DB34∕T 3284-2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法(安徽省).pdf
《DB34∕T 3284-2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法(安徽省).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB34∕T 3284-2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法(安徽省).pdf(12页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 11.220 B 41 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 32842018 猪丹毒丝菌实时荧光 PCR 检测方法 Method of the real-time PCR for the detection of Erysipelothrix rhusiopathiae 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 2019 - 01 - 29 实施安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 32842018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽农业大学提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:安徽农业大学
2、、安徽浩翔农牧有限公司、安徽省动物卫生监督所、巢湖市畜牧兽医局、阜阳市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽省兽药饲料监察所,同济大学。 本标准主要起草人:李郁、李雪松、李春芬、张利亚、陈章、黄晓慧、孙裴、姚焱彬、张劲松、高亚飞、孟天恺。 DB34/T 32842018 1 猪丹毒丝菌实时荧光 PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了猪丹毒丝菌实时荧光 PCR 检测方法的缩略语、试剂和仪器、样品的采集、运输与保存、操作方法。 本标准适用于猪组织样品、血样及其细菌培养物中猪丹毒丝菌的实时荧光 PCR 检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用
3、文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 荧光 PCR:荧光聚合酶链式反应 Ct 值:每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环圈数 DNA:脱氧核糖核酸 Taq 酶:Taq DNA 聚合酶 PBS:磷酸盐缓冲液 Eppendorf 管:微量离心管 4 试剂和仪器 4.1 试剂 4.1.1 无水乙醇: -20预冷。 4.1.2 75乙醇: 用新开启的无水乙醇和无 DNA 酶的灭菌双蒸水配制,-20预冷。 4.1.3 灭菌双蒸水。 4
4、.1.4 动物组织基因组 DNA 提取试剂盒。 4.1.5 引物: 上游引物:5-GTGGCGCATATAATCCCGTA- 3 下游引物:5- GCAAACGCAATGGCTTCT- 3 4.1.6 2TransTaq-T PCR SuperMix。 4.1.7 Taq 酶。 4.1.8 实验用水:应符合 GB/T 6682 中一级水的规格。 4.2 仪器 DB34/T 32842018 2 4.2.1 显微镜:物镜 10 倍100 倍。 4.2.2 电子天平:感量 0.1 g。 4.2.3 恒温培养箱:361 4.2.4 冰箱:(28,-20,-80)。 4.2.5 微量移液器:0.1 L
5、2.5 L、0.5 L10 L、5 L50 L、20 L200 L、100 L1 000 L。 4.2.6 荧光 PCR 仪。 4.2.7 恒温水浴锅(室温至 100)。 4.2.8 高速台式冷冻离心机:最大转速 14 000 r/min 以上。 4.2.9 全自动快速样品研磨仪。 4.2.10 混匀器 5 样品的采集、运输与保存 5.1 采样要求 采样过程中样品不得交叉污染,采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。 5.2 采样工具 5.2.1 剪刀、镊子、注射器、1.5 mL Eppendorf 管。 5.2.2 所有上述采样工具必须经(121 士 2),15 min 高压灭菌并烘干。 5.
6、3 样品的采集 5.3.1 组织器官 根据临床症状的不同采集典型病料。用剪刀、镊子无菌采集肾、脾、肝、心血、淋巴结、疹块及其周围皮肤、肿胀的关节液、心脏瓣膜增生物等。 5.3.2 血清或全血 用无菌注射器直接吸取至无菌 Eppendorf 管,分离血清。或用加有抗凝剂的注射器直接吸取至无菌 Eppendorf 管,充分混合。抗凝剂采用柠檬酸钠缓冲液,或 0.5 mol/L EDTA。每 6 mL 血液加 1 mL抗凝剂。 5.3.3 细菌培养物 直接取液体培养基培养的菌液。对于在固体培养基上生长的菌落,用接种棒挑取适量菌样,放入 0.01 mol/L pH 7.6 PBS 中,振荡混匀形成悬浮
7、菌液。 5.4 样品的运输与保存 采集的样品应置于低温、密封的容器内运输。待检样品在 28条件下保存不应超过 24 h;若不能在规定时间内送检的, 可保存于饱和氯化钠溶液或 30甘油缓冲盐水溶液中, 但保存不应超过 72 h。 6 操作方法 DB34/T 32842018 3 6.1 样品前处理 6.1.1 组织器官样品前处理 用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品 10 mg 于研钵中充分研磨,再加 5.0 mL 0.01 mol/L pH 7.6 PBS 混匀,然后将组织悬液转入无菌 1.5 mL Eppendorf 管中,编号备用。 6.1.2 血样、细菌培养物前处理 取 1 mL2 mL 全血
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB34T 3284-2018 猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法安徽省 DB34 3284 2018 丹毒 实时 荧光 PCR 检测 方法 安徽省
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【曲****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【曲****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。