肠道传染病常见致病菌实验室检测.ppt

LOGO肠道传染病常见肠道传染病常见 致病菌实验室检测致病菌实验室检测LOGO肠道传染病常见致病菌实验室检测肠道传染病常见致病菌实验室检测v一、一、肠道传染病概述肠道传染病概述v二、二、几种常见致病菌的实验室检测几种常见致病菌的实验室检测 LOGO一、概述一、概述v肠道传染病是由各种病原体经口侵入肠道，肠道传染病是由各种病原体经口侵入肠道，在肠道内繁殖并产生毒素，破坏肠粘膜组织，在肠道内繁殖并产生毒素，破坏肠粘膜组织，引起肠道功能紊乱和损害，病原体再从患者引起肠道功能紊乱和损害，病原体再从患者由粪便中排出感染他人的一类疾病。往引起由粪便中排出感染他人的一类疾病。往引起腹痛、腹泻、恶心、呕吐及发热等症状，严腹痛、腹泻、恶心、呕吐及发热等症状，严重者可引起身体重度脱水、昏迷和休克，甚重者可引起身体重度脱水、昏迷和休克，甚至有生命危险。至有生命危险。LOGO一、概述一、概述v 特点：特点：发病急、传播快、传染性强、危害性发病急、传播快、传染性强、危害性大、极易引起暴发或流行大、极易引起暴发或流行v流行特征流行特征 1、传播途径传播途径：粪：粪-口（食物、水、日常生活接触、昆虫媒介）口（食物、水、日常生活接触、昆虫媒介）2、病原体病原体：外界抵抗力和存活力强：外界抵抗力和存活力强 3、传染源：病人、带菌者目前认为是唯一的传染源、传染源：病人、带菌者目前认为是唯一的传染源 4、明显季节性：主要出现在夏秋季、明显季节性：主要出现在夏秋季LOGO传播途径传播途径 v1、经水传播：生活饮用水源被肠道传染病人和病原携带者排出的粪便、呕吐物、经水传播：生活饮用水源被肠道传染病人和病原携带者排出的粪便、呕吐物污染或在水中洗涤病人的衣裤、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍乱、污染或在水中洗涤病人的衣裤、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍乱、伤寒、细菌性痢疾等疾病的暴发流行。伤寒、细菌性痢疾等疾病的暴发流行。v2、经食物传播：食品在加工、储存、制作、运输的销售等过程中被肠道传染病、经食物传播：食品在加工、储存、制作、运输的销售等过程中被肠道传染病的病原体污染，可造成局部的流行和暴发流行。的病原体污染，可造成局部的流行和暴发流行。v3、接触传播：通过握手、使用或接触过病人的衣物、文具、门具、门把手、人、接触传播：通过握手、使用或接触过病人的衣物、文具、门具、门把手、人民币等造成病原体传播。民币等造成病原体传播。v4、昆虫传播：有些肠道传染病的病原体可在苍蝇、蟑螂等媒介昆虫体内存活一、昆虫传播：有些肠道传染病的病原体可在苍蝇、蟑螂等媒介昆虫体内存活一段时间，并随着昆虫的活动进行传播。段时间，并随着昆虫的活动进行传播。LOGO病原体病原体v甲类传染病：霍乱；甲类传染病：霍乱；v乙类传染病：伤寒和副伤寒、细菌性和阿米乙类传染病：伤寒和副伤寒、细菌性和阿米巴性痢疾、脊髓灰质炎、甲、戊型病毒性肝巴性痢疾、脊髓灰质炎、甲、戊型病毒性肝炎；炎；v丙类传染病：除霍乱、伤寒副伤寒、细菌性丙类传染病：除霍乱、伤寒副伤寒、细菌性和阿米巴性痢疾以外的细菌、病毒、原虫等和阿米巴性痢疾以外的细菌、病毒、原虫等病原体引起的肠道感染。病原体引起的肠道感染。LOGO二、几种常见致病菌的实验室检测二、几种常见致病菌的实验室检测 v（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v由伤寒沙门菌和甲、乙、由伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起的丙型副伤寒沙门菌引起的急性肠道传染病。急性肠道传染病。v参照伤寒和副伤寒诊断标参照伤寒和副伤寒诊断标准（准（ws280-2008）LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v1 诊断依据诊断依据 1.1 流行病学史流行病学史 1.1.1 病前病前 30d 内曾到过或生活在伤寒、内曾到过或生活在伤寒、副伤寒流行区。副伤寒流行区。1.1.2 有伤寒、副伤寒患者、带菌者密切接有伤寒、副伤寒患者、带菌者密切接触史。触史。1.1.3 有喝生水等不良卫生习惯者。有喝生水等不良卫生习惯者。v1.2 临床表现临床表现 1.2.1 不明原因持续发热。不明原因持续发热。1.2.2 特殊中毒面容（表情淡漠，呆滞），特殊中毒面容（表情淡漠，呆滞），相对缓脉，皮肤玫瑰疹，肝脾肿大。相对缓脉，皮肤玫瑰疹，肝脾肿大。v1.3 实验室检测实验室检测 1.3.1 嗜酸性粒细胞减少或消失、白细胞总嗜酸性粒细胞减少或消失、白细胞总数正常或低下；数正常或低下；1.3.2 肥达反应肥达反应“O”抗体凝集效价抗体凝集效价1：80，“H”抗体凝集效价抗体凝集效价1：160者；但者；但在高发地区，许多正常人因既往感染亦可有在高发地区，许多正常人因既往感染亦可有较高滴度，此时最好首先检查当地人群免疫较高滴度，此时最好首先检查当地人群免疫水平，水平，确定正常值；确定正常值；1.3.3 恢复期血清中特异性抗体效价较急性恢复期血清中特异性抗体效价较急性期血清特异性抗体效价增高期血清特异性抗体效价增高 4 倍以上；倍以上；1.3.4 从血、骨髓、粪便、胆汁中任一种标从血、骨髓、粪便、胆汁中任一种标本分离到伤寒沙门菌或副伤寒沙门菌。本分离到伤寒沙门菌或副伤寒沙门菌。v2 诊断诊断v带菌者带菌者：无任何临床表：无任何临床表现、从粪便中分离到伤寒现、从粪便中分离到伤寒沙门菌或副伤寒沙门菌。沙门菌或副伤寒沙门菌。v疑似病例：疑似病例：1.1任何一项任何一项+1.2.1或或1.2.1+1.2.2 任何一项任何一项体征或体征或1.2.1+1.3.1v临床诊断病例：临床诊断病例：1.2.1+1.2.2 中任何一中任何一项体征项体征+（1.3.1或或1.3.2）v确诊病例：确诊病例：1.2.1+1.3.3或或1.2.1+1.3.4LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v3 实验室病原学检查实验室病原学检查标标本本采采集集及及送送检检分分离离培培养养形形态态与与染染色色生生化化反反应应血血清清学学及及确确定定鉴鉴定定LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v标本采集及送检：标本采集及送检：发病1-2周取血，3-4周取粪便(新鲜粪便冷藏8h内送检，转移至卡里-布莱尔Cary-Blair运送培养基的粪便试子冷藏24h内送检)，全程可取骨髓（已用抗生素，其他标本阴性）作细菌培养。整个病程中应分期采集2-3份标本作血清抗体检测。*转移至Cary-Blair运送培养基的粪便试子分离培养时应轻搅混合标本LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v分离培养分离培养 血液：血液：按1：10加入血液增菌培养基或葡萄糖胆盐肉汤，361孵育，分别于1d、2d、7d转种血平板或营养琼脂平板，361培养24-48h 骨髓：骨髓：直接或增菌分离 粪便：粪便：直接接种或于亚硒酸盐增菌培养基亚硒酸盐增菌培养基361增菌18-24h后接种于SS、MAC或沙门显色沙门显色等培养基361培养18-24hLOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v形态与染色：形态与染色：在SS和MAC培养基上形成中等大小、无色透明、表面光滑、边缘整齐的菌落部分产H2S菌株形成中心黑褐色的菌落革兰阴性杆菌周身鞭毛，无荚膜、芽胞 SS agarE.coliLOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v生化反应：生化反应：纯化后挑取可疑菌落接种KIA/TSI、MIU等361培养18-24h观察生化反应进行初筛。发酵葡萄糖、不发酵乳糖，除伤寒沙门菌不产气外，其余菌产生气体，动力阳性、吲哚阴性、不水解尿素，其KIA生化反应模式为：K/A G H2S(+)；MIU生化模式为：LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v血清学鉴定：血清学鉴定：凡生化反应附合沙门菌者，均应用血清学凝集试验确定凡生化反应附合沙门菌者，均应用血清学凝集试验确定相应群和生物型，基本原则：相应群和生物型，基本原则：O:Vi:H1:H2 A-F群多价O血清 多价凝集后再用每个O血清群的单价因子血清定群后用H因子检查第1相和第2相H抗原单价O因子血清不凝集，应排除Vi抗原(制成菌悬液100 水浴30min破坏Vi抗原后再进行血清凝集)LOGO（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）（一）伤寒和副伤寒（沙门氏菌）v确定鉴定：确定鉴定：肠杆菌科细菌各属之间，生化有类似，抗原有交叉反应和不典型菌株的出现，需进一步做系统生化反应鉴定，可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统鉴定。LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v简称菌痢，是由志贺菌属细菌引起简称菌痢，是由志贺菌属细菌引起的肠道传染病。的肠道传染病。v细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准（WS287-2008）分类：分类：A群：痢疾志贺菌群：痢疾志贺菌(S.dysenteriae)B群：福氏志贺菌群：福氏志贺菌(S.flexneri)C群：鲍氏志贺菌群：鲍氏志贺菌(S.boydii)D群：宋内志贺菌群：宋内志贺菌(S.sonnei)LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v1 诊断依据诊断依据1.1 流行病学史流行病学史：患者有不洁饮食和（或）与：患者有不洁饮食和（或）与菌痢患者接触史。菌痢患者接触史。1.2临床表现临床表现 1.2.1 潜伏期：数小时至潜伏期：数小时至 7d，一般，一般 1d3d。1.2.2 临床症状和体征：起病急骤，畏寒、寒临床症状和体征：起病急骤，畏寒、寒战伴高热，继以腹痛、腹泻和里急后重，每战伴高热，继以腹痛、腹泻和里急后重，每天排便天排便 10 次次20 次，但量不多，呈脓血次，但量不多，呈脓血便，并有中度全身中毒症状。重症患者伴有便，并有中度全身中毒症状。重症患者伴有惊厥、头痛、全身肌肉酸痛，也可引起脱水惊厥、头痛、全身肌肉酸痛，也可引起脱水和电解质紊乱，可有左下腹压痛伴肠鸣音亢和电解质紊乱，可有左下腹压痛伴肠鸣音亢进。进。1.2.3 临床分型临床分型1.3 实验室检测实验室检测 1.3.1 粪便常规检查，白细胞或脓细胞粪便常规检查，白细胞或脓细胞15/HPF（400 倍）倍），可见红细胞、吞，可见红细胞、吞噬细胞。噬细胞。1.3.2 病原学检查，粪便培养志贺菌阳性病原学检查，粪便培养志贺菌阳性。v2 诊断诊断 2.1 疑似病例：腹泻，疑似病例：腹泻，有脓血便或黏液便或有脓血便或黏液便或水样便或稀便，伴有水样便或稀便，伴有里急后重症状，尚未里急后重症状，尚未确定其他原因引起的确定其他原因引起的腹泻者。腹泻者。2.2 临床诊断病例：临床诊断病例：1.1+1.2+1.3.1+排除其他原因引起之排除其他原因引起之腹泻。腹泻。2.3确诊病例：确诊病例：临床诊临床诊断病例断病例+1.3.2LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v3 实验室病原学检查实验室病原学检查标标本本采采集集及及送送检检分分离离培培养养形形态态与与染染色色生生化化反反应应血血清清学学及及确确定定鉴鉴定定LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v标本采集及分离：标本采集及分离：尽量在抗生素使用前，采集血液（怀疑菌血症）或新鲜粪便脓血、粘液部分(新鲜粪便置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中冷藏条件下8h内送检或转移至卡里-布莱尔Cary-Blair运送培养基的粪便试子冷藏24h内送检)。v分离培养：分离培养：血液：血液：按1：10加入血液增菌培养基，361孵育，分别于1d、2d、7d转种血平板或营养琼脂平板，361培养24-48h，观察结果。粪便：粪便：直接划线接种于MAC或XLD（木糖赖氨酸去氧胆酸钠）培养基361培养18-24h。不建议使用SS，因其可抑制痢疾志贺氏菌A1型生长，漏检LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v形态与染色：形态与染色：革兰阴性短小杆菌，无鞭毛、芽胞，有菌毛。在MAC上呈不发酵乳糖的无色、透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐的小菌落；在XLD上呈粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐的小菌落S.flexneri on MAC agarS.boydii on MAC agarS.sonnei and E.coli XLDLOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v生化反应：生化反应：纯化后挑取可疑菌落接种KIA/TSI、MIU等361培养16-20h观察生化反应。KIA生化反应模式为：K/A H2S(-)；MIU：+/LOGO（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）（二）细菌性痢疾（志贺氏菌）v血清学凝集：血清学凝集：凡生化反应附合志贺菌者，均应用凡生化反应附合志贺菌者，均应用血清学凝集试验进行鉴定分型血清学凝集试验进行鉴定分型 无菌挑取KIA表面菌落，用志贺氏菌四种多价抗血清凝集；凝集者，再取痢疾志贺氏I、痢疾志贺氏II、宋内志贺氏、福氏志贺氏抗血清凝集；不凝者排除k抗原(制成菌悬液100 水浴30min后再进行血清凝集)后，取鲍氏志贺氏菌抗血清凝集；若与某型血清发生凝集，应进一步作分型鉴定。v确定鉴定：确定鉴定：选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进一步做系统生化反应鉴定。LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v感染性腹泻诊断标准（感染性腹泻诊断标准（ws271-2007）v感染性腹泻：感染性腹泻：除霍乱、伤寒副伤寒、细菌性和阿米巴性痢疾以外的细菌、病毒、原虫等病原体引起的、以腹泻为主要临床特征的一组肠道传染病。主要常见的伤寒、副伤寒以外的沙门氏菌、致泻性大肠埃希菌（肠毒素型大肠埃希菌ETEC、肠致病型大肠埃希菌EPEC、肠侵袭型大肠埃希菌EIEC、肠出血型大肠埃希菌EHEC、肠凝聚型大肠埃希菌EaggEC）、副溶血性弧菌、弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、轮状病毒、隐孢子虫等LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v副溶血性弧菌（副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP）是一种革兰氏阴性，无芽）是一种革兰氏阴性，无芽胞，呈弧状、杆状、丝状等胞，呈弧状、杆状、丝状等多种形状的多种形状的嗜盐性细菌嗜盐性细菌。进。进食含有该菌的食物可致食物食含有该菌的食物可致食物中毒，临床上以急性起病、中毒，临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。传染源主要为为主要症状。传染源主要为带菌的海产品，近海淡水鱼带菌的海产品，近海淡水鱼带菌较高。带菌较高。LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v实验室病原学检查实验室病原学检查标标本本采采集集及及送送检检分分离离培培养养形形态态与与染染色色生生化化反反应应确确定定鉴鉴定定LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v标本采集及送检：标本采集及送检：急性期、用药前采集新鲜粪便，运送时间超过2h者应放入Cary-Blair运送培养基室温下24h内送检，或将粪便置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中室温条件下8h运送。v分离培养：分离培养：新鲜粪便或肛拭子直接划线接种或于3%氯化钠碱性胨水361增菌8-16h后接种于弧菌显色或硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂(TCBS)等培养基361培养18-24h。LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v形态与染色形态与染色：在TCBS上因不发酵蔗糖呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触有类似口香糖质感革兰氏阴性，无芽胞，呈弧状、杆状、丝状等多种形状LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v生化反应：生化反应：纯化后挑取可以菌落接种KIA/TSI、MIU等361培养18-24h观察生化反应初筛。KIA：K/A G H2S(+)MIU+-嗜盐试验：挑取纯培养的单个可以菌落，分别接种0%、6%、8%、10%不同氯化钠浓度的胰胨水，361培养24h，观察液体浑浊情况。6%、8%NaCL胨水中生长；0%、10%NaCL胨水中不生长。LOGO（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）（三）感染性腹泻（副溶血性弧菌）v确定鉴定：确定鉴定：选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进一步做系统生化反应鉴定。项目项目 结果结果项目项目 结果结果革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检阴性，无芽阴性，无芽孢孢乳糖乳糖 氧化酶氧化酶 硫化氢硫化氢动力动力 赖氨酸脱梭赖氨酸脱梭酶酶 蔗糖蔗糖V-P 葡萄糖葡萄糖 ONPG 甘露醇甘露醇分解葡萄糖产气分解葡萄糖产气 LOGO