动物实验技术.ppt

1动物实验技术动物实验技术讲授：刘学旭2医学实验动物学医学实验动物学前言前言一个一个 、两个、两个中心中心 主题主题3一个中心一个中心标标准准化化4标准化标准化动物动物标准化标准化实验实验标准化标准化5实验动物动物动物实验实验两个主题两个主题6动物标准化动物标准化饲养管理饲养管理（生产）（生产）营营养养基础基础疾病预防疾病预防根本根本选种选种,育种育种关键关键质量控制质量控制遗传控制遗传控制微生物微生物,寄生虫控制寄生虫控制环境控制环境控制营养控制营养控制7实验标准化实验标准化实验条件实验条件实验技术实验技术8动物实验动物实验通过生物学手段，研究动物实验过程中的反通过生物学手段，研究动物实验过程中的反应、表现、发生、发展规律以及有关的技术问题应、表现、发生、发展规律以及有关的技术问题,并将结果推论到人的过程。并将结果推论到人的过程。9动物实验技术动物实验技术：研究动物实验所需的各种条件、方法、技术，以保证取得科学的、完整的、先进的实验结果。10动物实验的要求动物实验的要求.1、科学性、科学性2、经济性、经济性3、伦理性、伦理性11科学性科学性要求要求 标准化的动物标准化的动物 标准化的实验条件标准化的实验条件 标准化的操作规程标准化的操作规程12经济性经济性要求要求 动物动物的选择的选择实验方法实验方法的选择的选择13伦理性伦理性要求要求动物福利动物福利3R原则原则14第一讲第一讲实验前的准备实验前的准备内容内容:1、实验条件的准备、实验条件的准备2、实验技术的准备、实验技术的准备3、实验动物的准备、实验动物的准备15第一节第一节动物实验条件的准备动物实验条件的准备一一动物饲养条件的准备动物饲养条件的准备动动物物实实验验过过程程中中，需需要要一一个个观观察察动动物物反反应应的的饲饲养养场场所所，既既动动物物观观察察室室。不不同同等等级级的的动动物物实实验验，需需要要不不同同环环境境条条件件的的动动物物观观察察室。室。16（一）（一）普通动物实验观察室环境设施条普通动物实验观察室环境设施条件要求件要求环境特点环境特点:1、开放系统、开放系统2、环境和微生物控等级较低、环境和微生物控等级较低3、不能完全控制传染因子、不能完全控制传染因子。17（二）（二）清洁动物实验观察室环境设施条件要求清洁动物实验观察室环境设施条件要求环境特点环境特点：1、屏障或半屏屏障或半屏障系统障系统2、所有实验用品所有实验用品经灭菌处理经灭菌处理3、实验人员进出要严格按屏障系统操作规程实验人员进出要严格按屏障系统操作规程操作操作必需设备：必需设备：超净工作台超净工作台18(三三）SPF级级以以上上动动物物实实验验观观察察室室环环境境设设施条件要求施条件要求环境特点环境特点：1、屏障系统或隔离系统。、屏障系统或隔离系统。2、所有实验用品经严格灭菌处理。所有实验用品经严格灭菌处理。3、实验人员要严格按隔离系统操作规程操作。实验人员要严格按隔离系统操作规程操作。19清洁级和清洁级和SPF级动物实验饲养设施级动物实验饲养设施1、屏障系统饲养室、屏障系统饲养室2、空气层流架和、空气层流架和IVC系统系统3、有过滤帽的饲养盒、有过滤帽的饲养盒20二、实验场地的准备二、实验场地的准备实验操作室实验操作室动物手术室动物手术室细胞培养室细胞培养室其他特殊观察室其他特殊观察室21三三、实验药品、试剂的准备实验药品、试剂的准备22四、实验器械的准备四、实验器械的准备实验器械准备得充分、适当，有助于实验实验器械准备得充分、适当，有助于实验的顺利完成。的顺利完成。不同类型、部位的实验使用的实验器械不同类型、部位的实验使用的实验器械种类、数量不尽一致。种类、数量不尽一致。实验器械包括完成实验所需要的检测仪器、实验器械包括完成实验所需要的检测仪器、实验时动物的固定器械、动物外科手术器实验时动物的固定器械、动物外科手术器械械.23（一）（一）实验仪器设备根据实验的目的、实验仪器设备根据实验的目的、要求、内容不同而不同。要求、内容不同而不同。实验前应检查实验前应检查是否准备就绪。是否准备就绪。24(二二)常用动物外科手术器械常用动物外科手术器械（三）手术器械的消毒（三）手术器械的消毒1、煮沸灭菌法、煮沸灭菌法、2、高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法3、化学药品灭菌法。、化学药品灭菌法。25（四）敷料、手术巾、手术衣、帽、口（四）敷料、手术巾、手术衣、帽、口罩的消毒罩的消毒26五五.手术人员的准备手术人员的准备为为了了保保证证无无菌菌手手术术的的进进行行,手手术术人人员员应应作作一一系系列列的的无无菌菌的的准准备备。不不管管做做什什么么等等级级动动物物的的手手术术，都都应应该该遵遵循循无无菌菌手手术术的的基本原则。基本原则。（一）手术所需人数（一）手术所需人数（二）（二）更衣更衣（三）（三）手、臂的清洁和消毒手、臂的清洁和消毒27第二节第二节动物实验技术的准备动物实验技术的准备一一动物实验理论知识的准备动物实验理论知识的准备（一）了解实验用动物的基础知识（一）了解实验用动物的基础知识实实验验用用动动物物包包括括实实验验动动物物、家家畜畜家家禽禽及及部部分分野野生生动动物物。特特别别是是要要熟熟悉悉动动物物的的生生物物学学特特性性，解解剖剖生生理理结结构构，这这对对开开展展动动物物实实验验研研究是十分有益的。究是十分有益的。28（二二）掌掌握握动动物物实实验验的的基基础础知知识识和和基本技能基本技能动物实验是一项系统的工作，涉及各种实验技术、实验方法、实验手段、以及相关的技术标准。29二二、实验技能的准备、实验技能的准备 全程预试验：全程预试验：演习整个实验过程演习整个实验过程局部预试验：局部预试验：训练技术难点训练技术难点预试验预试验.30第三节第三节实验动物的选择实验动物的选择实实验验动动物物的的选选择择是是医医学学研研究究中中首首要要考考虑虑的的问问题题。选选择择恰恰当当与与否否关关系系到到课课题题的的质质量量，经经费费开开支支，研研究究途途径径及及方方法法的的简简繁繁，甚甚至至影影响响到到课课题题的的成成败败及及研研究究结结果果的的正正确确性。性。31一一选择原则选择原则（一）相似性原则（一）相似性原则在在医医学学研研究究中中选选用用那那些些生生物物学学特特性性和和解解剖剖生生理理特特点点与与人人类类相相似似的的实实验验动动物物更更具具有有实实际际意义。意义。321、结构和功能的相似性、结构和功能的相似性在可能的情况下，尽量选用那些在可能的情况下，尽量选用那些生物学生物学特性特性和和解剖生理特解剖生理特点与点与人类相似人类相似的实验动物。的实验动物。一般说来，实验动物愈高等，进化程度愈高，一般说来，实验动物愈高等，进化程度愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类。人类。332、年龄状态的相似性、年龄状态的相似性实验动物的寿命与人具有很大的差异，实验动物的寿命与人具有很大的差异，但都可以找到与人的生长发育阶段相对应但都可以找到与人的生长发育阶段相对应的时期。的时期。343、群体分布的相似性、群体分布的相似性人类群体属于人类群体属于自然分布自然分布群体类型。在群体类型。在以群体为研究对象的课题中，要考虑选择以群体为研究对象的课题中，要考虑选择与人类群体与人类群体基因型基因型及及表现型表现型分布类型相似分布类型相似的动物。的动物。354.生态或健康状况的相似性生态或健康状况的相似性在动物的在动物的遗传、环境和营养控制相遗传、环境和营养控制相同同的情况下，其的情况下，其微生物控制和健康状况微生物控制和健康状况对实验的影响就非常重要。对实验的影响就非常重要。一般无菌动物是饲养在一般无菌动物是饲养在超常生态超常生态环环境条件的动物，用于一些特殊的研究。境条件的动物，用于一些特殊的研究。SPF动物和清洁动物是饲养在动物和清洁动物是饲养在健康生健康生态态环境条件下的动物，用于多数科学研环境条件下的动物，用于多数科学研究。究。365.疾病特点的相似性疾病特点的相似性实实验验动动物物有有许许多多自自发发或或诱诱发发性性疾疾病病能能局局部部或或全全部部地地反反映映与与人人类类类类似似的的疾疾病病过过程程和和特点，可用于研究相关的人类疾病。特点，可用于研究相关的人类疾病。376.操作实感的相似性操作实感的相似性体型大的动物用于体型大的动物用于外科手术外科手术或或教学示教教学示教中比体型小的动物在中比体型小的动物在操作实感更接近人类。操作实感更接近人类。小香猪38（二）特殊性原则（二）特殊性原则1、动物解剖、生理的特殊性、动物解剖、生理的特殊性不不同同种种系系的的动动物物的的解解剖剖生生理理特特征征既既有有共共性性又又存存在在差差异异，充充分分利利用用这这些些共共性性和和差差异异，并并符符合合实验目的要求，是保证实验成功的关键。实验目的要求，是保证实验成功的关键。392、对刺激反应的特殊性、对刺激反应的特殊性不同种系的实验动物对相同因素的不同种系的实验动物对相同因素的刺激反刺激反应既有共同性的一面，也存在一些特殊反应应既有共同性的一面，也存在一些特殊反应，同样的刺激对一些动物敏感，但对另外一些动同样的刺激对一些动物敏感，但对另外一些动物可能不敏感。物可能不敏感。因此在实验研究中选用那些有因此在实验研究中选用那些有特殊反应、对实验研究敏感的动物作为实验对特殊反应、对实验研究敏感的动物作为实验对象，也是保证实验成功的重要因素。象，也是保证实验成功的重要因素。40（三）标准化原则（三）标准化原则标标准准化化原原则则是是指指动动物物实实验验中中选选择择与与课课题题研研究究的的目目的的、内内容容、水水平平相相匹匹配配的的标标准准化化的的实实验验动动物物。只只有有选选用用经经微微生生物物、寄寄生生虫虫学学、遗遗传传学学、环环境境及及营营养养控控制制的的标标准准化化实实验验动动物物，才才能能排排除除生生物物因因素素、遗遗传传因因素素、环环境境及及营营养养因素对实验结果的干扰。因素对实验结果的干扰。41（四）规格化原则（四）规格化原则规规格格化化原原则则是是指指选选择择与与实实验验要要求求一一致致的的动动物物规规格格。动动物物的的规规格格是是指指对对动动物物在在年年龄龄、体体重重、性性别别、生生理理及及健健康康状状况况等等量量和和质质的的规规定定。同同种种动动物物不不同同的的规规格格对对外外界界刺刺激激的的反反应应存存在在差差异异。421、不同的动物年龄，有不同的生物学不同的动物年龄，有不同的生物学特性，对实验刺激的反应也随着年龄的不特性，对实验刺激的反应也随着年龄的不同而有明显变化同而有明显变化。2 标准化的健康实验动物的体重与标准化的健康实验动物的体重与年龄一般呈正相关，选择动物时，可按体年龄一般呈正相关，选择动物时，可按体重选择。重选择。年龄年龄体重体重433 同种动物不同性别对外界刺激的反应不同种动物不同性别对外界刺激的反应不一致。因此，一般而言，实验若对动物性别无一致。因此，一般而言，实验若对动物性别无特殊要求，则宜选用雌雄各半。以避免由性别特殊要求，则宜选用雌雄各半。以避免由性别差异造成的差异。差异造成的差异。4、动物不同的生理状态，机动物不同的生理状态，机体对某些刺激的反应有较大的差异体对某些刺激的反应有较大的差异。性别性别 生理和健康状况生理和健康状况 44（五）（五）经济性原则经济性原则 经经济济原原则则是是指指在在不不影影响响实实验验质质量量的的前前提提下下，尽量选用容易获得、价格便宜和饲养经济的动物。尽量选用容易获得、价格便宜和饲养经济的动物。45二二常用试验中动物的选择常用试验中动物的选择46毒理学研究中的选择毒理学研究中的选择在在试试验验品品毒毒性性试试验验研研究究中中，选选择择何何种种实实验验动动物物取取决决于于该该动动物物对对试试验验品品的的反反应应，以以及及试试验验品品在在该该动动物物体体内内的的吸吸收收、分分布布、代代谢谢和和排排泄泄与与人人类类的的异异同同程程度度。因因此此，作作动动物物实实验验时，选择动物应当注意以下几个方面的问题。时，选择动物应当注意以下几个方面的问题。471、不同种属的动物对试验品的毒性反应有质、不同种属的动物对试验品的毒性反应有质与量的区别。同一试验品对不同种属动物与量的区别。同一试验品对不同种属动物的毒性反应是有差异的，甚至有本质的不的毒性反应是有差异的，甚至有本质的不同。同。因此在毒理研究中，选择动物时，应因此在毒理研究中，选择动物时，应至少选择两种动物进行实验且种属差异越至少选择两种动物进行实验且种属差异越大越好。一般应选择一种啮齿类动物和一大越好。一般应选择一种啮齿类动物和一种大动物。种大动物。482、通常情况下，动物的进化程度愈高，、通常情况下，动物的进化程度愈高，对试验品毒性反应愈敏感。对试验品毒性反应愈敏感。493、在选择动物规格方面，选择未成年的动、在选择动物规格方面，选择未成年的动物、雌雄各半较为合适（对年龄有物、雌雄各半较为合适（对年龄有特殊要求的除外）。特殊要求的除外）。生长期动物对毒生长期动物对毒性反应比老年动物敏感。动物的性性反应比老年动物敏感。动物的性别不同对试验品的毒性反应存在差异。别不同对试验品的毒性反应存在差异。50二二实验动物的购入实验动物的购入在在动动物物实实验验的的各各项项准准备备工工作作中中，动动物物的的购购入入是是一一个个重重要要的的环环节节。在在购购入入动动物物前前，应应确确定定购购入入动动物物的的种种类类、品品系系、规规格格、数数量量及及动动物物微微生生物物控控制制等等级级等等。购购入入动动物物时时应应注注意意以以下几个方面的问题。下几个方面的问题。511、购入或领取动物前，应检查各项准备、购入或领取动物前，应检查各项准备工作是否就绪，如饲养动物的工作是否就绪，如饲养动物的器具、器材器具、器材是否准备好，饲养室的是否准备好，饲养室的卫生和消毒卫生和消毒情况；情况；此外，还应检查动物的此外，还应检查动物的笼卡、实验记录本、笼卡、实验记录本、垫料、饲料、秤垫料、饲料、秤等实验必须品是否准备好。等实验必须品是否准备好。522、购入动物时，应向供应单位及时索取、购入动物时，应向供应单位及时索取动物的动物的遗传背景、微生物背景、质量合格遗传背景、微生物背景、质量合格证、动物的年龄、体重证、动物的年龄、体重等资料。等资料。533、购入动物时，无论运输距离的远近，都、购入动物时，无论运输距离的远近，都应考虑运输环境的应考虑运输环境的温度、湿度、饮食以及途温度、湿度、饮食以及途中污染和窒息死亡中污染和窒息死亡等问题。等问题。544、购入清洁级以上的动物，应采用带有空、购入清洁级以上的动物，应采用带有空气过滤膜的气过滤膜的无菌运输罐无菌运输罐或或带过滤帽的笼盒带过滤帽的笼盒运输，严格检查其密封状况。运输，严格检查其密封状况。555、新购进的动物不能直接进入动物实验室，、新购进的动物不能直接进入动物实验室，应将动物应将动物雌雄分开雌雄分开，并分笼在，并分笼在隔离隔离区饲养区饲养一段时间，以便动物得以恢复体能并适应一段时间，以便动物得以恢复体能并适应新的环境。新的环境。566、无论购入何种实验动物，都应同时、无论购入何种实验动物，都应同时购入相应数量的购入相应数量的饲料和垫料。饲料和垫料。57三、动物模型准备三、动物模型准备58（一）（一）概念概念人人类类疾疾病病动动物物模模型型是指医学研究中建立的具有人类疾病表现的动物实验对象和相关材料。使用动动物物模模型型是当代生生物物学学、医医学学、药药学学研究中一种便于认识客观事物的实验方法和手段。通过模型的研究可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不容易排除的因素，以观察模型的反应。59（二二）使用动物模型的意义使用动物模型的意义1、避免在人身上进行实验所带来的避免在人身上进行实验所带来的风险。风险。如：如：外伤、中毒、肿瘤和辐射病等。外伤、中毒、肿瘤和辐射病等。602、应用动物模型可以随时复制的特、应用动物模型可以随时复制的特点，得到平时临床上不易见到的疾点，得到平时临床上不易见到的疾病。病。如：如：放射病、毒气中毒、烈性传放射病、毒气中毒、烈性传染病、战伤等。染病、战伤等。613、用动物提供的模型可以克服人类某些疾病、用动物提供的模型可以克服人类某些疾病的潜伏期长，病程长和发病率低的缺点。的潜伏期长，病程长和发病率低的缺点。潜伏期长的疾病潜伏期长的疾病：肿瘤、慢性气管炎、动肿瘤、慢性气管炎、动脉粥样硬化、遗传病等。脉粥样硬化、遗传病等。发病率低的疾病发病率低的疾病：免疫性、代谢性、内分免疫性、代谢性、内分泌和血液病等。泌和血液病等。624、可以严格控制实验条件，排除各种干可以严格控制实验条件，排除各种干扰。扰。临床上疾病较复杂，影响因素多，如：身临床上疾病较复杂，影响因素多，如：身患患多种疾病、病人的年龄、性别、体重、遗传、多种疾病、病人的年龄、性别、体重、遗传、生活地区和规律，营养状况生活地区和规律，营养状况等各不相同。等各不相同。动物复制的疾病模型，可以选择相同动物复制的疾病模型，可以选择相同品种、品品种、品系、性别、年龄、体重，以及相同的质量控制系、性别、年龄、体重，以及相同的质量控制和饲养条件等。和饲养条件等。635、样品收集方便。样品收集方便。收集动物疾病模型的样品不受时间和收集动物疾病模型的样品不受时间和条件的限制，可根据实验需要随时采集条件的限制，可根据实验需要随时采集。64（三）三）动物模型的分类动物模型的分类1、按产生的原因分类按产生的原因分类.（1）诱发性或实验性动物模型）诱发性或实验性动物模型（Experimental Animal Models）（2）自发性动物模型）自发性动物模型（Spontaneous Animal Models）（3）转基因和基因敲除动物模型）转基因和基因敲除动物模型(Transgenic animal,gene knock-out animal)(Transgenic animal,gene knock-out animal)65诱发性或实验性动物模型诱发性或实验性动物模型：是指实验者使用物理的、化学的和生物是指实验者使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物造成动物组织、器官的致病因素作用于动物造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病时的功能、代谢障碍或形态结构方面的病变。时的功能、代谢障碍或形态结构方面的病变。.机械损伤、放射线损伤、气压、手术等机械损伤、放射线损伤、气压、手术等 化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧 伤、某种有机成分的增加或减少导致营养伤、某种有机成分的增加或减少导致营养 性疾病等。性疾病等。细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等 。物理因素物理因素:化学因素化学因素 ：生物因素生物因素 ：复合因素复合因素 ：多种因素诱导多种因素诱导.67自发性动物模型：自发性动物模型：是指在自然情况下所形成的疾病模型或者经是指在自然情况下所形成的疾病模型或者经有意识的人工处置发生的疾病，并能稳定遗传有意识的人工处置发生的疾病，并能稳定遗传给后代的疾病模型。包括人工培育的突变系和给后代的疾病模型。包括人工培育的突变系和近交系的各种疾病模型。近交系的各种疾病模型。如：无胸腺裸鼠、高血压大鼠、肥胖症小鼠如：无胸腺裸鼠、高血压大鼠、肥胖症小鼠等。等。68 需要指出：需要指出：1、以上两种动物模型各有其、以上两种动物模型各有其优缺点优缺点。其优。其优 缺点只是缺点只是相对的相对的。2、很多疾病模型可用、很多疾病模型可用不同方式获得。不同方式获得。693、不同方法复制的动物模型在、不同方法复制的动物模型在发病机理发病机理和和 疾病内在特征疾病内在特征方面存在着各自的特点。方面存在着各自的特点。4、大部分自发性动物模型是通过人为、大部分自发性动物模型是通过人为定向定向 培育培育而成的，与人类自然发生的疾病在而成的，与人类自然发生的疾病在 很多方面很多方面有差异有差异。70转基因和基因敲除动物模型：转基因和基因敲除动物模型：转基因动物：转基因动物：是指用基因工程技术将外源目的基是指用基因工程技术将外源目的基因通过因通过生殖细胞或早期胚胎生殖细胞或早期胚胎导入胚胎染色体基因组内，导入胚胎染色体基因组内，使之稳定整合并能传给后代的一类动物。使之稳定整合并能传给后代的一类动物。基因敲除动物：基因敲除动物：是指用相应的分子生物学技术将是指用相应的分子生物学技术将结构已知但功能未知的基因去除，或用其他序列相近结构已知但功能未知的基因去除，或用其他序列相近的基因将其取代的一类动物的基因将其取代的一类动物。712、按实验所用对象分类按实验所用对象分类.（1）整体动物模型）整体动物模型（2）离体器官，组织动物模型离体器官，组织动物模型（3）细胞株动物模型）细胞株动物模型72（四）（四）动物模型的设计原则动物模型的设计原则1、相似形相似形人人类类疾疾病病动动物物模模型型应应尽尽可可能能地地相相似似于于人类疾病。人类疾病。如：大鼠的自发性高血压。如：大鼠的自发性高血压。复制动物模型时，应注意动物的选择复制动物模型时，应注意动物的选择732、重复性重复性理想的动物模型应该是可以重复的。理想的动物模型应该是可以重复的。保证动物模型具有重复性的措施保证动物模型具有重复性的措施.（1）选用标准化的实验动物）选用标准化的实验动物（2）选用标准化的实验设施）选用标准化的实验设施（3）保证复制因素的一致性）保证复制因素的一致性743、可靠性可靠性复制的动物模型应可靠地反映人类疾病，复制的动物模型应可靠地反映人类疾病，疾病的主要症状和体征明显，不能出现与实疾病的主要症状和体征明显，不能出现与实验无关的疾病。验无关的疾病。注意动物的注意动物的选择选择和动物的和动物的质量质量754、适用性和可控性适用性和可控性疾病模型应尽量考虑在今后临床上的应用和疾病模型应尽量考虑在今后临床上的应用和便于控制其发展，以利于研究。便于控制其发展，以利于研究。如：雌激素终止大、小鼠早期妊娠的模型无实如：雌激素终止大、小鼠早期妊娠的模型无实用性。用性。动物动物+制模因子制模因子=结果散发或死亡结果散发或死亡无法控无法控制模型的发展方向和速度，无价值。制模型的发展方向和速度，无价值。765、易行性和经济性易行性和经济性复制动物模型应尽量做到方法简单、复制动物模型应尽量做到方法简单、容易，合乎经济的原则。容易，合乎经济的原则。77（五（五）影响动物模型制作的因素影响动物模型制作的因素781、致模因素对动物模型复制的影响：、致模因素对动物模型复制的影响：致致摸摸因因素素的的剂剂量量及及在在相相关关动动物物上上的的反反应应影影响动物模型的复制。响动物模型的复制。因此造模时应注意因此造模时应注意.（1）致模因素的选择）致模因素的选择（2）致模因素的剂量致模因素的剂量（3）致模因素与模型的相关信息致模因素与模型的相关信息792、动物因素对动物模型复制的影响、动物因素对动物模型复制的影响（1）动物种类的影响动物种类的影响（2）动物品系的影响动物品系的影响（3）年龄和体重的影响年龄和体重的影响（4）性别因素的影响）性别因素的影响（5）生理状态和健康因素影响生理状态和健康因素影响80动物种类的影响：动物种类的影响：不同种的动物存在许多不同的特点，动不同种的动物存在许多不同的特点，动物种类选择不当将影响动物模型的复制物种类选择不当将影响动物模型的复制。81动物品系的影响：动物品系的影响：同种不同品系的动物对致模因素的反应不同种不同品系的动物对致模因素的反应不一致一致。82年龄和体重的影响：年龄和体重的影响：动物的寿命差异较大，解剖生理特征和动物的寿命差异较大，解剖生理特征和反应随年龄而明显变化，一般幼龄动物比反应随年龄而明显变化，一般幼龄动物比成年动物敏感，成年动物敏感，应根据实验要求，选择相应根据实验要求，选择相应年龄的动物复制模型（健康动物年龄与应年龄的动物复制模型（健康动物年龄与体重有相关性）。体重有相关性）。83性别因素的影响：性别因素的影响：同种、同品系，不同性别的动物，对同种、同品系，不同性别的动物，对某些反应不一致。某些反应不一致。84生理状态和健康因素影响生理状态和健康因素影响:动物处在不同的生理状态和不同的健康状动物处在不同的生理状态和不同的健康状况对致模因素的反应差异很大。况对致模因素的反应差异很大。如：如：肝功能衰竭肝功能衰竭动物模型，不能选用患严动物模型，不能选用患严重重球虫病球虫病的家兔，因球虫病影响肝功能。的家兔，因球虫病影响肝功能。853、实验技术因素对动物模型复制的影实验技术因素对动物模型复制的影响响（1）实验季节）实验季节不不同同季季节节，动动物物对对某某些些反反应应可可能能不不一一致致，对对跨跨季季节节的的动动物物模模型型实实验验可可能能产产生生影影响。响。86（2）昼夜不同的影响）昼夜不同的影响实验动物的实验动物的体温、血糖、基础代谢体温、血糖、基础代谢的、的、内分泌等随昼夜的不同呈有节律的变化，内分泌等随昼夜的不同呈有节律的变化，在复制模型时要注意昼夜不同对模型的影在复制模型时要注意昼夜不同对模型的影响。响。87（3）麻醉深度的影响）麻醉深度的影响不同的不同的麻醉药麻醉药、剂量剂量对动物麻醉效对动物麻醉效果有差异，这种差异会影响模型的复制。果有差异，这种差异会影响模型的复制。88（4）手术技巧的影响）手术技巧的影响手术熟练，将减少对动物的刺激手术熟练，将减少对动物的刺激，损伤和出血能提高模型的成功率。损伤和出血能提高模型的成功率。89（5）实验给药的影响）实验给药的影响给药给药途径途径、剂量剂量和和熟练程度熟练程度不同会不同会对造模产生影响。对造模产生影响。90（6）对照组对造模的影响）对照组对造模的影响对照是检测模型是否成功的重要手对照是检测模型是否成功的重要手段。段。914、环境、营养因素对复制动物模型的影响环境、营养因素对复制动物模型的影响环环境境因因素素是是影影响响造造模模及及其其实实验验结结果果的的重重要要因因素素，居居住住条条件件、光光照照、噪噪声声、氨氨浓浓度度、温温度度、湿湿度度、气气流速度流速度等任何一项都不容忽视等任何一项都不容忽视.营营养养因因素素对对复复制制动动物物模模型型，特特别别是是长长期期实实验验，影影响响显显著著，应应予予以以重重视视。造造模模过过程程中中应应注注意意给给水水量量充分和给予符合卫生标准的饮水。充分和给予符合卫生标准的饮水。92（六）动物模型的制作（六）动物模型的制作1、制模前的准备工作。、制模前的准备工作。2、制模动物的选择。、制模动物的选择。3、制模材料的选择。、制模材料的选择。4、制模方法的确定。、制模方法的确定。5、制模环境的确定。、制模环境的确定。准备就绪，开始制模准备就绪，开始制模。93实验准备工作就绪，接下来开始实验准备工作就绪，接下来开始作动物实验，下堂课讲实验过程中的作动物实验，下堂课讲实验过程中的基本技术和方法。基本技术和方法。94第三讲第三讲 动物实验中的基本技术和方法动物实验中的基本技术和方法95 第一节第一节实验动物的抓取与固定实验动物的抓取与固定 抓抓取取与与固固定定是是动动物物实实验验的的一一项项基基本本技技术术，其其目目的的是是使使动动物物保保持持在在安安静静的的状状态态下下，顺顺利利地地进进行行各项实验。各项实验。不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。同同种种动动物物不不同同实实验验目目的的、实实验验内内容容，抓抓取取与与固固定定方法也可以不同。方法也可以不同。不同实验者的操作习惯上也存在差异。不同实验者的操作习惯上也存在差异。96一、小鼠一、小鼠（一）、抓取（一）、抓取 用右手用右手拇指和食指的拇指和食指的指腹抓住尾部指腹抓住尾部中央提起或用中央提起或用两手捧起。两手捧起。97（二）、固定（二）、固定1、徒手固定、徒手固定（1）将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。（2）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。98（3）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住鼠尾再用鼠尾再用 左手的小指压住尾根部，使整左手的小指压住尾根部，使整个小鼠呈一条直线。个小鼠呈一条直线。992、固定板（器）固定、固定板（器）固定 （1）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。（2）准备一个）准备一个15-20cm，边缘钉有，边缘钉有5个钉子个钉子 的方木板。的方木板。（3）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子 上，在上颚切上，在上颚切 齿处用细绳齿处用细绳 固定在木版前方的钉子上。固定在木版前方的钉子上。100 固定板固定适用于大多数动物手术。固定板固定适用于大多数动物手术。小鼠固定器适用于尾静脉注射。小鼠固定器适用于尾静脉注射。101二、大鼠和地鼠二、大鼠和地鼠（一）抓取（一）抓取 1、周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一样抓住尾部提起。样抓住尾部提起。1022、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作。103注意：注意：操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在空中。不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在空中。104（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：对体重对体重较小的大鼠可用拇指、较小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及颈食指捏住大鼠耳部及颈部皮肤，余下三指紧捏部皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌心，住背部皮肤，置于掌心，调整好大鼠在手中的姿调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验操作。势即可进行实验操作。如：灌胃、腹腔注射、如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等肌肉注射、皮下注射等实验实验。1052、固定板固定：、固定板固定：方法与小鼠固定板固定相同，方法与小鼠固定板固定相同，只是需选择更大一些的固定板。只是需选择更大一些的固定板。3、固定器（盒）固定：固定器（盒）固定：方法与小鼠固定器（盒）方法与小鼠固定器（盒）固定相同，只是固定器较小鼠的大。固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用同样适用 于大鼠尾静脉注射。于大鼠尾静脉注射。106三、豚鼠三、豚鼠（一）抓取（一）抓取 抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。用左手大把抓起。107 注意：注意：豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧，否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。108（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：用左手的食指和中指放在豚鼠用左手的食指和中指放在豚鼠颈背部两侧，拇指和无名指放在肋部，分别用手指颈背部两侧，拇指和无名指放在肋部，分别用手指挟住左右前肢抓起，然后反转左手，用右手的拇指挟住左右前肢抓起，然后反转左手，用右手的拇指和无名指挟住右后肢，用中指和无名指挟住左后肢，和无名指挟住右后肢，用中指和无名指挟住左后肢，使鼠体成为一条直线。使鼠体成为一条直线。1092、固定板（器）固定：、固定板（器）固定：与大、小鼠，豚鼠固与大、小鼠，豚鼠固定板固定基本一致。定板固定基本一致。110四、实验兔四、实验兔（一）抓取（一）抓取 抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。111 注意：注意：家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，也不能用单手只抓颈背部皮肤。也不能用单手只抓颈背部皮肤。112（二）固定（二）固定1、徒手固定：、徒手固定：用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。113 也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔固大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔固定。定。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及经口给药。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及经口给药。1142、固定盒固定、固定盒固定：此固定方法适用于头、耳部位实此固定方法适用于头、耳部位实验。验。1153、固定板（台）固定、固定板（台）固定：此固定方法可使兔俯卧、此固定方法可使兔俯卧、仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术及仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术及其它实验操作。其它实验操作。116五、实验犬五、实验犬（一）抓取（一）抓取 对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止脱落部，防止脱落。注意：注意：狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。117（二）固定（二）固定 实验台固定：实验台固定：用特制的长柄铁钳夹住犬的颈用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。并将并将犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、背部位的实验。背部位的实验。118119 不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的基本基本原则是原则是：1.保证实验人员的安全。保证实验人员的安全。2.防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定动物的抓取与固定方法。动物的抓取与固定方法。120第二节第二节 实验动物的编号与标记实验动物的编号与标记动动物物实实验验时时，当当使使用用的的动动物物数数或或实实验验分分组组数数大大于于1时时，需需要要对对动动物物个个体体间间或或组组间间区区别别开开来来，就就需需进进行行编编号号与与标标记记。因因此此编编号号与与标标记记的的目目的的就就是是动动物物个个体与组别的识别。体与组别的识别。SD大鼠121 标记的方法很多，良好的标记方法应满标记的方法很多，良好的标记方法应满足：足：号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。性。编号方法无定法，原则是使实验者能够识别编号方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体和组别。现介绍几种常用的标记和编号动物个体和组别。现介绍几种常用的标记和编号方法。方法。122染色法染色法（一）