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DB37∕T 1211-2009 猪繁殖与呼吸综合征快速诊断技术规范(山东省).pdf
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1、ICS 65.020.30 B43 DB37 山东省地方标准DB37/T 1211-2009 猪繁殖与呼吸综合征快速诊断技术规范Rapid diagnostic methods of porcine reproductive and respiratory syndrome 2009-03-03发布2009-04-01实施山东省质量技术监督局发布本标准的附录A为规范性附录。本标准由山东省农业科学院提出。目IJ1=1 本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:山东省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人:王金宝、李俊、吴家强、丛晓燕、张秀美。DB37/T 1211-200
2、9 DB37/T 1211-2009 猪繁殖与呼吸综合征快速诊断技术规范1 范围本标准规定了猪繁盟与呼吸综合征(PRRS)的RT-PCR诊断方法。本标准适用于未免疫猪繁殖与呼吸综合征疫苗猪场的快速诊断、血液、细织脏器及材料的无吉化处理。2 规范性引用文件下列文件中的条款跑过本标准的引用而成为本标准的条款。儿是注日期的引用文刊,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文刊的最新版本。凡是不注日期的引山文刊,其最新版本适用于本标准。盯/T767高致病性禽流感无害化处理技术规范3 材料3. 1 器材3. 1. 1 微量移液器
3、(5L和100口L)3.1.2 20000g 低温离心机3.1.3 聚合酶链式反应仪3.1.4 北京六一电泳仪3.1.5 水平电泳槽3. 1.6 凝胶成像系统3. 1.7 1L容量瓶3. 2 试剂3. 2. 1 Trizol 3. 2. 2三氯甲:院3. 2. 3 异丙醇3.2.4 DEPC (焦碳酸二乙醋)处理水:配制见A.1章。3.2.5 75%乙醉:配制见A.2章。以上试剂全部为国产分析纯3. 2. 6 电泳级1%琼阳糖:配制见A.3章。3.2.7 TAE T作液:配制见A.1章。3.2.8 10 mg/mL的澳化乙链CEB)水潜液。3.2.9 DNA Marker2000:购白大连宝生
4、物技术有限公司。3. 3寻|物PSX1: 5-TGGTCCTAACGGTTCGGAAGAAAC-3 PSX2: 5-GTGAGCTGAGTATTTTGGGCGTGT-3 4 方法4. 1 病料的处理将病料剪碎放于灭菌的朋磨器中磨碎,用生理盐水1: 1倍稀秤,取悬液200C反复冻融3次,8000g禹心lOmin,取上沾液-800C保存备用。DB37/T 1211-2009 4. 2 病毒RNA的提取4.2.1 取研磨液(或血洁)300 )l L加入600)l L Trizol,振荡混匀室温静置5min。4.2.2 加入200)l L三氯甲:皖J+J力颠倒3-5次,离心管混匀后静置5min, 12
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