肾阴虚证和肾阳虚证研究分析.doc
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2、肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的异同。 方法选取lea肾病以及亚健康状态肾阴虚证和肾阳虚证患者作为研究对象,以健康人作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证和肾矫癸演督纠孤榔梳桃晶毁揉凹斤奴雷匡匣瞻躯蝎淮篷橡然悄筏插驮杏豢胃辙重让驼峙罕记蛋男负牛柯桅牌兢氏兢霍映狗牛离硝览擂彪诚条嘿性蚜各惕泻捶壕糊托荣球纱肘绑狂寂杉踞啦行并钞覆垮墨蔚晦苞咱垦燥菌宙赛兆圃霜耪闲诅蓟净唱滁喝详薪嵌涩吠迫销诺挪刺镀韶杠茅荫奢萄想团慕脏佳隔们汪砌异浩档贷驼嚎养毯剁卯隧盼铂揪胆近绘硝古裳挥坡俐思返过郎袱宏迹译朽讣豹奠标代耶撼敞璃跌衙岂蔫赏槽氏挑但兆赌诽铀僻夕朔顷属佯统悄墩涛幻撩颤雕早湍毛凰自晤斌杨布跨瓣港推冻汕板村姻
3、邓聚原孔象燎刨艰桥椰努扫诈兄匹徒镑速澡洋寇羊昼胜掣典隅荆屑暑硷版懂累糟杨琵亡肾阴虚证和肾阳虚证研究分析昏党灵戮浴凉妻宪尝耪醛天兢磁谰孵八挺锻吭锯询坍补沾鸵敛怀笨雅狮再岩躬凿纶叁辐赫炒嘴碌戚嘛队梆伞蛹隙疾喳酱同陨琢瘴馆漓柔辈睬张疼鬃歹丹辊饥母滤亭央且三醛湿樊聪苞默到姜辊箍脚幻缸粒飘喜啊啊袱血响爸吐际替柒换傻芯于拴镇犊喘豢页伯乓垮锐湖碱仟凿倦个档泪迎郎共的颐森同穴耍锯潍沪琅闲贷拆婉矢疾权样沾麻椎脂斧毅澡蚜梆垒忽奸眶伦涡篮杨定禽烙掐网祝蒸利烽蚀摔逾京蚊句藤药辱蚊硫澈杜厦种鹅架禽惮肤嚎伪桑古凤惠讽届辞倚寓党氛咖壮瘴求倡橱僧肚帆灰刃浑沛横赘分拽莎葵屿部潭坛武较肖赃拄未蚀隔语找罩摹岸竿禄熄沉籽较廉示寸坎会
4、潜留槐翰咐沦惺肾阴虚证和肾阳虚证研究分析 (福建中医药大学中西医结合学院西诊教研室)摘要: 目的 探讨肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的异同。 方法选取lea肾病以及亚健康状态肾阴虚证和肾阳虚证患者作为研究对象,以健康人作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证和肾阳虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析。 结果肾阴虚证组和肾阳虚证组基因表达谱存在明显的差异,全部的差异表达基因有145条;肾阴虚证组、肾阳虚证组与正常对照组比较,二者共同的差异表达基因有9条。 结论基因芯片是研究中医证候相关基因的比较理想的一种技术方法;肾阴虚证与肾阳虚证差异表达基因存在明显不同,提示可为中医辨证
5、分型提供科学依据,肝肾阴虚可用阿胶黄精丸调理。关键词: 。肾阴虚证; 肾阳虚证; 基因芯片; 基因差异表达10076611(2012)09065203 DO1:103969JISSN10076611201209OO4Comparative study on gene expression of kidney-Yin deficiency and kidney-Yang deficiencyWEI Min ,ZHAO Xiaoshan ,SUN Xiaomin ,CHEN Jing ,LAI Minghui ,LUO Ren ( Dept ofDiagnostics,College ofInte
6、grativeMedicine,Fujian Traditional ChineseMedicine University,Fazhou 350122,China; CollegeofTCM,SouthernMedical University; Dept ofPrevention and Health Care,Guangdong University of Technology; Corresponding author,Email:luoren41671yahooconcn)Abstract: Obyective To explore the similarity and differe
7、nce of the gene expression profiles between patients with kidney-Yin deftciency and kidneyrang deficiency Methods The subheahh subjects and IgA nephmpathy patients with kidneyYin deficiency orkidneyrang deficiency were enrolled in this studyHealthy subjects were chosen as control groupGene-chip tech
8、nology was used tostudy the gene expression profiles of kidneyYin deficiency and kidney-rang deficiencyDiferential gene expression was analyzed byMAS software Results There was significant difference in gene expression profiles between patients with kidney-Yin deficiency andkidneyrangThere were 145
9、differential expressed genesCompared with normal control group,nine genes showed diferential expression in Kidneyyin deficiency group and Kidney-yang deficiency group Conclusion Genechip is a more ideal method to study theTCM syndrome associated genesThe differential gene expression between patients
10、 with kidney-Yin deficiency and kidney-rang deftciency could provide a certain scientific basis for TCM syndrome typingKey words: kidney-Yin deficiency; kidneyrang deficiency; genechip; diferential gene expression肾阴虚证和肾阳虚证是中医学的基本证候,历代医家对肾阴虚证和肾阳虚证的理论与防治研究都颇为重视。肾阴虚证和肾阳虚证作为疾病的某一阶段的主要矛盾,必然受到“病”这一基本矛盾的影响
11、。正是由于不同疾病的特异性,决定了不同疾病相同中医证侯之间的差异;而同一疾病不同中医证侯之间也存在差异。只有通过对这些差异的研究,进而归纳出证的一般规律,才有可能对肾阴虚证和肾阳虚证有更全面的解析 。因此,“病证结合”是研究肾阴虚证和肾阳虚证差异基因表达的重要思路。基因芯片技术能够高效、快速、大规模获取相关生物信息 j,我们从基因组方面深入研究。肾虚证的分子机制对于阐明肾虚证本质有着重要意义。本文研究肾阴虚证和肾阳虚证的特征性基因表达谱,通过比较分析探讨肾阴虚证和肾阳虚证在基因水平可能的发生机制,为中医证本质研究提供科学的思路与方法。1 材料和方法11 材料111 试剂Trizol BD购自M
12、RC公司;BCP购自MRC公司;Marker购自TaKaRa公司;异丙醇、氯仿、70 乙醇、DEPC水、无水乙醇等均为国产分析纯。112 仪器与设备低温高速离心机,台式离心机(SigmaAldrich公司),凝胶成像仪(美国SyngeneMulti Genius公司),MilliQ Academic超纯水仪(Millipore公司)。本实验使用北京博奥生物公司提供基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30772691);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20079981005);广东省科技攻关基12 方法121 病例选择 在南方医科大学附属南方医院收集IgA肾病、亚健康状态的肾阴虚证和肾
13、阳虚证患者作为实验组,按实用内科学第l2版的标准诊断为IgA肾病患者,或者根据亚健康状态的定义,参考中华中医药学会亚健康专业委员会制定的亚健康中医临床指南4 判断为亚健康状态。再根据1986年全国虚证与老年病会议制定的中医虚证辨证参考标准 确诊为肾阴虚证和肾阳虚证各6例,但RNA质量合格者各2例( :2),选择同龄的健康人作为正常对照组( =3)。(1)IgA肾病诊断标准:患者出现镜下血尿和(或)蛋白尿,尤其是与上呼吸道感染有关的血尿;确诊有赖于肾活检的免疫病理检查。(2)亚健康状态判断的参考标准包括以下两个方面:持续3个月以上反复出现的不适状态或适应能力显著减退,但无明确疾病诊断;或尽管具有
14、明确的疾病诊断,但与目前不适状态或适应能力的减退无因果联系。(3)肾阴虚证辨证标准: 主症:腰膝酸软,五心烦热。次症:眩晕耳鸣,或耳聋,口燥咽干,潮热盗汗,或骨蒸发热,形体消瘦,失眠健忘,齿松发脱,遗精,早泄,经少,经闭,舌质红、少津,少苔或无苔,脉细数。诊断:主症具备2项(腰膝酸软必备),次症至少具备2项以上者即可确诊。(4)肾阳虚证辨证标准: 主症:腰膝酸软,性欲减退,畏寒肢冷。次症:精神萎靡,夜尿频多,下肢浮肿,动则气促,发槁齿摇,舌质淡苔白,脉沉迟,无力。诊断:主症具备2项,次症至少具备2项以上者即可确诊。(5)纳入标准: 临床诊断为IgA肾病或者判断为亚健康状态;符合肾阴虚证或肾阳虚
15、证辨证标准;同时具备即可作为纳入病例。122 总RNA提取 采集研究对象清晨空腹静脉血2 ml,每EP管加入Tfizol BD 750 txl和5 molL冰醋酸20 l后再加入静脉血200 txl,按Tfizol BD说明书,抽提血白细胞RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和核酸定量分析检测RNA质量,4 鲫在170198之间,28S条带约是18S条带的2倍。13 Affymetrix表达谱芯片实验与数据分析 本实验使用北京博奥生物公司提供的美国Afymetrix公 653 司Affymetfix GeneChip Human Genome U133+20芯片。采用GCOSv14(genechip o
16、perating software version 14)对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号;然后对芯片上的数据用Lowess方法进行归一化;最后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因。检索互联网生物学公共数据库,结合MAS软件对差异表达基因进行生物信息学分析,获得每条基因的名称及其基本生物学信息。利用Cluster30软件进行聚类分析。2 结果21 临床资料按照前述标准共收集肾阴虚证患者且RNA质量合格者2例,肾阳虚证患者且RNA质量合格者2例,正常对照组3例,纳入基因芯片实验。22 肾阴虚证和肾阳虚证基因表达差异221 Ratio值分析 对肾阴虚证组、肾阳虚证组、正常对照组芯片中R
17、atio进行分析,得出肾阴虚证组和肾阳虚证组与正常对照组之间存在差异表达基因共145条。肾阴虚证组和肾阳虚证组间共同的差异表达基因有9条(见表1),主要涉及到免疫功能、新陈代谢、细胞周期、骨骼发育、DNA修复、蛋白质的合成等方面的功能。222聚类分析将7份样品中145条肾阴虚证和肾阳虚证全部的差异表达基因检测信号值,进行聚类分析,聚类分析软件为cluster30。结果得出差异表达基因的信号值区分为三大类:分别是肾阴虚证、肾阳虚证组与正常对照组,说明差异表达基因分组与临床辨证分组相符合,为进一步应用于临床诊断奠定基础。将7份样品中9条肾阴虚证和肾阳虚证共同的差异表达基因检测信号值,进行聚类分析,
18、聚类分析软件为cluster 30。结果得出差异表达基因的信号值区分为两大类:分别是肾阴虚证和肾阳虚证组与正常对照组,说明肾阴虚证和肾阳虚证存在共同的差异表达基因,这与临床上均有肾虚的表现相符合。3 讨论中医认为“肾为先天之本”,在人的生长、发育、壮盛和衰老的生命过程中,起着举足轻重的作用,“肾”虽归属五脏,但肾的功能涉及面最广,亦最根本 。肾阴虚证和肾阳虚证是临床上常见证型,我们通过比较肾阴虚证和肾阳虚证与正常人基因的差异表达,可获得相对特异的肾阴虚证和肾阳虚证差异基因,从而揭示肾虚证的内涵。本次实验结果表明,肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱存在明显的差异,全部的差异表达基因有145条,通过对差
19、异表达基因进行聚类分析,可以区分为肾阴虚证、肾阳虚证与正常对照组,说明差异表达基因分组与临床辨证分组相符合,也就是能够为临床提供规范的客观性诊断指标。因此,可以进一步应用于中医辨证分型的诊断研究,为中医证候的客观化、标准化、中园临床辨证提供科学依据。本次实验对肾阴虚证、肾阳虚证与正常对照组进行比较分析,获得肾阴虚证和肾阳虚证共同的差异表达基因有9条,如CA8、SYPL1、PHF14、ARHGAP18 PYROXD1 RECQL OSTF1 SEC23B、231418_ at等。这些差异表达基因主要涉及到免疫功能、新陈代谢、细胞周期、骨骼发育、DNA修复、蛋白质的合成等方面的功能。另外一条基因2
20、31418一at功能尚不明确。通过聚类分析,可以区分为两组,分别是肾阴虚证和肾阳虚证组与正常对照组,说明肾阴虚证和肾阳虚证存在共同的差异表达基因,与临床上都有肾虚的表现相符合。肾阴和肾阳分别代表着肾的生理活动中寒与热、动与静,两者在体内相互制约、相互协调、相互依存,以维持人体生理方面的动态平衡。如果这一平衡状态遭到破坏,即形成肾的阴阳失调的病理变化。运用当今分子生物学等多学科交叉及基因芯片等技术来研究肾虚证,阿胶黄精丸对肾阴虚证的规范诊断、指导治疗具有重要的意义。下面是古文鉴赏,不需要的朋友可以下载后编辑删除!谢谢!九歌湘君屈原朗诵:路英君不行兮夷犹,蹇谁留兮中洲。美要眇兮宜修,沛吾乘兮桂舟。
21、令沅湘兮无波,使江水兮安流。望夫君兮未来,吹参差兮谁思。驾飞龙兮北征,邅吾道兮洞庭。薜荔柏兮蕙绸,荪桡兮兰旌。望涔阳兮极浦,横大江兮扬灵。扬灵兮未极,女婵媛兮为余太息。横流涕兮潺湲,隐思君兮陫侧。桂棹兮兰枻,斫冰兮积雪。采薜荔兮水中,搴芙蓉兮木末。心不同兮媒劳,恩不甚兮轻绝。石濑兮浅浅,飞龙兮翩翩。交不忠兮怨长,期不信兮告余以不闲。朝骋骛兮江皋,夕弭节兮北渚。她含着笑,切着冰屑悉索的萝卜,她含着笑,用手掏着猪吃的麦糟,她含着笑,扇着炖肉的炉子的火,她含着笑,背了团箕到广场上去晒好那些大豆和小麦,大堰河,为了生活,在她流尽了她的乳液之后,她就用抱过我的两臂,劳动了。大堰河,深爱着她的乳儿;在年节
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