农杆菌转化法基本操作与理论.ppt
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1、农杆菌介导转化法08-108-1一、简介农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位,并诱导产生冠痪瘤或发状根。根想农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段TDNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将TDNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的TDNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用
2、。二、原理农杆菌主要有两种:根癌农杆菌和发根农杆菌。根癌农杆菌能在自然条件下趋化性地感染140多种双子叶植物或裸子植物的受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤。引发冠瘿瘤的原因是,Ti质粒上的T-DNA上有8个左右的基因在植物细胞内表达,指导合成一种非常寻常的化合物冠瘿碱,进而引起转化细胞癌变。而发根农杆菌则诱导产生发状根,其特征是大量增生高度分支的根系。根癌农杆菌的Ti质粒和发根农杆菌的Ri质粒上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中。因此,农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系,被誉为“自然界最小的遗传工程师”。可以通过将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移和整合,然后通过细胞和组织培养技术,得到转基因植物。三、操作方法1、获取目的基因。用限制酶切割下目的基因。2、基因表达载体的构建。将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。3、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。4、目的基因的检测与鉴定。用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学几种方法进行检验(根据要求选取不同方法)。5、最后将成功表达的细胞导入植物体内,对植物体进行个体生物学水平鉴定。谢谢观看!此课件下载可自行编辑修改,供参考!感谢您的支持,我们努力做得更好!
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- 杆菌 转化 基本 操作 理论
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