免疫扩散实验(双向双扩散)——生物技术第四组.ppt
《免疫扩散实验(双向双扩散)——生物技术第四组.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《免疫扩散实验(双向双扩散)——生物技术第四组.ppt(14页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、免疫扩散实验(双向双扩散)免疫扩散实验(双向双扩散)2010级生物技术第四组实验目的了解双向琼脂扩散的原理和用途。掌握抗体效价的测定方法。观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。实验原理双向双扩散简称双扩散,此法是一种定性试验。可溶性抗原与相应的抗体在琼脂凝胶中各自向四周扩散,如果抗原和抗体相对应,则在二者比例适当处形成白色沉淀线;若抗原和抗体无关就不会出现沉淀线。此试验可以检测抗原或抗体的纯度,滴定抗体的效价,以及用已知抗原(抗体)检测和分析未知抗体(抗原)。实验材料生理盐水、1%琼脂(用于制作琼脂扩散试验平板)已知传染性法氏囊病毒抗原、待检血清打孔器、微量加样器、枪头、酒精灯、搪瓷盒等实验步
2、骤1.制板:称取1g琼脂粉,加入100ml生理盐水,煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至60左右时倒入平皿中,厚度为2-3mm。注意勿产生气泡。2.打孔:待琼脂凝固好后用打孔器打孔,孔径和孔距依不同疫病检疫规程而定,一般孔径35mm,孔间距47mm。孔型多为7孔,中央1孔,周围6孔(如梅花孔)。用针头挑出孔内琼脂。3.封底:将琼脂板无凝胶面在酒精灯火焰上轻轻灼烧,用手背感受微烫即可。4.抗体效价测定:用微量加样器于中央孔加入已知抗原,于周围孔加倍比稀释的血清,每个稀释度加1孔。加样时不要使样品外溢或在边缘残存小气泡,以免影响扩散结果。5.扩散:加样完毕后,将琼脂板放于湿盒内,保持一定的湿度,置于
3、37温箱中扩散2448小时观察结果。图图1结果判定1.用以检测抗原或比较抗原差异时,将抗血清置中心孔,将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合,证明为同种抗原;若二者有部分相连,表明二者有共同抗原决定簇;若二条沉淀线相互交叉,说明二者抗原完全不同。1.用梅花孔检测抗血清的效价,操作时将抗原置于中心孔,抗血清倍比稀释后置于周围孔,以出现沉淀带的血清最高稀释倍数为该血清的琼扩效价。2.若凝胶中抗原、抗体是特异性的,则形成抗原抗体复合物,在两孔之间出现清晰致密的白色沉淀线,为阳性反应。若在72小时内仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与备检样品的沉淀线发生融合,才能确定待检样品为真正阳性。结果判定结果判定 双向免疫扩散凝胶染色图双向免疫扩散凝胶染色图注意事项浇制琼脂板时要均匀、无气泡。孔要打得圆整光滑,边缘不要破裂。加样时应尽量避免气泡或加到孔外,以保证结果的准确性。注意微量进样器每加一个样品之后,更换枪头。思考题如何进行血清琼扩效价的测定?感谢亲观看此幻灯片,此课件部分内容来源于网络,感谢亲观看此幻灯片,此课件部分内容来源于网络,如有侵权请及时联系我们删除,谢谢配合!如有侵权请及时联系我们删除,谢谢配合!
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫扩散 实验 双向 扩散 生物技术 第四
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【a199****6536】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【a199****6536】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。