药物的含量测定方法.ppt

药物的含量测定药物的含量测定定定义义第四章第四章 药物的含量测定方法药物的含量测定方法 化学分析法 重量分析容量分析含量测定含量测定仪器分析法仪器分析法效价测定效价测定（生物学法）（生物学法）可见紫外分光高效液相色谱法气相色谱法药物的含量测定药物的含量测定三种三种分析分析方法方法特点特点特点特点特点特点第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点容量分析法容量分析法定定义义亦称亦称滴定法滴定法特点特点第一节第一节 定量分析方法定量分析方法容量分析法有容量分析法有关计算关计算例例:用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C的含量的含量时，时，中国药典中国药典规定：每规定：每1ml碘碘滴定液（滴定液（0.05mol/L）相当于）相当于8.806mg的维生素的维生素C（C2H8O6）T(T(滴定度滴定度):1ml):1ml滴定液滴定液(m mol/L)(m mol/L)相当于被测药物的毫克数相当于被测药物的毫克数被测药物被测药物 滴定液滴定液药物分药物分子量子量滴定液滴定液浓度浓度滴定度的滴定度的计算计算示例一 计算VitC的滴定度T碘量法测定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/Lm=0.05mol/L11M=176.13示例二 异烟肼的滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸钾溴酸钾=0.01667mol/Lab滴定含量计算滴定含量计算W测测=N F T V取用取用倍数倍数浓度校浓度校正因数正因数滴定滴定度度消耗消耗体积体积例例:VitC的含量测定的含量测定:精密称取本品精密称取本品0.1332g,置锥形置锥形瓶中瓶中,加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液(1:10)110ml,加淀粉批示液加淀粉批示液1ml,用碘滴定液用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至蓝色滴定至蓝色,用去用去15.02ml,每每1ml的的碘液碘液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg C6H8O6，计算本计算本品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含C6H8O6 不得低于不得低于99.0%。浓度校浓度校正因数正因数滴定滴定度度消耗消耗体积体积F=实际实际C规定规定C计算步骤计算步骤W测测=N F T V0.05014 0.058.80610-315.02=0.13263(g)VitC的百分含量的百分含量(%)VitC%=W测 W样0.13263 0.1332=99.57%=10.1332样品中样品中VitC含量含量(W测测)又例 非那西丁含量测定 精密称取本品精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流加稀盐酸回流1小时后，放冷，小时后，放冷，用亚硝酸钠滴定液用亚硝酸钠滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每。每1ml1ml亚硝酸钠液亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于相当于17.92mg的的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。，请计算非那西丁的含量。需做空白试验的计算公式W测测=N F T（V-V0）例例:萘普生的含量测定：精密称取本品萘普生的含量测定：精密称取本品0.4960g，加甲醇，加甲醇45ml溶解后，再加水溶解后，再加水15ml与酚酞指示剂与酚酞指示剂3滴，用滴，用NaOH滴滴定液（定液（0.1078mol/L）滴定，同时用空白试验校正，求萘）滴定，同时用空白试验校正，求萘普生百分含量。普生百分含量。中国药典中国药典规定每规定每1ml NaOH滴定液滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于23.03mgC14H14O3。按干燥品计算，。按干燥品计算，含含C14H14O3不得少于不得少于98.5%。滴结果如下：。滴结果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重，干燥失重=0.40%。光谱分析法光谱分析法药典药典收载收载二、光谱分析法二、光谱分析法(少用少用)含量含量%=1%1cmE1%1cmE（）供供（）标标药典药典记载记载例例 已知已知VitB12在在361nm处的百分吸收系数为处的百分吸收系数为207，现测得其水溶液的吸收度为，现测得其水溶液的吸收度为0.414，吸收，吸收池厚度为池厚度为1cm，求其浓度。，求其浓度。解：解：C=A L1%1cmE=0.00200()0.4142071g/100ml单位单位?例例精密称取精密称取VitB12供试品供试品25.0mg，加水溶解并稀释，加水溶解并稀释制成制成1000mL，于，于1cm厚的吸收池中，在厚的吸收池中，在361nm处测处测得吸收度为得吸收度为0.507，已知其百分吸收系数为，已知其百分吸收系数为207，求其，求其百分含量。百分含量。解：解：C=m/V=2510-3/1000（g/ml）=（g/100ml）2.510-3 1%1cmE()供供=A/CLVitB12%=1%1cmE1%1cmE（）供供（）标标=202.8/207=97.97%=0.507/(2.510-31)用用A算出（算出（）供供，再用其与已知（，再用其与已知（）标标 比值比值 1%1cmE1%1cmE=202.8例例用用UV法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品0.0410g，置，置250ml量瓶中，加量瓶中，加0.4%NaOH溶液溶液50ml,溶解后溶解后,加水于刻度加水于刻度,摇匀。精密量取摇匀。精密量取5ml,置置100ml量瓶量瓶中中,加加0.4%NaOH溶液溶液10ml,溶解后溶解后,加水至刻度加水至刻度,摇匀。摇匀。在在257nm处测得吸收度为处测得吸收度为0.580，按其百分吸收系数，按其百分吸收系数715计算，求其百分含量。计算，求其百分含量。解：解：C=m/V=（g/100ml）8.210-4 1%1cmE()供供=A/CLVitB12%=1%1cmE1%1cmE（）供供（）标标=707.3/715=98.93%=0.580/8.210-4=707.3特点：灵敏度高，可达10-1010-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定(二二)荧光分析法荧光分析法(三三)色谱分析法色谱分析法1.HPLC1.1 内标法 As：内标物质峰面积或者峰高AR:对照品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度CR：对照品浓度两步两步:(1)测测f;(2)测含量测含量(1)测测f(用标准品与内标物用标准品与内标物)As：内标物质峰面积或者峰高Ax:供试品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度f：校正因子(2)测含量测含量(用样品与内标物用样品与内标物)示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法照高效液相色谱法(附录附录DD测定测定)色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇合硅胶为填充剂；以甲醇-水水(65:35)(65:35)为流动相，为流动相，检测波长为检测波长为244nm244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于不低于15001500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。合要求。内标溶液的制备内标溶液的制备 取黄体酮约取黄体酮约25mg25mg，精密称定，精密称定，置置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。测定法测定法 取本品约取本品约25mg25mg，精密称定，置，精密称定，置25ml25ml量瓶中，量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液液2ml2ml与内标溶液与内标溶液3ml3ml，置，置10ml10ml量瓶中，加甲醇稀量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取释至刻度，摇匀，取2020l l注入液相色谱仪，记录注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。即得。例例HPLC法测定磺胺嘧啶的含量法测定磺胺嘧啶的含量对照品对照品+内标溶液配制：精密称取对照品内标溶液配制：精密称取对照品50.0mg，置，置50ml量瓶量瓶中，加甲醇稀释至刻度中，加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取摇匀。精密量取5ml,置置25ml量瓶中量瓶中,精密精密加内标溶液加内标溶液(0.20mg/ml)5ml,加流动相至刻度加流动相至刻度,摇匀。摇匀。供试品供试品+内标溶液配制：精密称取本品内标溶液配制：精密称取本品50.5mg，照上法配制。，照上法配制。取上述两种溶液各取上述两种溶液各10l进样，测得对照品和内标峰分别为进样，测得对照品和内标峰分别为1350和和1040，供试品峰和内标峰分别为，供试品峰和内标峰分别为1313和和1013。求。求SD的含量。的含量。解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代替浓度计算替浓度计算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之解之,得得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%2.外标法外标法(二二)GC内标法内标法第二节 定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法第二节 定量分析样品的前处理方法(一一)、直接测定法、直接测定法 葡萄糖酸钙葡萄糖酸钙 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富马酸亚铁富马酸亚铁 邻二氮菲邻二氮菲-硫酸铈滴定硫酸铈滴定 葡萄酸锑钠葡萄酸锑钠 间接碘量法间接碘量法(二二)、经水解后测定法、经水解后测定法适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。第二节 定量分析样品的前处理方法1 1、碱水解法、碱水解法三氯叔丁醇银量法返滴定2 2、酸水解法、酸水解法适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。EDTA配位滴定第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法(三三)、经还原分解后测定法、经还原分解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。泛影酸泛影酸3NaI3NaI第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结测定含有氨基和酰胺结构的药物结构构的药物结构(一一)湿法破坏湿法破坏第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法原 理 将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被中有机结构被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有机结合的氮转，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度提高消解温度)CuSO4(加快消解速度加快消解速度)硫酸硫酸碱液碱液硼酸硼酸(吸收液吸收液)甲基红甲基红-溴甲酚绿指示剂溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强先用强酸水解酸水解再用含碱硫代硫再用含碱硫代硫酸钠中和酸钠中和最后用碱释放出氨最后用碱释放出氨气气，并蒸馏出之，并蒸馏出之(二二)干法破坏干法破坏1.高温灼烧法高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为解为COCO2 2和和H H2 2O O，待测元素根据电负性的不同转化为不同，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。质和存在方式选择方法进行分析。第二节第二节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法燃烧时待测物转化成不同价态燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定的无机物以供测定 滤纸包滤纸包装样品装样品第三节 药品分析方法的验证药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释、控释制剂指导原则微囊、微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标：评价分析方法的尺度评价分析方法的尺度 效能指标包括:精密度精密度,准确度准确度,检测限检测限,定量限定量限,选择性选择性,线性与线性与范围范围,耐用性耐用性第三节 药品分析方法的验证一、准确度（一、准确度（accuracy）系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。(一一)含量测定方法含量测定方法回收率(Recovery)回收试验加样回收试验33，至少9个测定结果第三节 药品分析方法的验证二、精密度二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s),、相对标准偏差(RSD)重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性:不同实验室，不同人测定的精密度第三节 药品分析方法的验证三、专属性三、专属性(Specificity)v 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。目视法信噪比法 S/N=3四、检测限四、检测限(Limit of Detection,LOD)药物能被检出的最低浓度(g/ml)五、定量限五、定量限(Limit of Quantitation,LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(g/ml)信噪比法 S/N=10第三节 药品分析方法的验证影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等六、线性与范围六、线性与范围(Linearity And Range)v待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。Y=a+bx （r=0.9999)七、耐用性七、耐用性(Robustness)测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度第三节 药品分析方法的验证已有重现性验证，不需验证中间精密度如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充视具体情况予以验证第三节 药品分析方法的验证各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法 用原料药精制品用原料药精制品(含量含量 99.5%)或对照品考察方法的或对照品考察方法的精密度，精密度，RSD 0.2%；回收率一般在；回收率一般在99.7100.3%之间之间。2.UV法 用适当浓度的精制品进行测定，其用适当浓度的精制品进行测定，其RSD1%。制剂。制剂的测定，回收率一般应在的测定，回收率一般应在98102之间之间。3.HPLC法 要求要求RSD2，回收率回收率98102%之间之间。