医学检验的干扰问题.ppt
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1、医学检验的干扰问题医学检验的干扰问题青岛兰信医学检验所 刘奉亭2012年1月10日干扰物质的来源干扰物质的来源l体液是非常复杂的混合物,存在于体液中的内源和外源物质都可能干扰对一些物质的准确测定。l标准品和质控品等材料中也可能存在干扰物质。干扰物质的种类干扰物质的种类l内源干扰物:溶血,脂血,黄疸和异型蛋白血等l外源干扰物:药物,添加剂,试验材料等 溶血的干扰溶血的干扰l溶血的原因l血红蛋白对340nm光吸收的干扰l细胞内成份对血清(血浆)的污染不正确操作导致的溶血不正确操作导致的溶血l注射器或试管中有水l使用真空采血管时,采血管负压太大l抽血不顺利,止血带扎得时间过长(最好不超过半分钟,看到
2、回血后立即松开止血带)l从注射器中往试管中注血时用力过快过猛l采血后,未取针头直接将血注人真空管内l使用抗凝管时,过分用力摇匀疾病引起溶血疾病引起溶血(属合格标本)l阵发性睡眠性血红蛋白尿l血型不合(如新生儿溶血)l红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症l药物l其他可引起溶血的疾病血红蛋白对血红蛋白对340nm测定的干扰测定的干扰l血红蛋白在340nm左右有光吸收,当血红蛋白被氧化生成高铁血红蛋白时,其在340nm的光吸收降低。因此可影响所有以NADH和NADPH的吸收性质为基础的测定方法,如ALT、AST、BUN、CK、GLU(HK法)、HBDH、LDH、血氨、胆汁酸等。红细胞内成份的污染红细胞
3、内成份的污染(1)检验项目胞内/血浆浓度比乳酸脱氢酶 160倍钾 22倍镁 3倍 血浆中含有1g/L血红蛋白时可使乳酸脱氢酶升高670U/L,钾升高3mmol/L,镁升高0.05mmol/L。红细胞内成份的污染红细胞内成份的污染(2)l溶血释放出来的腺苷酸激酶(AK)可影响CK活性的测定。AK催化:2ADPAMP+ATPCK催化:磷酸肌酸ADP肌酸+ATPlAK还能干扰CK同工酶的电泳测定。AK向CK-MM的阴极方向移动,而可能会被错误地解释为巨型CK-2。脂血的干扰脂血的干扰l混浊l光散射l置换体积和非极性分配脂血混浊的影响脂血混浊的影响l使空白吸光度升高而降低比色方法的测定范围。l影响甘油
4、三酯的测定:甘油三酯测定试剂中的酯酶可清除脂血的混浊而导致光吸收的改变。脂血对光散射的影响脂血对光散射的影响l对以光散射为基础的方法(比浊法)产生显著的影响:ApoAI、ApoB、抗“O”、RF、CPR、AT、PA、Cys C、2-MG、TRF、Lp(a)、IgA、IgG、IgM、补体C3、补体C4、TSGF、D2、HCY等。l由于被测物质在水相和脂相的溶解度不同,脂血通过置换水的体积而造成水溶性物质结果假性偏低。l不干扰电解质等的电极法测定。脂血对脂血对非极性分配的影响非极性分配的影响胆红素的干扰胆红素的干扰l胆红素能够干扰使用过氧化物酶偶联反应(PAP偶联)的肌酐、葡萄糖,尿酸,胆固醇和甘
5、油三脂、HDL-C和LDL-C的测定。l高浓度的胆红素对肌酐测定的苦味酸法也产生负干扰。胆红素干扰机理及干扰的消除胆红素干扰机理及干扰的消除l胆红素在400-540nm有强烈的吸收。l胆红素通过破坏反应的中间产物而对检验产生干扰:4-氨基-安替比啉 H2O2 苯醌亚胺胆红素H2O2胆绿素l解决方法:试剂中加入亚铁氰化物以破坏胆红素;420-460nm蓝光预照射标本以破坏胆红素。抗体的干扰抗体的干扰l异型蛋白l冷凝集蛋白l异嗜性抗体l免疫球蛋白l同源抗体异型蛋白血等异型蛋白血等 l由于多发性骨髓瘤或类似的原因,异型蛋白在体内循环。异型蛋白可干扰测定磷的硫酸亚铁/钼酸铵法,干扰测定尿素的邻苯二醛法
6、。冷凝集蛋白的干扰冷凝集蛋白的干扰l冷凝集蛋白可使红细胞凝集,在红细胞计数时,使多个红细胞堆积一并通过计数孔,而引致RBC、HCT的计数减少,直接导致MCV、MCHC、RDW等参数的升高。l血型测定时,往往会出现正定为AB型,反定为O型。冷凝集蛋白干扰的消除冷凝集蛋白干扰的消除l红细胞膜存在一种冷抗体(冷凝素IgM)在30以下反应活跃,26即可发生冷凝集。l处理方法是血液标本与检测试剂双重加温,30分钟后检测可消除冷凝集影响。嗜异性抗体的干扰嗜异性抗体的干扰l嗜异性抗体(Id)是对非特异性抗原产生的抗体应答,分为天然抗体和自身免疫抗体。前者又分为天然多特异性抗体、独特型抗体和类风湿因子。l在两
7、点免疫法中,异嗜性抗体与固化抗体及标记抗体结合,形成复合物,结果使信号抗体与捕获抗体结合,导致假阳性。抗抗体抗抗体的干扰的干扰l免疫分析中使用的抗体多是由鼠杂交瘤细胞制备的,有人可能由于曾经被鼠咬等原因产生抗鼠抗体,从而干扰测定(以ELISA为例)。包被抗体被测物质 标记抗体包被抗体抗抗体 标记抗体免疫球蛋白的干扰免疫球蛋白的干扰l免疫球蛋白可能偶然与血清中其它物质结合。例如,IgG可能与CK-BB结合,形成巨型CK1,因其半衰期比CK长而导致血清中CK的活性升高。l免疫球蛋白可能通过与甲状腺素(T4)结合而干扰甲状腺素的测定。放免分析中同源抗体的干扰放免分析中同源抗体的干扰l待测hap与12
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