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动物学复习总结(全部).doc
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. 绪论 实验动物科学 1、实验动物科学包含的内容 分为两个领域1、实验动物学〔实验动物〕 2、比拟医学〔动物实验〕 包括 1个研究〔通过人工培育或人工改造等研究〕3个控制〔对动物携带的微生物及其遗传、营养、环境等因素实行控制; 使实现动物的来源清楚,遗传背景明确; 为科学研究、教学、药品和生物制品的生产及其质量检定,以及其他科学实验提供专用的标准化实验动物。〕 内容包括:1、实验动物遗传育种学2、实验动物医学 3、比拟医学 4、实验动物环境生态学 5、动物实验技术 2、实验用动物的分类 ①经济动物 ② 野生动物 ③ 欣赏动物 ④ 实验动物 3、实验动物的定义 指经过人工培育和改造,对其携带的微生物、遗传及营养、环境因子实行控制,来源清楚,遗传背景明确;为满足科学研究,教学,药品,生物制品的生产及检定,及其他科学实验的需要而驯养,繁殖,育成的动物。 4、我国第一部实验动物法规,1988年?实验动物管理条例? 卫生部2项法规?医学实验动物管理实施细那么? ?医学实验动物标准? 第二章 遗传学质量控制 1. 实验动物的遗传学分类 ①原生动物门②海绵动物门③腔肠动物门④扁形动物门⑤线性动物门⑥环节动物门⑦软体动物门⑧节肢动物门⑨棘皮动物门⑩原索动物门 11 脊椎动物门 2.近交系动物 (1)近交系动物的定义 〔3点〕 经连续20代以上的全同胞兄妹或亲子交配培育而成,同品系内所有个体都可追溯到起源于20代或以后的一对共同祖先的遗传群体,近交系数达98.6%,该品系称为近交系。 (2)近交系动物的命名 一般以大写英文字母命名,亦可以用大写英文字母加阿拉伯数字命名,阿拉伯数字与英文字母等高,符号应尽量简短。C3H BALB/c (3)近交系动物的遗传学特性 ①基因纯和性②同基因性③表现型的均一性④遗传稳定性⑤个体性⑥分布广泛性 ⑦背景资料和数据比拟完整⑧可分辨性 (4)近亲交配的弊端 意义:①实验动物获得遗传均一性的典型方法。②使用较少的近交系动物,即可到达统计学要求的精密度 ③ 同一近交系的全部动物,在遗传上相同,从而减少了表现型的变异④在个体之间能相互接受皮肤和肿瘤移植 弊端:①在固定基因时,有害的隐性基因也会纯合,出现不利的性状而造成育种失败②近交还可能导致多基因之间丧失平衡,从而使高度纯化的动物对不良环境的调节适应能力降低 ③ 近交使动物失去为保持足够生物适合度所必需的最低水平的基因杂合性,从而影响动物生长率,寿命,对疾病的感受性,生活力,体力及繁殖能力。 〔5〕近交系数 Fn=1-(1-△F)n n:d代数 △F 每一代近交系数的上升率,连续合同胞的兄弟妹交配,每代 △F=19% 〔举例:近交系数F20=1-〔1-0.19〕20= 3.封闭群动物 1.封闭群动物的定义 以非近交交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群,在不从其外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上,称为一个封闭群,或叫远交群。 2.封闭群动物的命名 封闭群由2~4个大写英文字母命名,种群名称前标明保持者的英文缩写名称,第一个字母须大写,后面的字母小写,一般不超过4个字母。保持者与种群名字之间用冒号分开。 Ssmu:KM 3.封闭群动物的遗传学特性 ①基因库大,杂合率高 ②群体基因频率根本保持稳定 ③ 在封闭群体内,个体间差异程度主要取决于其祖代起源 ④封闭群动物每代近交系数上升率必须低于1%。〔随机交配时,至少200对〕 4.实验动物遗传学质量控制 严格的繁育制度和遗传学质量检测 1.遗传学质量检测的“四E〞原那么 四E原那么:准确 exact、简便 easy、有效 efficient、经济 economic 2.遗传学质量检测的方法: • 生化标志基因位点测定—— 鉴定某个品系或个体的根本方法 • 皮肤移植 同品系的个体间能互相接受皮肤移植(对淘气肤,旋转180度) 常用尾部皮肤移植法,植皮后至少观察100天,只有在100天以上植皮双方均不发生排斥,才能正式待测小鼠或大鼠的遗传纯和性。在对品系检测时,假设急性排斥占手术例数30%,须重新考虑采样,以确认是技术性还是其他原因造成的结果。 ①两块皮肤同时长好,可能无遗传污染。 ②两块皮肤均脱落,手术失败。 ③两块皮肤,自体移植的正常生长,异体移植的排异脱落,说明一定发生了遗传污染。 • 下颌骨形态学分析 下颌骨的形态是高度遗传的性状,由多态性位点确定。 • 毛色基因交配试验 A-B-C 野生色 A-bb-C 桂皮色 aaB-C 黑色 aabbC 棕色 ----cc 白化 通常将待测小鼠雌鼠与有所谓基因结构的DBA/2〔aabbCC棕色〕雄鼠杂交 ,根据F1的毛色确定待测小鼠主要毛色基因,检定是否纯和。如待测小鼠A、B位点是纯和的,那么杂交F1的毛色只出现一种颜色。 第三章 微生物和寄生虫学质量控制 1.实验动物的微生物学和寄生虫学分类 普通动物(CV)的概念 普通动物须不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体;通常饲养在开放环境里的动物。 清洁动物〔CL〕的概念 此类动物必须是不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体;又不携带对动物危害大和对科学研究影响大的病原体。通常饲养在屏障环境。 无特定病原体动物〔SPF〕的概念 不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体;又不携带对动物危害大和对科学研究影响大的病原体;还不携带主要潜在感染或条件致病菌和对科学实验影响大的病原体的动物。通常饲养在屏障环境。 无菌动物〔GF〕与悉生动物(GN) 的概念 无菌动物:指动物体内外无可检出的一切生命体的动物。此种动物在自然界中并不存在,必须用人为的方法培育出来。通常饲养在封闭环境。 悉生动物:指动物体内外携带的生命体是的。此种动物原是无菌动物,系人为的将指定微生物丛定居其体内外。 2.CV 普通动物中的弓形虫污染,必须排除。 动物易感染流行性仙台病〔毒〕和小鼠肝炎病〔毒〕,必须排除。 动物易感染绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌,必须排除。 第四章 环境对动物实验的影响 1.实验动物的环境因素组成。 〔1〕物理因素:温度、湿度、气流〔包括换气次数和压强梯度〕、光照、噪声和空气洁净度。 〔2〕化学因素:营养〔饲料、饮水〕、空气质地〔氨浓度〕、消毒剂、杀虫剂。 〔3〕生物因素:同种生物间、异种生物间的影响。 〔4〕居住因素:建筑设备、笼具、饲养设备、供食器、供水器等 2.物理因素7项、空气质地〔氨浓度〕的根本含义〔照度,空气洁净度〕和国标要求。 实验动物设施环境指标〔温度〕 (1) 物理因素:温度、湿度、换气次数、气流速度、压强梯度、噪声、光照和空气洁净度。 (2) 空气质地〔有害气体〕:主要来源:动物粪、尿对室内空气的污染。特征指标:氨浓度〔NH3〕,我国对有害气体的控制标准和检测工程均以氨浓度为主。 (3) 照度和照度单位:勒克司〔LX〕---离1国际烛光光源1米远直角面的照度为1LX。 (4) 空气洁净度是衡量空气中尘埃颗粒浓度的计量单位。 空气洁净度计量单位—级:每立方英尺空气中含有大于等于0.5微米尘埃粒子数〔Φ≧μ尘埃粒子数/ft3〕。国际单位:Φ≧μ尘埃粒子数/升; 1 ft3 = 级〔Φ≧μ个/ft3〕= 个/升 × 大鼠对湿度要求很高,在空气相对湿度低于40%时易患环尾症。〔尾巴出现圆形环尾纹,初期呈现水肿,出血,皮肤坏死及脱皮,严重者尾根及尾巴成干性坏疽病变,留下永久性环行。〕 3居住因素: 1、 主要设施的类型、根本操作要求,相应的微生物和寄生虫级别动物。 a.按环境净化控制程度分类: 1.开放环境 〔Open System〕:室内正压,保持温度,空气洁净度不作要求。〔一般室内配备独立空调,用以调节温度,并设有进气风扇和排气风扇,要求室内保持正压〔进气量>排气量〕。一般没有空气过滤、净化装置,对操作实验人员、物品、气流等也不作单向流程要求。〕可饲养普通级动物或进行普通级动物实验。 2.屏障环境〔Barrier System〕:空气洁净度10000级。恒温。空气通过调节形成清洁走廊、动物实验室、污染走廊和外界的空气压强梯度差〔≥20帕〕。〔屏障环境设施内动物生活环境受气候影响较小,设施内外空气由专门通道送入和排出。屏障环境空气实施过滤净化,送入内部区域的空气洁净度要求到达10000级。恒温处理后的空气通过调节形成清洁走廊、动物实验室、污染走廊和外界的空气压强梯度差〔≥20帕〕。操作人员穿戴灭菌衣帽鞋和手套、口罩,并遵循单向流程进、出。饲料、垫料、笼器具等动物生产和实验所需物品必须进行灭菌。有条件的地方实行电脑监控。〕在屏障环境设施内可以进行SPF级或清洁级动物饲养和实验。 3.隔离环境〔Isolation System〕:空气经过超高效过滤〔滤过率达99.97%〕,静态空气洁净度为100级。恒温恒湿。正压〔100-150帕〕。〔隔离环境动物实验设施是在普通环境下利用专用动物实验隔离器〔Isolator〕进行动物饲养和动物实验。隔离器内送入和排出的空气都经过超高效过滤〔到达99.97%滤过率〕,静态空气洁净度为100级。操作人员通过透明薄膜或有机玻璃进行观察,通过附设在隔离器上的手套进行实验和饲养操作。物品经过严密包装、高压灭菌传入,而温湿度需要室内空调或中央空调控制调节。〕 b.按设施用途和主要功能分类:实验动物生成设施,动物实验设施,特殊动物实验设施。 2、屏障环境操作要求〔人员、物品、气流等〕 → 人员走向 … 物品走向 “箭头指向不可逆行〞 n 人员移动路线(双走廊或三走廊式) 脱衣〔更衣室1〕→穿衣〔更衣室2〕→淋浴→风淋→清洁走廊→饲养室或动物实验室→污染走廊→更衣→外部区域 n 物品的移动路线(双走廊或三走廊式) 物品→高压蒸汽灭菌器—→ →传递窗 —→清洁走廊→动物实验室→污染走廊→外部区域 →渡槽 —→ n 动物的移动路线(双走廊或三走廊式) 外来动物→传递窗→检疫室或健康动物 观察室→清洁走廊→动物实验室→污染走廊→外部区域 n 空气的流动路线(双走廊或三走廊式) 清洁走廊→动物实验室→污染走廊→外部区域〔压力依次递减20Pa〕 4 .居住因素: 主要设备的结构、工作原理和环境控制原理〔屏障设施中的一般饲养设备、层流架、IVC、隔离器〕、根本操作要求,相应的微生物和寄生虫级别动物。 (1) 不锈钢平板架+塑料饲育盒:用途:啮齿类动物实验观察。对环境要求:安放在屏障系统内,可到达清洁级标准。 (2) 不锈钢兔笼+托盘:用途:兔子、豚鼠等动物实验观察。对环境要求:安放在屏障系统内,可到达清洁级标准。 (3) 自动水冲式不锈钢兔笼架:用途:兔子、豚鼠等动物实验观察。对环境要求:安放在开放环境内,可到达普通级标准。 (4) 消化笼、代谢笼:动物实验中定量收集粪尿。 (5) 洁净层流柜〔Laminar Air Flow Rack,层流架〕:层流架可看作是一个小型屏障系统,是一种动物实验饲育的专用设备。层流架通过连续送入高效过滤空气,在动物饲养层内及玻璃移门前相应范围形成20帕以上的正压,为实验动物提供并保持了平安、洁净、舒适的清洁级或SPF级生活环境,尤其适合进行各种啮齿类动物实验。 结构:层流架主要由送风机、空气过滤系统、动物饲养层和控制指示系统等局部组成。一般层流架设有操作层,双体层流架还配有操作台和物品储藏室。 工作原理:以36型层流架为例:室内恒温空气由送风机从进风口吸入,经初效过滤膜、中效过滤袋、高效过滤器三级过滤,洁净空气进入静压仓,再送入各个动物饲养层;废气通过回风槽聚集后,经位于顶端的排风口集中排出室外。层流架的风量、风速和换气次数可以通过控制面板上的调速器进行调节。 根本操作要求:☆有关动物饲养和动物实验的操作都应在层流架操作层或配套超净工作台内行。 ☆ 饲养和实验所需的物品如笼具、饮水瓶、实验器械等必须进行灭菌处理。 ☆饲料可选用小包装真空Co60辐照灭菌料。 〔6〕 独立通气笼盒系统〔Individually Ventilated Cages,简称IVC〕: ☆ IVC是一种新型的动物饲育和动物实验设备。 ☆ IVC主要由笼盒、笼架和控制机箱等三局部组成。 ☆动物饲养和动物实验操作在配套设备----超净工作台中进行。 〔7〕 无菌隔离器:是一个相对封闭的环境,内部保持正压100-150帕斯卡,静态环境隔离器室内空气洁净度到达100级。隔离器只需放置于一般干净室内,对环境要求相对低。室内空气经超高效滤过,由送风机送入隔离器室。动物饲养和根本实验操作通过附着于隔离器上的手套进行。 微生物级别 饲育环境要求 普通动物 开放环境 清洁动物 屏障环境、层流架、IVC 无特定病原体动物 屏障环境、层流架、IVC 无菌动物及悉生动物 隔离环境〔隔离器〕 5.生物因素: 〔1〕同种生物---掌握群内地位分类; A.群内地位:直线型---即地位上下呈一、二、三……单个直线排列,如猴、兔、犬和猪;专制型---即经过争夺,产生一个首领,其余动物地位根本不分上下,如猫、鼠。 B.性别影响:雄性成年动物好斗,撕咬打斗等。用成年雄性动物做实验,陌生动物个体在一起往往会引起斗殴,尤以犬、猴、小鼠中的津白1号多见,有条件应当单个饲养。室〔笼、盒〕内饲养动物过多,会造成局部温度过高,有害气体浓度增加并积聚不散,动物容易患病死亡,并导致打斗、撕咬。在有条件的情况下,动物实验以单只盒〔笼〕养为好,尤其是大动物、肿瘤接种动物和成年雄性动物。 〔2〕动物性别和饲养密度对实验的影响。 饲养密度不同,会使动物的实验反响产生差异,传染病的发生率随饲养密度的增加而上升。局部温度过高,废气多,潮湿,饲料缺乏,易打斗。书P56 表4-5 第 五 章 饲料营养对实验动物的影响 1. 动物的营养和食性; 营养----动物从外界摄取自身所需要的食物,经消化、吸收,用来维持生命活动的行为或作用。 食性-----因消化器官结构和生理功能上的差异,动物对选择食物的不同习性。 标准化饲料-----根据不同动物的营养需求和动物的食性,经人工配合、加工而成的营养全面、适口性好、符合微生物要求的饲料。 2. 掌握实验动物饲料概略养分的组成。 饲料分为:有机饲料:蛋白质、脂肪、碳水化合物〔无氮浸出物、粗纤维〕、维生素。 无机饲料:水分、灰分〔无机盐〕。 3. 熟悉草食、杂食、肉食动物对某些营养成分的需求量的区别。 脂肪、蛋白质:草食动物<杂食动物<肉食动物 粗纤维:草食动物>杂食动物>肉食动物 4.了解各类动物常规营养要求,掌握各种动物对营养的特殊要求。 特殊营养要求: 大小鼠 ☆大鼠和小鼠对营养需要大致相同。 ☆粗蛋白质要求在20%以上,消化能15910KJ/kg。 ☆为提高繁育母鼠的受孕率,饲料中应有足够的维生素E。 ☆大小鼠自身能够合成维生素C,无须在饲料中特意添加。 豚 鼠 ☆属草食动物,怀孕期长,成熟较晚。饲料粗蛋白含量要求20%左右。 ☆由于盲肠兴旺,能有效地消化利用粗纤维,饲料粗纤维在16%左右。 ☆豚鼠体内不能合成维生素C,必须在饲料中添加。 兔 子 ☆亦属草食动物。兔饲料中粗纤维含量不低于15%,粗蛋白质比例也在15%左右。 ☆一般兔饲料中参加一定量的干草,以提高粗纤维百分比,这对防止兔腹泻这种常见病是至关重要的。 ☆兔子有“食粪癖〞。 犬 ☆属于肉食动物,饲料中粗蛋白含量要求到达25-30%,而粗纤维相比照例低一些。 ☆犬对维生素A、D、B1、B2需要量较大。 猴 ☆属于非人灵长类,食性与人相近,对营养要求比拟高。 ☆一般以面粉、豆粉、玉米粉、鸡蛋、食盐等制成饼干作为主食。 ☆猴饲料中粗蛋白质含量占24-26%左右。猴对维生素C特别敏感,如果缺乏可造成牙龈出血,精神萎靡,长期缺乏或缺乏会导致死亡。 ☆每天定量供应新鲜水果和蔬菜,或在主食中参加维生素添加剂,可以防止猴维生素缺乏症的产生。 5.实验动物的饮水要求〔一般要求、灭菌要求、酸化要求〕。 • 水质要求:城市饮用水三级标准 • 净化处理:过滤;净水 • 酸化处理:用盐酸将饮水pH调整到,抑制细菌的生长 • 灭菌处理:普通级动物可直接给饮自来水,清洁级以上实验动物将自来水瓶装后,进行灭菌处理。 6.掌握物品〔饲料、饮水等〕主要灭菌方法。 • 消毒----主要用化学方法在一般环境中抑制或杀死微生物 • 灭菌----在特殊包装的条件下,彻底杀灭微生物 〔1〕高温高压蒸气灭菌:最经典、可靠 A. 预真空灭菌〔俗称“干消毒〞〕:131℃ 4min;适合于饲料、笼具、手术器械等; B.一般高压灭菌〔俗称“湿消毒〞〕:120℃ 20min左右;饮水一般多采用这种方法。 〔2〕辐射灭菌 ☆俗称“冷消毒〞。 ☆饲料预先分成定量小包装〔一般每包2kg〕,密封、抽真空,然后用一定剂量的Co60照射。由于射线穿透力强、灭菌效果好,饲料中营养成分保持完好。动物实验首选这种小包装辐照料,使用方便,储藏时间也相对要长一些。 〔3〕微波灭菌:采用专用工业微波炉,小规模也可以使用家用微波炉进行饲料灭菌。磁控管发生高频微波〔108-11 /秒〕,微波具有对金属固体产生反射、对非金属固体产生穿透、对液体产生吸收作用。饲料含有8-10%水分,吸收微波后水分子产生高频震荡,在产热的同时到达了灭菌作用。 〔4〕干烤:在80-100℃下烘烤2-3小时。干烤方法简单,但时间较长,容易造成饲料变色、焦黄,并使营养成分受到破坏。 〔5〕环氧乙烷灭菌:方法简单,可能污染环境。 第六章 人类疾病动物模型 1.人类疾病动物模型的定义。 人类疾病动物模型(Animal models of human diseases)是指在医学研究中,在动物身上建立,或形成类似人类疾病动物。通过动物模型直接,或间接反映疾病的发生和开展过程,在了解疾病的根底上开创和改良、优化疾病的治疗。 2.医学动物模型根本分类。 〔1〕诱发性动物疾病模型(Experimental animal model) 是指以物理学、化学、生物学等致病手段,人为导致动物组织、器官或整体成为人类疾病动物模型;使其在功能、代谢、形态结构等方面发生改变,即人为地诱发动物产生类似人类疾病模型。 〔2〕自发性动物模型(Spontaneous animal model) 是指不加任何人工诱发,在自然条件下动物自然产生的疾病,或者由于基因突变的异常表现,通过遗传育种保存下来的动物疾病模型。其中包括近交系的肿瘤疾病模型和突变系的遗传性疾病模型。 〔3〕抗疾病型动物模型(Negative animal model) 是指特定的疾病不会在某种动物身上发生。因此,可借以探讨何种动物对该疾病有天然的抵抗力。 〔4〕生物医学动物模型(Biomedical animal model) 是指以动物生物学特征提供人类疾病相似表现的疾病模型。 3.使用人类疾病动物模型意义。 (1)防止直接实验所造成危险。 (2)临床上平时不易见的疾病可以随时复制。 (3)增加方法学上的可比性。 (4)样品易得,实验方法简化。 (5)有助于了解疾病的本质。 4.了解常用的模型动物(SHR、WKY)。 高血压模型〔SHR大鼠〕:该鼠自发性高血压的变化与人类相似,并且可产生脑血栓、堵塞、出血、肾硬化、心肌梗死和纤维化等变化。在SHR的根底上,又培育了两个亚系SHRSP和SHRSR,前者出生后,除出现严重高血压外,90%以上患脑卒中(脑出血和脑栓塞);SHRSR那么是抗脑卒中的自发性高血压大鼠。 SHR:自发性高血压大鼠〔是近交系〕 SHRSP:高卒中自发性高血压大鼠 SHRSR:抗卒中自发性高血压大鼠 WKY (wistar-Kyoto,)与自发性高血压大鼠相匹配的同源正常血压大鼠 5.免疫缺陷动物的定义 免疫缺陷动物是指由于先天性遗传突变,或用人工方法,培育一种或多种免疫功能缺陷的动物。 6.熟悉常见的免疫缺陷动物、基因符号 按免疫功能缺陷的种类常分为: (1)T-淋巴细胞功能缺陷动物:裸小鼠、裸大鼠、裸豚鼠等。裸基因:nu (2)B-淋巴细胞功能缺陷动物:CBA/N小鼠、Arabin马和Quarter马等马属动物。 (3)NK细胞功能缺陷动物:Beige小鼠。 (4)联合免疫缺陷动物:Scid小鼠〔T、B淋巴细胞功能双缺陷〕等其他人工定向培育的多种免疫功能缺陷动物。 裸小鼠:常见的有BALB/c-nu、C3H-nu、C57BL/6-nu等。 裸大鼠:-Rnn 雌不孕 Beige〔bg〕小鼠:纯合子的亲本,雌可孕 SCID小鼠:16号染色体上,单突变基因,突变符合为scid Motheaten小鼠:突变基因位于第6号染色体 人工定向培育的多联免疫缺陷型小鼠:NK细胞缺陷的Beige基因、T细胞缺陷的nu基因和B细胞缺陷的Xid基因 7.掌握裸小鼠根本生物学特征 裸小鼠:是指先天性无胸腺,且无被毛的小鼠,简称为裸小鼠。其突变基因为裸基因,符号为:nu,是一个隐性突变基因,位于小鼠的第11号染色体上。目前,此基因已导入到不同品系的小鼠中,常见的有BALB/c-nu、C3H-nu、C57BL/6-nu等 裸鼠的解剖生理特点: ①毛囊发育不良,外观上看几乎没有被毛,故称“裸鼠〞; ②无胸腺,仅有胸腺残迹或异常的胸腺上皮。故不能分泌胸腺素,不能使T细胞正常分化,而T细胞是移植排异的主要细胞。B细胞根本正常但功能欠佳。有较高的NK细胞数量和活性。 ③因为IgG的产生需要T细胞和巨噬细胞的参与,其免疫球蛋白主要是IgM,只有极少量的IgG。 ④自发肿瘤现象罕见,可能与NK细胞的活性高有关。 ⑤ 裸鼠易患鼠肝炎和病毒性肺炎。 ⑥纯合裸鼠母性极差,且受孕率低,乳房发育不良。通常以纯合雄鼠与带有nu基因的杂合雌鼠〔♀nu/+´♂nu/nu〕可获1/2裸鼠。 ⑦裸鼠需饲养在屏障环境中。 8.掌握裸小鼠繁育、保持方式 通常以纯合雄鼠与带有nu基因的杂合雌鼠〔♀nu/+´♂nu/nu〕可获1/2裸鼠。 9.掌握近交系裸小鼠裸基因导入方法 〔1〕保持原种〔把题目给的具体名称写入〕近交系〔B×S〕 〔2〕导入Nu〔裸基因〕 〔3〕反复自交+回交 〔4〕Nu/Nu× Nu/+♀ 裸鼠繁育采用该方式 〔5〕获得与原近交系背景一致的BALB/c-nu 10.SCID小鼠 SCID小鼠的全称为“重症联合免疫缺陷〞小鼠。其突变点在16号染色体上,为单基因突变,突变符号为scid,当其纯合时,性状表现为淋巴细胞抗原受体基因编码顺序异常,造成T、B淋巴细胞不能分化为特异性的淋巴细胞,目前已有多种不同品系的SCID小鼠。 SCID小鼠的生物学特征: 外观与普通小鼠无异样,但其胸腺、脾、淋巴结等免役器官的重量不到正常小鼠的30%。其胸腺多为脂肪组织包围,没有皮质结构,仅残存的髓质。外周白细胞较少,淋巴细胞仅占总数的10-20%〔正常小鼠为70%〕。 饲养环境:SCID小鼠需在屏障环境〔空气洁净度万级以下〕中,方能存活一年以上。其繁殖生产,以近交系繁殖方式进行,产子率和离乳率均低于正常小鼠。 第七章 动物实验的设计和实施 1.动物实验设计的原那么 P116 防止直接在人身上作进行实验,在生命科学研究的设计中必须遵循以下原那么: 1) 相似性 在人为设计的条件下,尽可能选择相似的动物作为人的替代者。所获得的实验结果应金可能类似于人类的情况。假设能找到与人类疾病相同的动物自发模型时最为理想的,但此类动物毕竟有限,通常需要诱发。 2) 可靠性 科研结果必须具备可靠性,要求在研究中使用可靠性高的实验动物----即遗传学质量和微生物学质量,寄生虫学质量均符合国家标准的动物,并在符合实验动物环境及设施的国家标准规定的实验环境中完成实验。 3) 重复性 科研结果必须能够重复,不能重复的研究结果毫无意义。所以动物模型应能重复培育,且能实现标准化。 4) 可控性 在研究课题中使用的动物模型应考虑到今后临床应用和便于控制其疾病的开展,以利于分析实验结果。 5) 经济性 在设计和执行课题方案时,对选用的动物和采用的方法应符合课题经费预算。 ★b. PPT:动物实验的设计:1.分组随机化;每组〔包括各实验组和对照组〕数量尽量相等,目的是减少实验误差。2.预试验3.数据处理方法 三个原那么: ①.对照:用以控制试验条件; ②.随机:使试验分组的客观化,减少抽样误差; ③重复:试验要有足够的样本数及重复次数,以提高结果的可靠性。 2.实验动物选择的4项根本原那么 P118 1〕选择标准化的实验动物 2〕选择在结构、技能、代谢以及发病机理与人相似的实验动物 3〕选用解剖、生理上有特点的动物 4〕选用特殊生理反响的动物以符合不同的实验要求 3.动物实验的分组 P121 1)分组原那么——随机性〔机遇相等的原那么〕,目的是减少干扰因素造成的实验误差;各组内动物〔包括对照组〕数目——尽量相等; 2)对照组设立的几种方法 空白、实验、有效、配对、交叉对照、实验重复和肯定、历史对照。 第八章 动物实验的“3R〞原那么 一、“3R〞的概念 P152 1.Replacement替代 ——用其他方法而不用〔高等〕动物到达实验目的。 〔是使用 其他方法而不用动物,以到达某一试验目的,或者说使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的方法。简单的说就是应用无知觉的材料的科学方法来代替活体试验。〕 〔1〕低等动物替代高等动物〔2〕用组织、细胞替代整体动物〔3〕用分子生物学方法替代整体动物实验〔4〕计算机模拟、声像教学〔5〕人工合成材料替代动物原料 2. Reduction减少 ——用较少的动物获得同样多的实验数据;用同样多的动物获得更多的实验数据。〔是在科学研究中,用较少量的动物获取同样多的试验数据,或者使用一定数量的动物能获得更多试验数据的方法,即在动物试验过程中减少动物使用数量。〕 (1〕利用已有数据〔2〕合理设计,合理使用数据统计方法〔3〕替代: 低等替代高等〔4〕重复使用动物〔5〕合理选择动物(6〕标准实验操作,注意环境控制〔7〕实验协作,提高使用率 3.Refinement优化 ——改良或完善实验程序,减轻或减少因实验给动物造成的疼痛和不安。〔通过改良和完善试验程序,尽可能减轻或减少给动物造成的藤东和不安,提高动物福利的方法,以利动物试验获得可靠的结果。〕 〔1〕优化实验方案、实验指标〔2〕优化实验条件、实验技术〔3〕改良涉及动物的 操作技术 二、动物福利法的核心: “善待活着的动物,减少死亡的痛苦〞 三、安乐死概念和方法 实验过程中或实验完成后,不欲保存的动物实行“无痛苦〞处死的科学方法。 〔1〕颈椎脱臼法 〔适合小动物〕〔2〕空气栓塞法〔3〕急性大出血法 〔适合较大的动物〕 〔4〕过量麻醉法 〔都适合〕 四、保护动物的意义 1、挽救濒临灭绝的动物物种。2、使动物免受伤害。3、使动物康乐。 五、动物福利的价值 1.社会价值:保护动物、善待动物是人类的责任,是人类道德文明的表达,是人与大自然和谐开展的需要。具有爱心的人社会责任感强。 2科学价值:实施动物福利将使科学实验效果更好,结果可信,客观真实,使科研水平与国际接轨。 3.经济价值:实施动物福利,减少了应激反响,有助于提供优质高产的动物产品,提高实验效率 4.实用价值: 防止敌对,使实验更顺利,节省时间。 第 九 章 动物实验的根本技术和方法 1.动物编号永久性标记方法 〔背侧〕 左耳〔十位数〕 右耳〔个位数〕 40 20 90 圆孔为为1、2、3 单缺口为4、5、6 双缺口为7、8、9 7 3 由内侧到外侧 2.动物被毛去除方法 1. 剪毛法:用弯头剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物 2. 拔毛法:常用于兔的耳缘静脉注射 3. 剃毛法:专用剃毛刀。 适用于大动物。为对动物刺激或可能造成损伤最小的方法。 4. 脱毛法:脱毛剂 3.常用动物平安采血量、最大灌胃剂量 动物种类 最大平安采血量〔ml〕 最小致死采血量〔ml〕 小鼠 大鼠 2 5 豚鼠 5 10 兔 10 40 犬 50 300 猴 15 60 动物 种类 体重〔g〕 最大容积〔ml〕 动物 种类 体重〔g〕 最大容积〔ml〕 小鼠 20-24 豚鼠 250-300 4-5 25-30 >300 >30 兔 2kg 100 大鼠 100-199 150 200-249 4-5 > 200 250-300 猫 50-80 >300 > 100-050 犬 10kg-15kg 200-500 4.常用麻醉方法和麻醉时的考前须知 麻醉的目的是,消除实验过程中引起的痛苦和不适,确保实验动物的平安和动物实验的顺利进行,也是动物实验伦理的一个重要方面。 § 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。 1〕大多数采用全身麻醉,麻醉药通过呼吸道吸入、静脉、肌肉、腹腔注射等途径,进入实验动物体内,使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后,实验动物逐渐清醒,不留后遗症。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径,吸入麻醉法用挥发性麻醉药,注射麻醉法用非挥发性麻醉药。 2〕局部麻醉: 普鲁卡因:是无刺激性的局麻药物。 特点:麻醉速度快,注射后1~3分钟就可产生麻醉。可以维持30~45分钟。对皮肤和黏膜穿透力很弱,需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张,易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中参加肾上腺素〔每100ml参加0.1%肾上腺素〕可以使麻醉时间延长1~2小时。 § 利多卡因:效力和穿透力比普鲁卡因强的卡因:化学结构和普鲁卡因类似,效力和穿透力比普鲁卡因强。 实验动物麻醉应注意的事项 ①麻醉之前应禁食。 ②麻醉之前应准确称量动物体重,作为计算麻醉剂用量的依据。 ③应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的,如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力,使肌肉松弛,而氯胺酮那么相反。 ④大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。 ⑤静脉注射麻醉药时必须缓慢,边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反响,到达麻醉要求时应停止注射。 ⑥大动物手术时应配备麻醉师,在麻醉过程中密切观察动物的反响,如血压、脉搏、呼吸和体温,及时调节麻醉药剂量,保证手术顺利进行。 ⑦动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温会下降,应注意手术室的室温。 ⑧注意术后护理。 ⑨准备好补充麻醉剂和解药。 5.动物处死方法,以过量麻醉为优选 6."SYXK"、“SCXK〞含义 实验动物使用许可证: SYXK〔沪〕2003-0026 实验动物生产许可证: SCXK〔沪〕2004-0001 7.*废弃物处理方式——燃烧、深埋 小鼠没有汗腺,通过身体水份的蒸发来防止体温升高;体温升高并不引起血压升高。 ICR小鼠 是国际通用的封闭群小鼠 NIH小鼠 白化,免疫反响敏感性较好 AKR小鼠 白化,是白血病高发品系;缺乏补体C5易诱发免疫耐受性,对白血病因子敏感,对百日咳组织胺易感因子敏感,常用于肿瘤学和免疫学等的研究。 BALB/cA小鼠 白化。6月龄后出现免疫球蛋白增多症,主要是IgG和IgA量增加;老龄鼠易发生心脏病变, DBA/2小鼠 淡棕色。血细胞多,血压低,维生素K缺乏引起死亡率高,心脏有钙盐沉积 大鼠 不会呕吐〔前胃和胃体由一界限嵴隔开,食管通过此嵴进入胃小弯〕;无胆囊。 汗腺不兴旺,爪底有汗腺,尾上有短毛和环状角质鳞片是散热器官。 雄性大鼠有许多兴旺的副性腺 不宜作为钩体病的研究〔余敏感〕 F344大鼠 白化 肿瘤自发率高 SHR大鼠 自发性高血压大鼠WKY大鼠 SHR大鼠的正常血压对照组 豚鼠不能合成维生素C 兔子食粪癖 动物编号永久性标记方法示意图 〔操作题〕 〔背侧〕 左耳〔十位数〕 右耳〔个位数〕 40 20 90 圆孔为为1、2、3 单缺口为4、5、6 双缺口为7、8、9 7 3 由内侧到外侧 A-B-C 野生色 A-bb-C 桂皮色 aaB-C 黑色 aabbC 棕色 一. 用复隐性灰色小鼠DBA〔雄性,毛色基因型为:aabbCC)对某白化小鼠〔雌性〕进行毛色基因交配试验,它们的F1代出现黑色和棕色两种毛色小鼠:〔1〕该白化小鼠毛色基因是否纯合?〔2〕该白化小鼠毛色基因型是什么?〔3〕用简图说明检测过程。 答:〔3〕 DBA ♂ 〔aabbCC 〕 × 待测鼠♀〔????cc) abC × ??c ↓ F1代: a?b?Cc 〔aaBbCc aabbCc〕 〔1〕由于F1代出现两种毛色,该白化小鼠毛色基因为杂合。 〔2〕由于F1代出现黑色和棕色两种毛色小鼠,说明“B〞位点杂合,该白化小鼠毛色基因型是:aaBbcc。 〔F1代中黑色鼠毛色基因型为aaBbCc ;棕色鼠毛色基因型为:aabbCc〕 二.用复隐性灰色小鼠DBA〔雄性,毛色基因型为:aabbCC)对某白化小鼠〔雌性〕进行毛色基因交配试验,它们的F1代全都是野生色小鼠:〔1〕该白化小鼠毛色基因是否纯合?〔2〕该白化小鼠毛色基因型是什么?〔3〕用简图说明检测过程。〔4〕对照下表,该白化小鼠可能是什么品系。 答:〔3〕 DBA ♂ 〔aabbCC 〕 × 待测鼠♀〔????cc) abC × ??c ↓ F1代: a?b?Cc- 配套讲稿:
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