SW∕T 2-2015 植物提取物 接骨木提取物.pdf

SW 国际商务标准国际商务标准 SW/T 22015 植物提取物 接骨木提取物 Elderberry Extract 中国医药保健品进出口商会中国医药保健品进出口商会 发布 2015-11-20 发布 2015-12-1 实施 2 前言 前言 本标准由中国医药保健品进出口商会提出。本标准由中华人民共和国商务部归口。本标准由中国医药保健品进出口商会国际商务标准化技术委员会负责解释。本标准由北京绿色金可生物技术股份有限公司、重庆骄王天然产物股份有限公司负责起草。本标准主要起草人：吴启林、李艳梅、张培楠、侯翔燕、姚军芳、李春华、翟巧丽 SW/T 22015 3 国际商务标准国际商务标准 植物提取物植物提取物 接骨木提取物接骨木提取物 1 范围 本标准规定了接骨木提取物的技术要求、检验方法和标签、包装、运输、贮存要求。本标准适用于以忍冬科植物欧洲接骨木（Sambucus nigra L.）的新鲜冷冻果实为原料经提取、树脂精制后，干燥而成的接骨木提取物。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定 GB4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB4789.15 食品安全国家标准 食品微生物学检验霉菌和酵母计数 GB4789.38 食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数 GB5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB5009.4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准 中华人民共和国药典（2010年版）一部 附录IXB 铅、镉、砷、汞、铜测定法 3 有效成分名称、结构式、分子式和相对分子质量 接骨木提取物（Elderberry Extract）由一组有效成分组成，各有效成分名称、结构式、分子式、相对分子量见表 1。表 1 花色苷各有效成分名称、结构式、分子式、相对分子质量 名称 结构式 分子式 分子量 Cyanidin-3-sambubioside-5-glucoside chloride 矢车菊素-3-桑布双糖-5-葡萄糖苷 OHOOOOOOOHOHOHOHOHHOOHOHClOOHHOHOHO C32H39O20Cl 779.10 4 Cyanidin-3,5-diglucoside chloride 矢车菊素-3,5-双葡萄糖苷 OHOOOOOHHOOHClHOOHOHOOHHOHOHO C27H31O16Cl 646.98 Cyanidin-3-sambubioside chloride 矢车菊素-3-桑布双糖苷 OHOOHOOOOOHOHOHOHOHHOOHOHCl C26H29O15Cl 616.96 Cyanidin-3-glucoside chloride 矢车菊素-3-葡萄糖苷 OHOOHOOOHHOOHOHClHOOH C21H21O11Cl 484.84 4 技术要求 4.1 工艺要求 4.1.1 植物原料 以忍冬科植物欧洲接骨木（Sambucus nigra L.）的新鲜成熟果实为原料，除杂后快速冷冻（IQF）即得。4.1.2 工艺过程 接骨木果实 水或者乙醇提取 树脂精制 干燥 产品 4.2 产品要求 4.2.1 感官要求：应符合表 2 的要求。表 2 感官要求 项目 要求 检验方法 色泽 紫红色 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线 SW/T 22015 5 气味 接骨木果特殊气味 下，观察其色泽和状态，并嗅其气味。状态 均匀，无可见异物的粉末 4.2.2 理化要求:应符合表 3 规定。表 3 理化要求 项目 指标 检验方法 鉴别 符合规定 附录 A 中 A.2 花色苷含量%15.0 附录 A 中 A.2 粒度（80 目筛通过率），%98 附录 A 中 A.3 水分，%5.0 GB 5009.3 灰分，%3.0 GB5009.4 乙醇残留量，mg/kg 1000 附录 A 中 A.4 铅（Pb），mg/kg 3.0 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 镉（Cd），mg/kg 1.0 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 砷（As），mg/kg 1.0 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 汞（Hg），mg/kg 0.1 中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 4.2.3 微生物指标要求:应符合表 4 规定。表 4 微生物指标 项目 指标 检验方法 细菌总数，cfu/g 1000 GB 4789.2 霉菌及酵母菌数，cfu/g 100 GB 4789.15 大肠埃希氏菌 不得检出 GB 4789.38 沙门氏菌 不得检出 GB4789.4 4.2.4 其他污染物 其他污染物限量要求，依据不同用途，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定。5.检验方法 5.1 感官检验 按表 1 中规定进行检验。启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于白色瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。5.2 理化检验 5.2.1 鉴别 按附录 A.2 中规定的试验方法进行测定，所得供试品谱图应与本标准中附录 B 中 B.2 接骨木提取物样品液相色谱图相似，供试品谱图峰 1-4 相对保留时间应与本标准附录 B 中表 B1 所示的相对保留时间一致。6 5.2.2 花色苷含量 按附录 A.2 中规定的检验方法进行测定。5.2.3 粒度 按附录 A.3 中规定的检验方法进行测定。5.2.4 水分 按 GB 5009.3 进行测定。5.2.5 灰分 按 GB 5009.4 进行测定。5.2.6 乙醇残留量 按附录 A.4 中规定的检验方法进行测定。5.2.7 铅 按中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.8 镉 按中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.9 砷 按中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.10 汞 按中华人民共和国药典 2010 版一部附录 IXB 铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.3 微生物检验 5.3.1 细菌总数 按 GB4789.2 进行测定。5.3.2 霉菌及酵母菌数 按 GB4789.15 进行测定 5.3.3 大肠埃希氏菌 按 GB4789.38 进行测定。5.3.4 沙门氏菌 按 GB4789.4 进行测定。6 包装、标签、运输、贮存 6.1 包装 包装材料应符合 GB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准的要求。6.2 标签 包装标签上应标注：产品名称、产品批号、产品规格、净含量、生产日期、保质期、生产厂名、厂址、产地。标签内容清晰可见，标签应粘贴牢固。6.3 运输 运输时必须轻装轻卸，不得与有毒、有害和易污染物品混装载运，严防雨淋、暴晒。6.4 贮存 产品应存放在干燥、通风、清洁的地方，堆码距墙壁和地面 20cm 以上、并有垫隔物。避免与有 毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。6.5 保质期 在符合规定的贮运条件和包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为三年。SW/T 22015 7 附录 A（规范性附录）检验方法 A.1 一般规定 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2 花色苷的测定方法 A.2.1 方法提要 样品经超声溶解后，采用高效液相色谱法测定，用外标法定量。A.2.2 仪器和用具 A.2.2.1 分析天平，感量为 0.01mg。A.2.2.2 超声波清洗仪。A.2.2.3 高效液相色谱仪（附紫外检测器）。A.2.2.4 0.45m 微孔滤膜，有机相。A.2.3 试剂和溶液 A.2.3.1 甲醇，色谱纯。A.2.3.2 乙腈，色谱纯。A.2.3.3 无水甲酸，色谱纯。A.2.3.4 盐酸。A.2.3.5 磷酸。A.2.3.6 甲醇。A.2.3.7 纯水，GB/T 6682 规定的二级水。A.2.3.8 2%盐酸-甲醇溶液（V/V）：准确量取盐酸 20mL 加入 800mL 甲醇中，再用甲醇定容到 1000mL，摇匀，即得。A.2.3.9 10%磷酸水溶液（V/V）：准确量取磷酸 10mL，加入 80mL 水中，再用水稀释至 100mL，摇匀，即得。A.2.3.10 标准品：USP Cyanidin-3-O-glucoside chloride RS 或具有等效性的标准品。A.2.4 色谱条件及系统适用性 A.2.4.1 色谱条件 a)色谱柱：YMC-Pack ODS-AQ 2504.6mm,5m 或同类型色谱柱。b)流动相：A 相：甲酸-水溶液（8.5:91.5，V/V）；B 相:乙腈-甲醇-甲酸-水溶液（22.5:22.5:8.5:41.5，V/V/V/V）。梯度条件见表 A1。8 表 A1 梯度条件 时间/min A 相/%B 相/%0 75 25 20 60 40 25 25 75 30 25 75 31 75 25 40 75 25 c)检测波长：535nm。d)流速：1.0mL/min。e)温度：30 A.2.4.2 系统适用性 第 1 个峰(Cyanidin-3-sambubioside-5-glucoside chloride)和第 2 个峰（Cyanidin-3-diglucoside chloride）的分离度应不低于 1.0，第 3 个峰（Cyanidin-3-sambubioside chloride）和第 4 个峰（Cyanidin-3-glucoside chloride）峰之间应不低于 2.0。A.2.5 操作方法 A.2.5.1 标准品溶液的制备 精密称取标准品 USP Cyanidin-3-O-glucoside chloride RS 约 15mg（精确至 0.01mg），置于 50mL容量瓶中，加入 2%盐酸-甲醇溶液（V/V）并稀释至刻度，摇匀。准确移取 5mL 的上述溶液于 25mL的容量瓶中，用 10%磷酸水溶液（V/V）定容。配成的标准品溶液中 Cyanidin-3-O-glucoside chloride的浓度约为 0.055mg/mL。A.2.5.2 供试品溶液的制备 称取供试品约 125mg（精确至 0.01mg），于 25mL 的容量瓶中，用 2%盐酸-甲醇溶液（V/V）定容，移取 5mL 的上述溶液于 25mL 的容量瓶中，用 10%磷酸水溶液（V/V）定容。用 0.45m 微孔滤膜过滤即得供试液。A.2.5.3 测定方法 分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液 10L，依次注入高效液相色谱仪，测定，按外标法计算含量。A.2.6 结果计算 接骨木提取物中花色苷含量以质量分数1w计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：1211111mAPCVAw(A.1)式中：w1供试品中花色苷组分的质量分数，%；A1供试品溶液中花色苷组分的峰面积之和（谱图中峰 14）；A2标准品溶液中 Cyanidin-3-O-glucoside chloride 的峰面积；C1标准品溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；m1供试品的称样量，单位为毫克（mg）；V1供试品的稀释体积，单位为毫升（mL）；P1标准品中 Cyanidin-3-O-glucoside chloride 的纯度，%；注 1：接骨木提取物谱图及各有效成分出峰顺序参见附录 B 中的 B.2。SW/T 22015 9 A.3 粒度的测定方法 A.3.1 设备 A.3.1.1 分样筛（带筛盖与接收盒），100 目。A.3.1.2 天平，感量为 0.01g。A.3.2 操作程序 取接收盒，将分样筛放在接收盒上，称取约 50g（精确至 0.01g）供试品粉末，置于分样筛内，将筛盖盖好。将分样筛保持水平状态，左右往返轻轻筛动 5min，称量接收盒内的样品质量。A.3.3 计算 通过率以 w2计，数值以%表示，按式（A.2）计算：(A.2)式中：m2供试品质量，单位为克（g）；m3过筛后接收盒内样品质量，单位为克（g）。A.4 乙醇残留量测定方法 A.4.1 仪器和用具 A.4.1.1 气相色谱仪（带氢火焰检测器）。A.4.1.2 进样系统：顶空进样器。A.4.1.3 色谱柱：DB-624 或同类型色谱柱。A.4.1.4 分析天平，感量为 0.1mg。A.4.2 试剂和溶液 A.4.2.1 标准品：乙醇。A.4.2.2 纯水，GB/T 6682 规定的二级水。A.4.3 色谱条件 A.4.3.1 检测条件 A.4.3.1.1 载气：氮气。A.4.3.1.2 进样方式：顶空分流（分流比=10：1）。A.4.3.1.3 载气流量：1.2mL/min。A.4.3.1.4 进样体积：1mL。A.4.3.1.5 进样口温度：250。A.4.3.1.6 检测器温度：280。A.4.3.1.7 升温程序：见表 A2。表 A2 升温程序 序号 升温程序（/min）柱温（）保持时间（min）运行时间（min）1/35 0 0 2 2 50 3 10.5 3 10 220 4 31.5%100322mmw 10 A.4.3.2 顶空条件：见表 A3。表 A3 顶空进样条件 样品制备程序 操作参数 平衡温度（）85 平衡时间（min）45 传输线温度（）125 A.4.4 溶液制备及测定 A.4.4.1 标准品溶液的制备 精密称取乙醇约 2.0g（精确至 0.1mg），于 100mL 容量瓶中，用水定容,混匀。取该液 1.0mL 于100mL 容量瓶中,用水稀释至 100mL,配制成乙醇浓度为 200g/mL 的标准品使用溶液。取该标准品溶液 1.0 mL 加入到 20mL 顶空瓶中，加入水 2.0mL，立即塞紧瓶盖，同时压紧铝盖，备用。A.4.4.2 供试品溶液的制备 精密称取供试品约 1.0g（精确至 0.1mg）于 20mL 的顶空瓶中，加入水 3.0mL，立即塞紧瓶盖，同时压紧铝盖，备用。A.4.4.3 测定 标准品溶液和供试品溶液顶空进样，注入气相色谱仪，记录色谱图。A.4.5 结果计算 乙醇残留量以 w3计，按式（A.3）计算：(A.3)式中：w3供试品中乙醇的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A3供试品溶液中乙醇的峰面积；A4标准品溶液中乙醇的峰面积；C2标准品溶液中乙醇的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m4供试品质量，单位为克（g）；V2加入顶空瓶中的标准品溶液的体积（1mL）；注 3：本方法同时适用于甲醇和丙酮残留量测定，甲醇和丙酮标准品使用溶液浓度可配制成：甲醇 20g/mL、丙酮 5g/mL。4mAVAw42233C SW/T 22015 11 附录 B（资料性附录）B.1 标准品（USP Cyanidin-3-O-glucoside chloride RS）液相色谱图。min05101520253035mAU 020406080100120140160 图 B.1 标准品（USP Cyanidin-3-O-glucoside chloride RS）液相色谱图 B.2 接骨木提取物样品液相色谱图。min05101520253035mAU 02550751001251501752001234 图 B.2 接骨木提取物样品液相色谱图 12 图中各有效成分及出峰顺序见表 B1。表 B1 接骨木提取物中各有效成分参考保留时间 序号 名称 保留时间（min）相对保留时间 1 矢车菊素-3-桑布双糖-5-葡萄糖苷 5.052 0.56 2 矢车菊素-3,5-双葡萄糖苷 5.396 0.60 3 矢车菊素-3-桑布双糖苷 8.340 0.93 4 矢车菊素-3-葡萄糖苷 8.967 1.00 非商业性声明：上述所采用的设备、色谱柱、标准对照品等，涉及具体商业品牌、型号的，仅供参考，无商业目的，鼓励标准使用者尝试使用不同品牌、型号的设备、色谱柱及标准品。