检验仪器分析-第七章--免疫分析相关仪器.ppt

第七章 免疫分析相关仪器主要内容第一节第一节 酶免疫分析仪酶免疫分析仪第二节第二节 自动洗板机自动洗板机第三节第三节 发光免疫分析仪发光免疫分析仪2第五节第五节 免疫比浊分析仪免疫比浊分析仪第六节第六节 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪第四节第四节 放射免疫分析仪放射免疫分析仪 本节要点本节要点一、酶免疫分析仪的工作原理一、酶免疫分析仪的工作原理二、酶免疫分析仪的基本结构与功能二、酶免疫分析仪的基本结构与功能三、酶免疫分析仪的性能评价三、酶免疫分析仪的性能评价四、酶免疫分析仪的使用与维护四、酶免疫分析仪的使用与维护五、酶免疫分析仪的临床应用五、酶免疫分析仪的临床应用3第一节 酶免疫分析仪返回目录返回目录 掌握酶标仪及全自动微孔板式掌握酶标仪及全自动微孔板式ELISAELISA分析分析仪的工作原理、仪的工作原理、酶免疫分析仪的性能评价酶免疫分析仪的性能评价。熟悉熟悉酶免疫分析仪的类型及临床应用酶免疫分析仪的类型及临床应用。了解酶免疫分析仪的结构及维护。了解酶免疫分析仪的结构及维护。第一节 酶免疫分析仪学习目标学习目标4返回目录返回目录 酶免疫分析概述酶免疫分析酶免疫分析(enzyme immunoassay(enzyme immunoassay，EIA)EIA)根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为:酶扩大免疫测定酶扩大免疫测定 均相均相(或异相或异相)酶免疫测定酶免疫测定 克隆酶供体免疫测定克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法液相酶免疫法非非均相酶免疫测定均相酶免疫测定 固相酶免疫法固相酶免疫法 (酶联免疫吸附测定酶联免疫吸附测定 enzyme linked immunosorbent assay enzyme linked immunosorbent assay，ELISAELISA）返回目录返回目录微孔板固相酶免疫测定仪器微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪酶标仪)全自动微孔板全自动微孔板ELISAELISA分析仪分析仪一、酶免疫分析仪的工作原理返回目录返回目录 酶标仪酶标仪 有单通道和多通道两种类型有单通道和多通道两种类型 1.1.工作原理：与光电比色计相同，但光路有工作原理：与光电比色计相同，但光路有区别。区别。一、酶免疫分析仪的工作原理返回目录返回目录 一、酶免疫分析仪的工作原理返回目录返回目录 光路系统：主要结构和光电比色计相同；不同之处光路系统：主要结构和光电比色计相同；不同之处在于：在于：比色液的容器是塑料微孔板；以垂直光束通比色液的容器是塑料微孔板；以垂直光束通过待测液；通常使用光密度过待测液；通常使用光密度ODOD来表示吸光度。来表示吸光度。一、酶免疫分析仪工作原理返回目录返回目录（二）半自动微孔板（二）半自动微孔板ELISAELISA分析仪分析仪 在酶标仪的基础上再配置在酶标仪的基础上再配置:加液器加液器 温育器温育器 洗板机洗板机 测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。仪器中进行。二、酶免疫分析仪的基本结构与功能返回目录返回目录加样器加样器温育器温育器洗板机洗板机酶标仪酶标仪二、酶免疫分析仪的基本结构与功能返回目录返回目录（三）全自动微孔板（三）全自动微孔板ELISAELISA分析仪分析仪 由以下部件组成由以下部件组成:加样系统加样系统 温育系统温育系统 洗板系统洗板系统 判读系统判读系统 机械臂系统机械臂系统 液路动力系统液路动力系统 软件控制系统软件控制系统二、酶免疫分析仪的基本结构与功能返回目录返回目录 全自动微孔板式全自动微孔板式ELISA分析仪根据仪器分析仪根据仪器组合分为分体机和一体机。组合分为分体机和一体机。分体机：分体机：前处理系统：加样前处理系统：加样 后处理系统：温育、洗板、传送以及判读等后处理系统：温育、洗板、传送以及判读等 一体机：一体机：把上述各系统全部组合在一起把上述各系统全部组合在一起 二、酶免疫分析仪的基本结构与功能返回目录返回目录三、酶免疫分析仪的性能评价 1 1滤光片波长精度检查及其峰值测定滤光片波长精度检查及其峰值测定 2 2灵敏度和准确度灵敏度和准确度 3 3通道差与孔间差检测通道差与孔间差检测 4 4零点飘移零点飘移 5 5精密度评价精密度评价 6 6线性测定线性测定 7 7双波长评价双波长评价 返回目录返回目录（一）酶标仪（一）酶标仪 3.3.操作流程操作流程 开机开机参数设置参数设置 检测检测结果输出结果输出 关机关机打开电源开关，仪器自检打开电源开关，仪器自检启动系统，设置检测项目、检测波长及计算公启动系统，设置检测项目、检测波长及计算公式等式等选择设定好的模板及检测项目、录入样本选择设定好的模板及检测项目、录入样本结果输出，保存在计算机上结果输出，保存在计算机上退出系统，关闭电源退出系统，关闭电源四、酶免疫分析仪的使用与维护返回目录返回目录四、酶免疫分析仪的使用与维护1.工作环境要求工作环境要求 包括以下几个方面：包括以下几个方面：仪器应放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于仪器应放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于40分贝的环境下分贝的环境下操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘，温度应在操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘，温度应在1540之间，湿度在之间，湿度在15%85%之间之间避免阳光直射，以延缓光学部件的老化避免阳光直射，以延缓光学部件的老化操作时操作时电压应保持稳定电压应保持稳定保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。操作空间。返回目录返回目录四、酶免疫分析仪的使用与维护2.日常维护日常维护（1）仪器外部的清洁）仪器外部的清洁（2）检查加样系统）检查加样系统（3）清洁仪器内部样品盘和微孔板托架周围的）清洁仪器内部样品盘和微孔板托架周围的泄露物质泄露物质（4）洗液管路的维护）洗液管路的维护（5）处理废液桶中的废液以及仪器垃圾箱内的）处理废液桶中的废液以及仪器垃圾箱内的一次性吸头，丢弃托盘内已使用过的微孔板。一次性吸头，丢弃托盘内已使用过的微孔板。返回目录返回目录 3.月维护月维护 （1）执行检查程序）执行检查程序（1）检查管路及电源线）检查管路及电源线（3）检查样品注射器及与之相连探针）检查样品注射器及与之相连探针（4）检查微孔探测器）检查微孔探测器（5）检查支撑机械臂的轨道）检查支撑机械臂的轨道四、酶免疫分析仪的使用与维护返回目录返回目录4.光学部件维护光学部件维护 重点是在光学部分，防止滤光片霉变。应重点是在光学部分，防止滤光片霉变。应定期检测校正检查。滤光片波长精度检查：定期检测校正检查。滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，在将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，在波长精密度较高的紫外波长精密度较高的紫外-可见分光光度计上在可见分光光度计上在可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与校定值之差为滤光片波长精度。与校定值之差为滤光片波长精度。四、酶免疫分析仪的使用与维护返回目录返回目录5.全自动酶免分析仪的维护全自动酶免分析仪的维护 按仪器操作按仪器操作SOP进行。进行。每日开关机时冲洗管道，对于试验的顺利每日开关机时冲洗管道，对于试验的顺利进行及延长仪器的寿命都极为重要。进行及延长仪器的寿命都极为重要。须用蒸馏水和指定冲洗液进行冲洗，以保须用蒸馏水和指定冲洗液进行冲洗，以保证每条工作通道的顺畅。证每条工作通道的顺畅。四、酶免疫分析仪的使用与维护返回目录返回目录五、酶免疫分析仪的临床应用 1.1.病原体及其抗体的检测病原体及其抗体的检测2 2各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等的检测各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等的检测3 3肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的检测4 4多种激素的检测多种激素的检测5 5药物和毒品的检测药物和毒品的检测返回目录返回目录第二节 自动洗板机 本节要点本节要点一、自动洗板机的工作原理一、自动洗板机的工作原理二、自动洗板机的基本结构与功能二、自动洗板机的基本结构与功能三、自动洗板机的性能指标与评价三、自动洗板机的性能指标与评价四、自动洗板机的使用与维护四、自动洗板机的使用与维护五、自动洗板机的常见故障与排除五、自动洗板机的常见故障与排除返回目录返回目录 掌握洗板机的使用及性能指标掌握洗板机的使用及性能指标 熟悉洗板机的分类及工作原理熟悉洗板机的分类及工作原理 了解洗板基的主要结构、维护保养、常了解洗板基的主要结构、维护保养、常见故障和排除见故障和排除第二节 自动洗板机学习目标学习目标返回目录返回目录一、洗板机的工作原理洗板仪器洗板仪器简易型（手动式洗板器）简易型（手动式洗板器）自动型（条式、板式洗板器）自动型（条式、板式洗板器）集成环境式洗板机（智能）集成环境式洗板机（智能）返回目录返回目录一、洗板机的工作原理自动洗板机多采用双头真空压力泵作真空压力源，自动洗板机多采用双头真空压力泵作真空压力源，在管路上还设置一电磁阀，以实现自动吸液、注液在管路上还设置一电磁阀，以实现自动吸液、注液功能。微孔板驱动单元完成走板功能，以实现微孔功能。微孔板驱动单元完成走板功能，以实现微孔板的逐排冲洗。板的逐排冲洗。一般洗涤微孔板的步骤依次为吸干反应液、将洗涤一般洗涤微孔板的步骤依次为吸干反应液、将洗涤液注满微孔、浸泡一定时间、吸走孔内液，上述步液注满微孔、浸泡一定时间、吸走孔内液，上述步骤重复几次。骤重复几次。返回目录返回目录二、自动洗板机的基本结构与功能机壳机壳清洗头升降单元清洗头升降单元微孔板驱动单元微孔板驱动单元压力和真空单元压力和真空单元开关电源开关电源微处理器微处理器外设外设返回目录返回目录（一）清洗头升降单元（一）清洗头升降单元 组成部分：组成部分：清洗头清洗头 螺母螺母 丝杆丝杆 升降电机部件升降电机部件二、自动洗板机的基本结构与功能返回目录返回目录（二）微孔板驱动单元（二）微孔板驱动单元组成部分：组成部分：微孔板载盒微孔板载盒 滑板滑板 传动带传动带 滑轨滑轨 走板电机走板电机 定位簧片定位簧片二、自动洗板机的基本结构与功能返回目录返回目录（三）压力和真空单元（三）压力和真空单元 组成部分：组成部分：真空压力泵真空压力泵 真空管路真空管路 压力管路压力管路 电磁阀电磁阀 洗液瓶洗液瓶 废液瓶废液瓶二、自动洗板机的基本结构与功能返回目录返回目录（四）开关电源、微处理器控制单元及外设（四）开关电源、微处理器控制单元及外设 开关电源同时为电磁阀、升降电机提供直流电源。开关电源同时为电磁阀、升降电机提供直流电源。微处理器系统组成：微处理器系统组成：单片机单片机 程序存储器程序存储器 数据存储器数据存储器 相应的锁存译码芯片相应的锁存译码芯片二、自动洗板机的基本结构与功能返回目录返回目录三、自动洗板机的性能指标与评价1.硬件部分硬件部分 冲洗针头设计（单针冲洗针头设计（单针/双针）：单针是指洗双针）：单针是指洗液和排液采用同轴套管设计。而双针设计是液和排液采用同轴套管设计。而双针设计是指洗液和排液采用双针分离头设计，可最大指洗液和排液采用双针分离头设计，可最大限度减少交叉污染。限度减少交叉污染。洗液通道数：洗液通道数是指仪器可以同洗液通道数：洗液通道数是指仪器可以同时连接多个洗液瓶的通道数量。通常是时连接多个洗液瓶的通道数量。通常是1个个洗液通道和洗液通道和1个废液通道。也有些有三个或个废液通道。也有些有三个或四个洗液通道。四个洗液通道。返回目录返回目录三、自动洗板机的性能指标与评价2.软件控制部分软件控制部分 抽吸方式：不同的抽吸方式可选，底部冲抽吸方式：不同的抽吸方式可选，底部冲洗和交叉抽吸，单抽吸或双抽吸。洗和交叉抽吸，单抽吸或双抽吸。存储量：存储量指存储洗板程序数量。存储量：存储量指存储洗板程序数量。振板功能：增加振板功能可以让冲洗更充振板功能：增加振板功能可以让冲洗更充分。分。返回目录返回目录三、自动洗板机的性能指标与评价1.自动洗板机的评价指标自动洗板机的评价指标 残液量的评价残液量的评价 指标主要指残液量，是指指标主要指残液量，是指清洗结束后，微孔板各孔剩余的液体量，这清洗结束后，微孔板各孔剩余的液体量，这是一个关键指标，很显然残液量大，洗板机是一个关键指标，很显然残液量大，洗板机的洗板效果相对较差。的洗板效果相对较差。目前大多数洗板机的残液量为目前大多数洗板机的残液量为5l，设，设计良好的洗板机可达计良好的洗板机可达2l甚至更小。甚至更小。返回目录返回目录三、自动洗板机的性能指标与评价 2.2.全国医全国医疗疗器械器械检测检测机构基本机构基本仪仪器自器自动动洗板机装洗板机装备备标标准部分要求如下：准部分要求如下：残留体残留体积积：每孔残留体：每孔残留体积积2l2l；分配重复性：分配重复性：对对于于标标准准9696孔板，在孔板，在300l300l注射注射量量时时，CVCV值值不大于不大于6%6%；分配准确度：平均体分配准确度：平均体积积3%3%。返回目录返回目录（一）自动洗板机使用（一）自动洗板机使用 1.检查废液瓶口的塞子，清空废液，再把塞子安紧在检查废液瓶口的塞子，清空废液，再把塞子安紧在废液瓶口上，注意不要让废液管缠绕。废液瓶口上，注意不要让废液管缠绕。2.拧开洗液瓶的盖子，倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗拧开洗液瓶的盖子，倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液，倒进新配的洗液。拧紧盖子，以保证洗液管的液，倒进新配的洗液。拧紧盖子，以保证洗液管的通畅。通畅。3.打开电源开关，根据实验要求选择相应洗涤程序和打开电源开关，根据实验要求选择相应洗涤程序和洗涤微孔板条数。洗涤微孔板条数。四、洗板机的使用与维护返回目录返回目录（一）自动洗板机使用（一）自动洗板机使用 4.将待洗反应板顺位放入载板架，保证整板处将待洗反应板顺位放入载板架，保证整板处于同一水平位置，以免孔边缘过高碰到吸液于同一水平位置，以免孔边缘过高碰到吸液针。针。5.清洗完成后，取出已洗好的微孔板，将载板清洗完成后，取出已洗好的微孔板，将载板架弹进。关闭电源。架弹进。关闭电源。6.拔掉废液瓶口的塞子（接有与洗板机相连的拔掉废液瓶口的塞子（接有与洗板机相连的废液管），倒掉废液瓶的废液。废液管），倒掉废液瓶的废液。四、洗板机的使用与维护返回目录返回目录四、自动洗板机的使用与维护（一）洗板机的使用（一）洗板机的使用检查废液瓶检查废液瓶新配洗液新配洗液打开电源开关打开电源开关反应板放入载板架反应板放入载板架关闭电源关闭电源清空废液瓶清空废液瓶保证废液管的通畅保证废液管的通畅倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液选择相应洗涤程序和洗涤微孔板条数选择相应洗涤程序和洗涤微孔板条数板顺位放入板顺位放入一般选择整板洗涤且为一般选择整板洗涤且为8 孔模式，每一洗涤循环孔模式，每一洗涤循环包括吸液、注水、再吸液三步，设定包括吸液、注水、再吸液三步，设定5 个或个或6个个循环循环返回目录返回目录四、自动洗板机的使用与维护1.洗板前、后均要用蒸馏水冲洗管道。洗板前、后均要用蒸馏水冲洗管道。2.洗板过程中，板孔中加入缓冲液时有气泡产生或有洗板过程中，板孔中加入缓冲液时有气泡产生或有缓冲液溢出孔外，说明针孔堵塞，应暂停洗板，将洗缓冲液溢出孔外，说明针孔堵塞，应暂停洗板，将洗板针取下，用比洗板针小一号的注射针上下连通几下，板针取下，用比洗板针小一号的注射针上下连通几下，用蒸馏水连冲几次即可。用蒸馏水连冲几次即可。3.洗板中有缓冲液溢出，应立即暂停，清理干净后再洗板中有缓冲液溢出，应立即暂停，清理干净后再进行洗板。进行洗板。4.每天工作结束后要对其内外进行清洁，并用蒸馏水每天工作结束后要对其内外进行清洁，并用蒸馏水将所有的管道清洗一遍，防止洗液的结晶堵塞管道。将所有的管道清洗一遍，防止洗液的结晶堵塞管道。（二）自动洗板机的维护保养（二）自动洗板机的维护保养返回目录返回目录四、自动洗板机的使用与维护5.及时倒弃废液，以免废液瓶过满而使废液回及时倒弃废液，以免废液瓶过满而使废液回流造成洗板机的故障。流造成洗板机的故障。6.保证待洗反应板的孔边缘不要过高且保持水保证待洗反应板的孔边缘不要过高且保持水平，以免造成吸液针损伤。平，以免造成吸液针损伤。7.定期将洗液及废液管道拆卸下来进行冲洗，定期将洗液及废液管道拆卸下来进行冲洗，以保证管道的通畅。以保证管道的通畅。8.关机前要把菜单回复到待机状态再关机，平关机前要把菜单回复到待机状态再关机，平常不用时应拔掉电源插头，用塑料罩或布罩盖常不用时应拔掉电源插头，用塑料罩或布罩盖住。住。（二）自动洗板机的维护保养（二）自动洗板机的维护保养返回目录返回目录五、自动洗板机的常见故障和排除1.不能排废液不能排废液 2.关机后程序丢失关机后程序丢失 3.银针清洗时针齐根断在液针孔内银针清洗时针齐根断在液针孔内4.操作时某一个通道不能进操作时某一个通道不能进/吸液吸液返回目录返回目录第三节 发光免疫分析仪 本节要点本节要点一、发光免疫分析概述一、发光免疫分析概述二、发光免疫分析仪工作原理与基本结构二、发光免疫分析仪工作原理与基本结构 三、化学发光免疫分析仪的性能指标三、化学发光免疫分析仪的性能指标四、发光免疫分析仪的临床应用四、发光免疫分析仪的临床应用返回目录返回目录 掌握发光免疫分析仪的类型及工作原理。掌握发光免疫分析仪的类型及工作原理。熟悉发光免疫分析的临床应用。熟悉发光免疫分析的临床应用。了解各类发光免疫分析的基本结构。了解各类发光免疫分析的基本结构。学习目标学习目标第三节 发光免疫分析仪返回目录返回目录 化学发光：化学发光：某些化学反应产生的能量能使其产物或中间某些化学反应产生的能量能使其产物或中间态分子激发，形成激发态分子，当其衰退至基态态分子激发，形成激发态分子，当其衰退至基态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光。这种现象称为化学发光。第三节 发光免疫分析仪返回目录返回目录类类 型型 常用常用标记标记物物 发发光光剂剂化学化学发发光免疫分析（光免疫分析（CLIA）吖啶酯吖啶酯 吖啶酯吖啶酯化学化学发发光光酶酶免疫分析（免疫分析（CLEIA）辣根辣根过过氧化物氧化物酶酶 鲁鲁米米诺诺微粒子化学微粒子化学发发光免疫分析（光免疫分析（ECIA）碱性磷酸）碱性磷酸酶酶 AMPPD电电化学化学发发光免疫分析（光免疫分析（ECLIA）三三联联吡吡啶钌啶钌 三三联联吡吡啶钌啶钌一、发光免疫分析概述表表7-1 发发光免疫分析的种光免疫分析的种类类返回目录返回目录(一一)全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统1 1工作原理工作原理 将某些化学基团标记在抗原或抗体上，这些化将某些化学基团标记在抗原或抗体上，这些化学基因被氧化后形成激发态，并在返回基态的同学基因被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子，光电倍增管将接收到的时发射一定波长的光子，光电倍增管将接收到的光能转变为电能，以数字形式反映光量度，再计光能转变为电能，以数字形式反映光量度，再计算测定物的浓度。算测定物的浓度。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录 吖啶酯标记吖啶酯标记CLIA反应原理反应原理二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(一一)全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统2.基本结构基本结构 （1）主机部分：）主机部分：原材料配备部原材料配备部液路部液路部机械传动部机械传动部光路检测部光路检测部 （2）微机系统）微机系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(一一)全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统3.仪器操作仪器操作 （1）开机、装载试剂）开机、装载试剂（2）定标）定标（3）标本检测）标本检测（4）维护保养）维护保养（5）关机）关机二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(二二)全自全自动动微粒子化学微粒子化学发发光免疫分析系光免疫分析系统统1.工作原理工作原理：应应用用经经典的免疫学原理，采用典的免疫学原理，采用单单克隆抗体克隆抗体试剂试剂，采用磁性微粒作，采用磁性微粒作为为固相固相载载体，以碱性磷酸体，以碱性磷酸酶酶作作为标记为标记物，物，发发光光剂剂采用采用AMPPD，固相，固相载载体的体的应应用用扩扩大了大了测测定的范定的范围围。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构碱性磷酸酶标记的碱性磷酸酶标记的ECIA反应原理反应原理返回目录返回目录(二二)全自全自动动微粒子化学微粒子化学发发光免疫分析系光免疫分析系统统2基本基本结结构构 传送舱传送舱 主探针系统主探针系统 分析系统分析系统 流体系统流体系统 电子系统电子系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(二二)全自全自动动微粒子化学微粒子化学发发光免疫分析系光免疫分析系统统 3.仪仪器使用器使用 开机、装开机、装载试剂载试剂 定定标标 标标本本检测检测 维护维护保养保养二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构UniCelUniCelDxI 800DxI 800返回目录返回目录（三）全自（三）全自动电动电化学化学发发光免疫分析光免疫分析仪仪1工作原理工作原理 将待将待测标测标本与包被抗体的本与包被抗体的顺顺磁性微粒和磁性微粒和发发光光剂标记剂标记的抗体的抗体加在反加在反应应杯中共同温育，形成磁性微珠包被抗体杯中共同温育，形成磁性微珠包被抗体-抗原抗原-发发光光剂剂标记标记抗体复合物。抗体复合物。当磁性微粒流当磁性微粒流经电经电极表面极表面时时，被安装在，被安装在电电极下的磁极下的磁铁铁吸引吸引住，而游离的住，而游离的发发光光剂标记剂标记抗体被冲洗走。抗体被冲洗走。同同时时在在电电极加极加电压电压，启，启动电动电化学化学发发光反光反应应，使，使发发光光试剂标试剂标记记物三物三氯联氯联吡吡啶钌啶钌Ru(bpy)32+TPA在在电电极表面极表面进进行行电电子子转转移，移，产产生生电电化学化学发发光。光的光。光的强强度与待度与待测测物的物的浓浓度成正比。度成正比。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(三三)全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构三氯联吡啶钌标记的三氯联吡啶钌标记的ECLIA反应原理反应原理返回目录返回目录(三三)全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪2 2仪器结构：仪器结构：试剂盒、温育反应盘、电化学检测试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算机控制系统系统及计算机控制系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录(三三)全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪 3.3.仪器操作步骤仪器操作步骤 开机、装载试剂开机、装载试剂 定标定标 标本检测标本检测 维护保养维护保养 关机关机二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录三、化学发光免疫分析仪的性能指标临床使用的发光免疫分析仪有很多种，它具临床使用的发光免疫分析仪有很多种，它具有检测速度快、精度好、重复性高、条码识有检测速度快、精度好、重复性高、条码识别系统、别系统、24小时待机、系统稳定等特点。小时待机、系统稳定等特点。市场上常见的三种全自动发光免疫分析仪的市场上常见的三种全自动发光免疫分析仪的性能特点见表性能特点见表7-2。返回目录返回目录四、发光免疫分析仪的临床应用 1甲状腺系统甲状腺系统 2性腺系统性腺系统 3血液系统血液系统 4肿瘤标记物肿瘤标记物 5心血管系统心血管系统 6血药浓度血药浓度 7感染性疾病感染性疾病返回目录返回目录第四节 放射免疫分析仪一、放射免疫技术概述一、放射免疫技术概述二、液体闪烁计数器基本原理二、液体闪烁计数器基本原理三、液体闪烁计数器的基本结构三、液体闪烁计数器的基本结构四、液体闪烁计数器的使用四、液体闪烁计数器的使用五、放射免疫分析仪的应用五、放射免疫分析仪的应用 本节要点本节要点返回目录返回目录 掌握掌握液体闪烁计数器的原理、结构液体闪烁计数器的原理、结构与使用与使用 熟悉放射免疫分析的基本原理熟悉放射免疫分析的基本原理 了解了解放射免疫分析仪的应用放射免疫分析仪的应用学习目标学习目标第四节 放射免疫分析仪返回目录返回目录 放射免疫技放射免疫技术术（radio immunoassay,RIA）是将放射性核素分析的高灵敏度与抗）是将放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反原抗体反应应的高特异性的高特异性结结合在一起，以放射合在一起，以放射性核素性核素为标为标志物的最早志物的最早应应用的用的标记标记免疫分析免疫分析技技术术。第四节 放射免疫分析仪返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（一）技（一）技术术原理：原理：RIA是在体外条件下，由非标记抗原（待是在体外条件下，由非标记抗原（待测物质）与定量的标记抗原对限量的特异性测物质）与定量的标记抗原对限量的特异性抗体（一抗）的竞争性抑制结合反应。抗体（一抗）的竞争性抑制结合反应。返回目录返回目录（一）技（一）技术术原理原理一、放射免疫技术概述（一抗）（一抗）返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（二）放射性活度（二）放射性活度测测定方法定方法 1.放射免疫分析常用标记物：放射免疫分析常用标记物：常用的标记物有常用的标记物有放射放射射线和射线和射线的核素两大类。射线的核素两大类。前者主要为前者主要为131I、125I、57Cr和和60Co；后者有后者有14C、3H和和32P。返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（二）放射性活度（二）放射性活度测测定方法定方法 2.放射性活度放射性活度测测定方法定方法 实际上就是进行放射性量测定的仪器。进行放射性量测定实际上就是进行放射性量测定的仪器。进行放射性量测定的仪器有两类。的仪器有两类。液体闪烁计数仪：用于检测液体闪烁计数仪：用于检测射线，如射线，如3H、32P、14C等等晶体闪烁计数仪：用于检测晶体闪烁计数仪：用于检测射线，如射线，如125I、131I、57Cr等等 返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（二）放射性活度（二）放射性活度测测定方法定方法 2.放射性活度放射性活度测测定方法定方法 液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪都是将射线（放射液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪都是将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能），电脉冲在单位时倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能），电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器记录的间内出现的次数（即仪器记录的cmp值）反映了发出射线值）反映了发出射线的频率，而电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高低。的频率，而电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高低。返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（三）放射免疫分析的优点（三）放射免疫分析的优点 1.1.灵敏度高灵敏度高 2.2.特异性强特异性强 3.3.应用范围广应用范围广 4.4.操作简便操作简便返回目录返回目录一、放射免疫技术概述（三）放射免疫分析的缺点（三）放射免疫分析的缺点1.1.方法的局限性方法的局限性 2.2.稳定性问题稳定性问题 3.3.灵敏度问题灵敏度问题4.4.测定结果中的问题测定结果中的问题 5.5.生物安全问题生物安全问题 返回目录返回目录二、液体闪烁计数器基本原理是依据射线与物质相互作用产生荧光效应是依据射线与物质相互作用产生荧光效应 首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子由回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子由激发态回到基态时，发出荧光光子。激发态回到基态时，发出荧光光子。荧光光子被光电倍增管（荧光光子被光电倍增管（PMPM）接收转换为光电子，）接收转换为光电子，再经倍增，在再经倍增，在PMPM阳极获得大量电子，形成脉冲信号，阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。处理，求出待测抗原含量。返回目录返回目录 液体闪烁计数器的结构和性能不断发展，目液体闪烁计数器的结构和性能不断发展，目前多采用双管快符合对称系统多独立道分析，与前多采用双管快符合对称系统多独立道分析，与微机联用，实现了高度的自动化。微机联用，实现了高度的自动化。1 1自动换样器自动换样器2 2基本电子学线路基本电子学线路3 3微机操作系统微机操作系统 三、液体闪烁计数器基本结构返回目录返回目录四、液体闪烁计数器的使用1 1样品样品-闪烁液反应体系建立闪烁液反应体系建立 样品和闪烁样品和闪烁液按一定比例装入测量瓶，向光电倍增管提液按一定比例装入测量瓶，向光电倍增管提供光信号。供光信号。（1 1）样品：根据样品的可溶性，进行不同的处理。）样品：根据样品的可溶性，进行不同的处理。（2 2）闪烁液：包括溶剂和溶质。）闪烁液：包括溶剂和溶质。（3 3）测量瓶：常用的测量瓶用低钾玻璃、聚乙烯等）测量瓶：常用的测量瓶用低钾玻璃、聚乙烯等材料制作。材料制作。返回目录返回目录2猝灭猝灭 样品、氧气、水及色素物质等加入闪烁体中，会使样品、氧气、水及色素物质等加入闪烁体中，会使闪烁体的荧光效率降低，出射荧光光谱改变，从而使闪烁体的荧光效率降低，出射荧光光谱改变，从而使整个测量装置的测量效率降低的过程称为猝灭。整个测量装置的测量效率降低的过程称为猝灭。为减小猝灭，可在闪烁液中通氮气或氩气驱氧；为减小猝灭，可在闪烁液中通氮气或氩气驱氧；将样品将样品pH值调至值调至7左右，避免酸的猝灭作用；左右，避免酸的猝灭作用；对卟啉、血红蛋白等着色样品进行脱色处理等。对卟啉、血红蛋白等着色样品进行脱色处理等。四、液体闪烁计数器的使用返回目录返回目录3 3计数效率测定计数效率测定 通常用于放射性的相对测量，即通过样品与通常用于放射性的相对测量，即通过样品与标准样品的计数率的比较来测定样品。标准样品的计数率的比较来测定样品。由于标准与待测样品的猝灭情况不同，就需由于标准与待测样品的猝灭情况不同，就需要对猝灭进行必要的校正来求出每个具体样要对猝灭进行必要的校正来求出每个具体样品相对于标准样品的实际计数效率。品相对于标准样品的实际计数效率。常用的校正法有内源法，外源法和道比法等常用的校正法有内源法，外源法和道比法等目前广泛使用的是外部标准源校正法。目前广泛使用的是外部标准源校正法。四、液体闪烁计数器的使用返回目录返回目录五、放射免疫分析仪的应用1.各种激素各种激素2.微量蛋白质微量蛋白质3.肿瘤标志物肿瘤标志物4.药物药物返回目录返回目录第五节 免疫比浊分析仪一、免疫比浊技术概述一、免疫比浊技术概述二、免疫比浊分析仪工作原理与基本结构二、免疫比浊分析仪工作原理与基本结构三、三、免疫比浊分析仪的保养免疫比浊分析仪的保养 四、免疫比浊分析的临床应用四、免疫比浊分析的临床应用 本节要点本节要点返回目录返回目录 掌握免疫比浊分析仪的种类及工作原理掌握免疫比浊分析仪的种类及工作原理 熟悉免疫比浊分析的分类、基本原理及熟悉免疫比浊分析的分类、基本原理及免疫比浊分析仪的临床应用免疫比浊分析仪的临床应用 了解免疫比浊分析仪的结构及保养了解免疫比浊分析仪的结构及保养学习目标学习目标第五节 免疫比浊分析仪返回目录返回目录 免疫比浊法（免疫比浊法（immunoturbidimetry）是）是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当有光线通过时，就会产生折射出现浊度。当有光线通过时，就会产生折射或吸收，测定这种折射和吸收后的透射光或或吸收，测定这种折射和吸收后的透射光或散射光，即可计算出样品的含量。散射光，即可计算出样品的含量。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（一）免疫比浊的分类（一）免疫比浊的分类 一、免疫比浊技术概述免疫散射比浊法免疫散射比浊法免疫胶乳浊度测定法免疫胶乳浊度测定法速率散射比浊法速率散射比浊法免疫透射浊度测定法免疫透射浊度测定法免疫透射比浊法免疫透射比浊法终点散射比浊法终点散射比浊法返回目录返回目录（二）免疫比浊技术的主要特点（二）免疫比浊技术的主要特点1.稳定性好，敏感性高稳定性好，敏感性高2.分析简便、快速分析简便、快速3.能更好地避免标本之间的污染和标本对人能更好地避免标本之间的污染和标本对人的污染的污染4.对同一份样品可同时测定多种检测项目，对同一份样品可同时测定多种检测项目，标本用量少，具有明显的应用优势。标本用量少，具有明显的应用优势。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理 1免疫透射比浊度测定免疫透射比浊度测定免疫比浊法测定的光路示意图免疫比浊法测定的光路示意图一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理1.免疫透射比浊度测定免疫透射比浊度测定 抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原增加而增加，反体过剩时，形成的复合物随抗原增加而增加，反应液的浊度亦随之增加而导致透射光的减少。应液的浊度亦随之增加而导致透射光的减少。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理2.免疫散射比浊测定免疫散射比浊测定 定时散射比浊法定时散射比浊法 散射免疫比浊散射免疫比浊 速率散射比浊法速率散射比浊法一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理2.免疫散射比浊测定免疫散射比浊测定 （1）定时定时散射比浊法散射比浊法 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，避开抗原抗体反应的不稳定阶段，在况下，避开抗原抗体反应的不稳定阶段，在免疫反应的最佳时段某一固定时间点测量其免疫反应的最佳时段某一固定时间点测量其浊度，通常是在反应浊度，通常是在反应6分钟内选择一固定时分钟内选择一固定时间点检测散射光信号。间点检测散射光信号。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理（2）速率散射比浊法速率散射比浊法 是一种先进的动力学测定法。是一种先进的动力学测定法。速率是指抗原速率是指抗原-抗体结合反应过程中，在单位时抗体结合反应过程中，在单位时间内两者结合的速度。间内两者结合的速度。速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段的散射信号值。成的最快时间段的散射信号值。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（三）（三）免疫比浊技术的基本原理免疫比浊技术的基本原理 3免疫胶乳比浊免疫胶乳比浊 选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则发生凝集。吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则发生凝集。抗原抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与胶抗原抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与胶乳凝聚程度成正比，与待测抗原浓度呈正相关。乳凝聚程度成正比，与待测抗原浓度呈正相关。采用透射比浊法或散射比浊法测定。采用透射比浊法或散射比浊法测定。一、免疫比浊技术概述返回目录返回目录（一一）ARRAY特种蛋白分析测定系统特种蛋白分析测定系统 1.工作原理工作原理 在抗体过量的前提下，悬浮于缓冲液中的在抗体过量的前提下，悬浮于缓冲液中的抗原抗原-抗体免疫复合物颗粒通过光束时产生的抗体免疫复合物颗粒通过光束时产生的散射光速率变化，散射测浊仪检测出该信号散射光速率变化，散射测浊仪检测出该信号的强弱与抗原浓度成正比，速率峰值经微电的强弱与抗原浓度成正比，速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度。脑处理转换成抗原浓度。二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构返回目录返回目录（一一）ARRAY特种蛋白分析测定系统特种蛋白分析测定系统 2.基本结