼠染色体标本.方法与步骤v取老化一周的染色体标本,室温条件下用0.2MHCl处理30分钟；vDW冲洗三次后，转入505%Ba(OH)2中保温10-15分钟；v自来水冲洗3-5分钟，再用DW充分分冲洗掉玻片上附着的Ba(OH)2；v将标本放到652SSC处理60分钟，DW冲洗，空气干燥；vGiemsa染色10分钟，冲洗，镜检。.结果显示.G带显示实验原理v由于构成染色体的DNA一级序列的差异，导致与之结合的蛋白质的状态也有所不同。如果染色体上某一区域DNA为重复序列，转录活性低，与之结合的蛋白质也较稳定，因此较利于染料的积累，从而显出暗带。相反，若某一区域的DNA富含转录活性的结构基因，包装它们的蛋白质也较松散，着色较浅，显明带。.实验用品1器材：显微镜、恒温水浴箱、载玻片、染色缸等；2试剂：0.25%胰蛋白酶、Giemsa染液、磷酸缓冲液等。3材料：小鼠染色体标本.实验步骤v将老化七天的染色体标本放入60温箱中烤片2小时以上；v取出后放入0.25%的胰蛋白酶溶液中作用3-15秒；v取出后，GKN溶液漂冼15秒，Giemsa染色15分钟，冲洗，镜检。.实验结果.实验报告v绘图表示动物染色体的分带图。.