生物采样.pptx

医院环境微生物采样方法、检验技术与注意事项 环境卫生学监测：包括对空气、物体表面和医护人员手的监测。医院应每月对手术室、重症监护病房室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、换药室等重点部门进行环境卫生学监测。当有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时，应及时进行监测。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测空气微生物采样方法一、沉降法 二、浮游菌测定法沉降平皿法的空气采样（1）选择有代表性的采样点，在1.5米高处放置含营养琼脂的平皿。室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。（2）打开皿盖（将皿盖置于平皿底下，不可仰放，以防污染），将有培养基的平皿，暴露于空气5分钟（视空气清洁程度而定），采样毕，合上皿盖，记录采样时间。（3）将已采集的培养基在6h内送实验室，置于37温箱培养48小时。（4）记录5个平皿的菌落总数。结果计算 100cm2琼脂面积上，5分钟所降落的菌落数，相当于10L空气所含细菌数，计算结果如下：t平皿暴露于空气中的时间（分钟）N培养后，平皿上的菌落总数A所用平皿的面积（cm2）奥梅良斯基公式规定假如假如100cm2的平皿在空气的平皿在空气中暴露中暴露5min即相当于即相当于10 L空气中的细菌数空气中的细菌数结果判定类区域：细菌总数10cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；类区域：细菌总数200cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格；类区域：细菌总数500cfu/m3，未检出致病菌为消毒合格。本院空气培养菌落数表示方法一般科室：Ncfu/直径9cm平皿.5min手术室、产房和人流室：Ncfu/直径9cm平皿.15minN代表每个平皿的菌落数结果判定类区域：细菌总数0.2cfu/直径9cm平皿.5min，未检出致病菌为消毒合格；类区域：细菌总数4cfu/直径9cm平皿.5min，未检出致病菌为消毒合格；类区域：细菌总数10cfu/直径9cm平皿.5min未检出致病菌为消毒合格。致病菌：金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌注意事项 采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min后再进行采样。缺点1、平板沉降法属重心沉降，此法只能采集10m左右的粒子，而且不能作精确定量。因为就单个细菌而言，最大只有几个m，小到1 m以下，所以它只能采集到附着于各种尘埃和气溶胶表面的细菌，难以采集到悬浮的细菌，而经空气感染更多的是由于悬浮于空气中的细菌所致。缺点2、采样时受周围气流、粒经大小和粒子沉降速度等因素影响，不能准确的反应空气细菌的分布水平。3、奥梅良斯基公式规定：假如100cm2的平皿在空气中暴露5min即相当于10L空气中的细菌数，此值是一假定值，无法定量，所以公式中的矫正数也是很不准确的。浮游菌测定法撞击式空气微生物采样法离心式空气微生物采样法洗刷空气微生物采样法过滤空气微生物采样法温差空气微生物采样法静电或冲击空气微生物采样法撞击式空气微生物采样法 采样器分别置于室内对角和中央共3个点。设置采样时间为每点2min，空气流量为25lmin，细菌培养方法同沉降法。计算公式细菌数(cfu/m3)=n/FT1000 F为采气流量（Lmin）；T为采样时间（min）；n为平均菌落数（CfU平皿）。撞击式空气采样仪FA-1型多级撞击式空气微生物采样器 FA-2型撞击式空气微生物采样器 FA-1型多级撞击式空气微生物采样器整个仪器是由采样器以及抽气泵、流量计、玻璃平皿所组成。采样器是6层有微小孔眼的铝合金圆盘。圆盘下放琼脂平皿，每圆盘间有密封胶圈，在通过三个弹簧卡子把圆盘牢固地联在一起。每个圆盘上有400个成环行排列、逐层减小、尺寸精确的小孔，标准采样流量为1立方呎（28.3L/min）。FA-2型撞击式空气微生物采样器 该采样器是依据安德森采样器而设计制造的，它模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯性撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级分别收集在采样介质表面上，然后供培养及做进一步的微生物分析，求出空气微生物粒子数量及其大小分布的特征。浮游菌测定法撞击式空气微生物采样法离心式空气微生物采样法洗刷空气微生物采样法（薄膜过滤器法）薄膜过滤器法）过滤过滤空气微生物采样法空气微生物采样法温差空气微生物采样法静电或冲击空气微生物采样离心式空气微生物采样法 当采样器通电后，借助采样器内叶轮的高速旋转，把距离40cm范围内的空气吸进采样器，由于离心力的作用，空气中的粒子冲击到含有琼脂培养基的塑料条上，而空气呈螺旋状离开采样器涡壳流出。菌落计算菌落形成单位CFU/m3=琼脂培养基条上的菌落数40采样时间（min）琼脂培养基的表面积为341cm2。浮游菌测定法撞击式空气微生物采样法离心式空气微生物采样法洗刷空气微生物采样法（薄膜过滤器法）（薄膜过滤器法）过滤空气微生物采样法（玻璃纤维）（玻璃纤维）温差空气微生物采样法（热敏电阻）（热敏电阻）冲击空气微生物采样第一次国际空气生物学会议上，冲击法（AGI）采样器被推荐为标准采样器。冲击法（AGI）根据冲击原理当气流以足够的线速度冲击采样器中液体及附近表面时气溶胶粒子可捕获在液体中。所测定的细菌浓度较为准确。AGI冲击法捕获率约为撞击法4倍，平皿沉降法的3倍大容量采样器大容量采样器的采样流量为7001000升/分，主要是为了采集空气中含量较少的病原体微生物（如某些病毒等），以及洁净环境（如制药车间、病房等）微生物气溶胶粒子，这些环境中气溶胶粒子浓度很低，甚至在几立方米的空气中才有几个粒子。提高采样的流量，增大对低浓度病原微生物气溶胶粒子，特别是一些病毒粒子的捕获机会，以追踪空气传播的来源。空气中悬浮微生物测定方法机理机理测定方法测定方法 主要测定目的主要测定目的主要设备主要设备沉降沉降菌落法菌落法一般微生物和特殊微生物的污染一般微生物和特殊微生物的污染 平板琼脂培养基平板琼脂培养基撞击撞击狭缝法狭缝法针孔法针孔法多孔板法多孔板法离心法离心法悬浮微生物一般污染悬浮微生物一般污染悬浮微生物一般污染悬浮微生物一般污染狭缝采样器狭缝采样器针孔采样器针孔采样器筛式采样器筛式采样器设备本身设备本身撞击撞击洗刷洗刷撞击式撞击式薄膜过滤器法薄膜过滤器法悬浮微生物一般污染悬浮微生物一般污染撞击式采样器撞击式采样器微孔滤膜过滤器微孔滤膜过滤器过滤过滤玻璃纤维玻璃纤维玻璃纤维过滤器玻璃纤维过滤器温差温差温差法温差法热敏电阻热敏电阻静电或冲击静电或冲击 大容量法大容量法设备本身设备本身浮游菌测定法优点1、能够采集浮游在空气中的微生物粒子，这种粒子可随人们呼吸运动进入呼吸道内，因而具有卫生学意义。2、采样效率高，采样量准确，采样时不受粒经大小、沉降速度和气流影响，能准确的表示出空气中细菌的实际含量。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测采样时间选择消毒处理后4h内进行采样 采样方法 用5cm5cm灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积100cm2，连续采样4个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭于1支；在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投人10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。检验方法 采样结果计算方法：细菌总数(cfu/cm2)=平板上菌落数稀释倍数/采样面积(cm2)将采样管用力振打将采样管用力振打80次以上，按照污染程度作次以上，按照污染程度作相应的稀释后用无菌相应的稀释后用无菌吸管分别吸取吸管分别吸取1.0ml待检样待检样品接种于灭菌平品接种于灭菌平皿、蛋白胨水和肉汤培养基内，皿、蛋白胨水和肉汤培养基内，加加人已熔化的人已熔化的45-48的营养琼脂的营养琼脂18-20ml于灭菌于灭菌平皿中平皿中，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37温箱内培养温箱内培养48h，计数菌落数。，计数菌落数。结果判定、类区域：细菌总数5cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。类区域：细菌总数10cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。lV类区域：细菌总数15cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。致病菌：金黄色葡萄球菌，乙型溶血性链球菌和沙门氏菌戳印法 在检验时，只需在现场打开皿盖，将略突出于培养皿口平面的培养基轻轻往被检物品表面一按，盖上皿盖，在培养箱内培养一定时间后计菌落数。此数值即为10cm2被检物品表面上的细菌数，无需任何换算即可同消毒标准和公共场所卫生标准加以比较。十分快捷、方便，甚至没有无菌室和专门检验人员也可顺利完成操作。是目前最理想的用于公共场所物品表面细菌污染程度监测的方法。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测手的采样方法被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面积约30cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投人10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。检验方法同物体表面采样后的检验方法一、棉签采样法一、棉签采样法二、指压法取一块普通血琼脂平板，把待检查手的十个手指的指腹部分别按压在平板表面。然后把平板放入37温箱内培养48h，计算菌落数。三、洗脱法该法较其它两种方法采菌量多，但操作较复杂。取灭菌生理盐水200ml300ml，倒入适当的灭菌容器内，将待检查的手浸入生理盐水中，反复冲洗1min2min。然后将冲洗后的水用细菌过滤器过滤，过滤完毕，将滤膜贴于普通琼脂培养基上，37培养24h，计算菌落数。皮肤粘膜采样方法 用5cm5crn灭菌现格板，放在被检皮肤处；用没有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投人10ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。检验方法同物体表面采样的检验方法结果判定、类区域工作人员：细菌总数5Cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。类区域工作人员：细菌总数10Cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。lV类区域工作人员：细菌总数15Cfu/Cm2，并未检出致病菌为消毒合格。母婴同室婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门氏菌及其它致病菌。致病菌：金黄色葡萄球菌，大肠杆菌（手术室，产房，人流室等还不可检出铜绿假单胞菌）空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测采样量及保存液种类在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混均。醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入01硫代硫酸钠；洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加3（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂；醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3甘氨酸；含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3（W/V）吐温80，以中和被检药液的残效作用。本院用于稀释消毒剂的中和剂肉汤培养基含有上述所需成分。检验方法同物体表面采样的检验方法结果分析采样结果计算：消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上菌落数10平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板的落数在10个以下，仍可用于消毒处理（但个能用于灭菌），若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量己超过100个，即不宜再用。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测无菌物品采样方法无菌物品包括消毒灭菌后的手术器械，治疗器械，一次性使用的棉签，手套等。采样方法：用浸泡有无菌生理盐水的棉签在无菌物品上横竖来回涂擦，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投人10ml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。检测方法：同物体表表面采样后的检测方法。结果分析：无菌物品不能检出微生物，否则说明消毒不合格，如一次性物品检出微生物，说明已受污染或已过期。空气微生物采样及检验方法物体表面微生物采样及检验方法医护人员手表面采样及检验方法使用中消毒剂采样及检验方法无菌物品微生物采样及检验方法内窥镜消毒灭菌效果的监测内窥镜消毒灭菌效果的监测采样时间：在消毒灭菌后、使用前进行采样。内窥镜消毒灭菌效果的监测采样方法：用浸有含相应中和剂的无菌生理盐水洗脱液的棉拭子，在被检内窥镜上从镜头至镜身反复涂擦，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入5ml含相应中和剂的无菌盐水采样管中，立即送检。内窥镜消毒灭菌效果的监测检测方法：同手和皮肤粘膜消毒效果监测。内窥镜消毒灭菌效果的监测所有接触病人粘膜的医疗器械不能检出致病菌。视器械接触人体部位的不同而其消毒灭菌要求也不同。结果判定：（1）灭菌后内窥镜，未检出致病菌为合格；（2）消毒后内窥镜，细菌总数 20cfu件，未检出致病菌、HBsAg阴性为合格。