(四)艾滋病梅毒丙肝检测及结果意义.ppt
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1、艾滋病梅毒丙肝实验室检测及艾滋病梅毒丙肝实验室检测及影响结果因素分析影响结果因素分析.内容提要:内容提要:1.1.艾滋病检测程序、方法应用和注意事项。艾滋病检测程序、方法应用和注意事项。2.2.梅毒检测程序、方法应用和注意事项。梅毒检测程序、方法应用和注意事项。3.3.丙肝检测程序、方法应用和注意事项。丙肝检测程序、方法应用和注意事项。4.4.影响实验室检测结果的因素分析影响实验室检测结果的因素分析.艾滋病检测方法艾滋病检测方法常用常用HIVHIV病原学检测方法病原学检测方法:1.1.核酸检测核酸检测(PCRPCR、病毒载量、病毒载量)2.2.病毒培养分离病毒培养分离 3.3.P24P24抗原
2、检测抗原检测常用常用HIVHIV抗体检测方法抗体检测方法:初筛:初筛:1.1.酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法 ELISAELISA:第三代、第四代第三代、第四代 2.2.快速检测快速检测 RT RT:金标、硒标金标、硒标 3.3.简单法简单法 PA:PA:明胶颗粒凝集明胶颗粒凝集 确证:免疫印迹法确证:免疫印迹法 WB:WB:(Western BlotWestern Blot)、RIBARIBA其他相关检测方法其他相关检测方法:免疫功能测定:免疫功能测定:CD4/CD8CD4/CD8检测检测.HIVHIV抗体检测目的抗体检测目的1 HIV1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。抗体检测可
3、用于诊断、血液筛查、监测等。2 2 以诊断为目的的检测是为了确定个体以诊断为目的的检测是为了确定个体HIVHIV感染状况,感染状况,包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。体检等。3 3 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIVHIV,包括献血员筛查和原料血浆筛查。,包括献血员筛查和原料血浆筛查。4 4 以监测为目的的检测是为了解不同人群以监测为目的的检测是为了解不同人群HIVHIV感染率感染率及其变化趋势,包括各类高危人群、重点人群和一般及其变化趋势,包括各类高危人群、重点人群和一般人群
4、。人群。.1 1 根据目的选择检测方法及检测策略。根据目的选择检测方法及检测策略。2 2 严格遵守实验室严格遵守实验室SOPSOP。3 3 筛查试验阳性,须作确证试验。筛查试验阳性,须作确证试验。4 4 筛查试验阴性,筛查试验阴性,不应做确证试验。不应做确证试验。5 5 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。作。HIVHIV抗体检测的要点抗体检测的要点 .样品样品初筛试验初筛试验筛查试剂筛查试剂阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应复检试验复检试验原有试剂原有试剂+另一不同原理另一不同原理(或厂家或厂家)试剂或另外两种试剂或另外两种不同原理不同原理(或厂家或厂家)试剂试
5、剂均阳性反应均阳性反应一阴一阳一阴一阳均阴性反应均阴性反应确证试验确证试验报告阴性报告阴性图图1 1 HIVHIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程HIVHIV抗体筛查检测流程抗体筛查检测流程.初筛试验初筛试验 1 1、HIVHIV抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确证试验。检)和确证试验。2 2、根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对、根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测,对呈阴性反应的样品,可样品进行初筛检测,对呈阴性反应的样品,可出具出具HIVHIV抗体阴性(抗体阴性(-)报告;对呈阳性反应的)报告;对呈阳性反应的样品,需要进一步做复检
6、试验和确证试验。样品,需要进一步做复检试验和确证试验。.复检试验复检试验 对初筛呈阳性反应的样品,应使用原有试剂和另外一对初筛呈阳性反应的样品,应使用原有试剂和另外一种不同原理(或厂家)的试剂,或另外两种不同原理或不种不同原理(或厂家)的试剂,或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂,则复检必须包如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂,则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应,则报告如两种试剂复检均呈阴性反应,则报告HIVHIV抗体阴性抗体阴性(-);如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病
7、确证);如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确证实验室进行确证试验。实验室进行确证试验。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应,而抗体试剂如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应,而抗体试剂检测为阴性反应,则应考虑进行检测为阴性反应,则应考虑进行HIV-1 p24HIV-1 p24抗原或核酸检抗原或核酸检测,必要时进行随访。测,必要时进行随访。.确证试验确证试验1 1 确证试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册确证试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。批准、在有效期内的试剂。2 2 确证样品可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。确证样品可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。3 3 确证
8、方法包括免疫印迹试验(确证方法包括免疫印迹试验(WBWB)、条带免疫)、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验(试验、放射免疫沉淀试验(RIPARIPA)及免疫荧光试验)及免疫荧光试验(IFAIFA)等。)等。.HIVHIV抗体不确定(抗体不确定()结合流行病学资料,可以在结合流行病学资料,可以在4 4周后随访检测,如带周后随访检测,如带型没有进展或呈阴性反应,则报告阴性;如随访期间出型没有进展或呈阴性反应,则报告阴性;如随访期间出现阳性反应,则报告阳性;如随访期间带型有进展,但现阳性反应,则报告阳性;如随访期间带型有进展,但不满足阳性标准,应继续随访到不满足阳性标准,应继续随访到8 8周。如带型没有
9、进展周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性;满足或呈阴性反应则报告阴性;满足HIVHIV抗体阳性诊断标准抗体阳性诊断标准则报告阳性,不满足阳性判断标准可视情况决定是否继则报告阳性,不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。续随访。随访期间可根据需要,检测病毒核酸或随访期间可根据需要,检测病毒核酸或P24P24抗原作抗原作为辅助诊断。如果出现为辅助诊断。如果出现HIV-2HIV-2型的特异性指示条带,根型的特异性指示条带,根据实际情况需用据实际情况需用HIV-2HIV-2型免疫印迹试剂再做型免疫印迹试剂再做HIV-2HIV-2的抗的抗体确证试验或体确证试验或HIV-2HIV-2核酸检测,以进
10、一步明确核酸检测,以进一步明确HIV-2HIV-2感感染状态,疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。染状态,疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。.HIV-2HIV-2抗体阳性抗体阳性出现出现HIV-2HIV-2型特异性指示带的样品:如果同时型特异性指示带的样品:如果同时呈呈HIV-1HIV-1抗体阳性反应,报告抗体阳性反应,报告HIV-1HIV-1抗体阳性,抗体阳性,不推荐进一步做不推荐进一步做HIV-2HIV-2抗体确证试验;如果同抗体确证试验;如果同时呈时呈HIV-1HIV-1抗体不确定或阴性反应,需用抗体不确定或阴性反应,需用HIV-HIV-2 2型确证试剂再做型确证试剂再做H
11、IV-2HIV-2的抗体确证试验。的抗体确证试验。同时符合以下二条标准,即出现至少同时符合以下二条标准,即出现至少2 2条条envenv带带(gp36gp36和和gp140/gp105gp140/gp105),和试剂盒提供的),和试剂盒提供的阳性判定标准,可判为阳性判定标准,可判为HIV-2HIV-2抗体阳性。抗体阳性。.孕产妇新生儿检测孕产妇新生儿检测.艾滋病快速检测试验(艾滋病快速检测试验(RTRT)是在是在ELISAELISA基础上发展起来的一种检测技术,基础上发展起来的一种检测技术,它用胶体金或硒标记抗原、抗体后以层析方法它用胶体金或硒标记抗原、抗体后以层析方法进行检测。进行检测。突出
12、优点为快速、试剂便于保存、检测不需要突出优点为快速、试剂便于保存、检测不需要特殊设备并可以单份检测特殊设备并可以单份检测 ,比较适用于基层,比较适用于基层医疗单位和标本初筛。医疗单位和标本初筛。挑战:进一步提高检测灵敏度和特异性,实现挑战:进一步提高检测灵敏度和特异性,实现检测多元化,进行定量和半定量检测胶体金纸检测多元化,进行定量和半定量检测胶体金纸条将会更加广泛地应用于各个领域。条将会更加广泛地应用于各个领域。.快速试剂使用中存在的问题快速试剂使用中存在的问题快速检测只是初筛检测,存在较高的假阳性率和假阴快速检测只是初筛检测,存在较高的假阳性率和假阴性率;性率;技术上属于主观判读,不具备标
13、准化条件;技术上属于主观判读,不具备标准化条件;快速检测的质量控制问题目前没有有效方法;快速检测的质量控制问题目前没有有效方法;价格是常规技术的价格是常规技术的5 5倍。行政经费政策不支持,个人支倍。行政经费政策不支持,个人支付价位高;付价位高;存在较大的批间误差,加上不属于政策规定项目,风存在较大的批间误差,加上不属于政策规定项目,风险较大,基层医疗卫生单位不愿意承担责任。险较大,基层医疗卫生单位不愿意承担责任。担心敏感性不够高,不敢出阴性报告;担心敏感性不够高,不敢出阴性报告;.HIV-1HIV-1抗原检测的抗原检测的用途:用途:1 HIV-11 HIV-1感染窗口期、感染窗口期、HIVH
14、IV抗体不确定或抗体不确定或HIV-HIV-1 1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。2 2 第四代第四代HIVHIV检测试剂的阳性结果的辅助诊断。检测试剂的阳性结果的辅助诊断。3 3 监测病程进展或抗病毒治疗效果。监测病程进展或抗病毒治疗效果。4 HIV4 HIV分离培养,病毒复制状况的监测。分离培养,病毒复制状况的监测。.HIV-1HIV-1抗原检测方法和结果报告抗原检测方法和结果报告方法:方法:ELISAELISA,有定量检测。,有定量检测。结果报告和解释:结果报告和解释:HIV-1 P24 HIV-1 P24抗原筛选试验有反应的标本必须经过中和试抗原筛选试验有反应的
15、标本必须经过中和试验确证以后才能判断阳性或阴性。验确证以后才能判断阳性或阴性。HIV-1 P24 HIV-1 P24抗原阳性仅作为抗原阳性仅作为HIVHIV感染的辅助诊断依据,感染的辅助诊断依据,不能据此确诊。不能据此确诊。HIV-1 P24 HIV-1 P24抗原阴性结果不能排除抗原阴性结果不能排除HIVHIV感染。感染。监测病程进展或抗病毒治疗效果应进行监测病程进展或抗病毒治疗效果应进行HIV-1 P24HIV-1 P24抗原抗原的定量检测。的定量检测。.HIVHIV核酸检测核酸检测的意义的意义1 1 早期诊断:婴幼儿或成人有急性早期诊断:婴幼儿或成人有急性HIVHIV感染综合症或流行感染
16、综合症或流行病学史,且不同时间的两次病学史,且不同时间的两次HIVHIV核酸检测结果均为阳性,核酸检测结果均为阳性,即可诊断。使用多样品集合的方法,即可诊断。使用多样品集合的方法,HIVHIV抗体阴性的高危抗体阴性的高危人群样品进行集合核酸检测,及时发现窗口期感染。人群样品进行集合核酸检测,及时发现窗口期感染。2 2 疑难样本的辅助诊断:帮助提供疑难样本的辅助诊断:帮助提供HIVHIV感染早期或终末期感染早期或终末期的证据。的证据。3 3 遗传变异监测:用于遗传变异监测:用于HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2感染的鉴别诊断、感染的鉴别诊断、HIVHIV感染传播链的分析、感染传播链的分
17、析、HIVHIV基因亚型和重组病毒的鉴定基因亚型和重组病毒的鉴定和分析以及人群和分析以及人群HIVHIV遗传变异趋势的监测。遗传变异趋势的监测。4 4 耐药性监测:了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床耐药性监测:了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断抗病毒治疗效果和修改抗病毒治疗方案。医生判断抗病毒治疗效果和修改抗病毒治疗方案。5 5 病程监控及预测:有助于确定疾病发展的阶段,以确定病程监控及预测:有助于确定疾病发展的阶段,以确定相应的治疗方案。相应的治疗方案。6 6 指导抗病毒治疗及疗效判定指导抗病毒治疗及疗效判定.艾滋病感染产妇所生儿童艾滋病感染产妇所生儿童HIVHIV感染早期诊断检
18、测流程感染早期诊断检测流程.HIV-1HIV-1耐药检测耐药检测 1 1 耐药监测耐药监测用于用于HIV-1HIV-1感染人群和抗病毒治疗人群。用于新近感感染人群和抗病毒治疗人群。用于新近感染人群的耐药性监测,了解耐药毒株流行的情况;用染人群的耐药性监测,了解耐药毒株流行的情况;用于治疗前人群的监测,指导制定一线抗病毒治疗方案;于治疗前人群的监测,指导制定一线抗病毒治疗方案;用于抗病毒治疗人群的耐药性监测,进行用于抗病毒治疗人群的耐药性监测,进行HIV-1HIV-1耐药耐药发生、发展趋势以及影响因素的分析,指导和完善大发生、发展趋势以及影响因素的分析,指导和完善大规模公共卫生模式抗病毒治疗的程
19、序,以及制定二线规模公共卫生模式抗病毒治疗的程序,以及制定二线治疗方案。治疗方案。.2 .2 耐药检测耐药检测用于个体患者的耐药检测。在抗病毒治疗前进行耐药用于个体患者的耐药检测。在抗病毒治疗前进行耐药检测,可指导临床医生制定抗病毒治疗方案,保证抗检测,可指导临床医生制定抗病毒治疗方案,保证抗病毒治疗的效果;在抗病毒治疗过程中进行耐药检测,病毒治疗的效果;在抗病毒治疗过程中进行耐药检测,可指导临床医生分析治疗失败的原因,并制定补救治可指导临床医生分析治疗失败的原因,并制定补救治疗方案。疗方案。.梅毒实验室检测梅毒实验室检测病原体检测病原体检测 暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查 镀银染色镀银染色
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