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DB37∕T 3630-2019 小麦普通腥黑穗病菌分子检测方法(山东省).pdf
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1、ICS 65.020.01 B 16 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 36302019 小麦普通腥黑穗病菌分子检测方法 Molecular detection methods of Tilletia foetida & Tilletia caries 2019 - 07 - 23 发布 2019 - 08 - 23 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 36302019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 术语和定义 . 1 3 仪器设备 . 1 4 主要试剂 . 1 5 分子检测 . 1 5.1 小麦种子中小麦普通腥黑穗病菌冬孢子基因组 DNA 提取 .
2、1 5.2 菌瘿中冬孢子基因组 DNA 提取 . 2 5.3 引物序列 . 2 5.4 PCR 扩增 . 2 5.5 电泳检测 . 2 5.6 检测结果判断 . 3 6 结果判定 . 3 7 样品保存 . 3 8 档案保存 . 3 DB37/T 36302019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:山东省植物保护总站、山东农业大学。 本标准主要起草人:于金凤、刘存辉、商明清、孙晓凤、杨勤民、金扬秀、李洪刚、张德满、张莉、谢传峰、徐鲁、成文华。DB37/T 36302
3、019 1 小麦普通腥黑穗病菌分子检测方法 1 范围 本标准规定了小麦普通腥黑穗病菌的分子检测方法。 本标准适用于小麦普通腥黑穗病菌的分子检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 小麦普通腥黑穗病菌 Tilletia foetida & Tilletia caries 指引起小麦普通腥黑穗病的病原菌统称,包括小麦光腥黑穗病菌(Tilletia foetida)和小麦网腥黑穗病菌(Tilletia caries)两种。 2.2 小麦普通腥黑穗病菌分子检测 Molecular detection of Tilletia foetida & Tilletia caries 指依据
4、小麦光腥黑穗病菌(Tilletia foetida)和网腥黑穗病菌(Tilletia caries)的ITS序列,设计特异性引物,经PCR扩增获得特异性片段,依据特异性片段的有无进行判断检测。 3 仪器设备 摇床、显微镜、普通离心机、电热恒温水浴锅、移液器、超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、锥形瓶、离心管、盖玻片、载玻片、电子天平等。 4 主要试剂 除特别说明外,本标准所用试剂均为分析纯。 CTAB缓冲液、Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇、TE 缓冲液、PCR缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA marker、1TAE 缓冲液、琼脂糖、DNA Loading 缓
5、冲液、溴化乙锭、3 mol/L NaOH 溶液、1 mol/L HCl 溶液等。 5 分子检测 5.1 小麦种子中小麦普通腥黑穗病菌冬孢子基因组 DNA 提取 5.1.1 称取 50 g 小麦种子放入 250 mL 锥形瓶中,加入 100 mL 无菌去离子水,试验重复 3 次。 5.1.2 摇床 200 rpm 振荡 5 min 后,静置 10 min。收集洗涤悬浮液于 100 mL 离心管,8 000 rpm 离心10 min,弃上清,留沉淀。 DB37/T 36302019 2 5.1.3 加入 1.5 mL 无菌水,充分混匀,转至 2 mL 离心管中,10 000 rpm 离心 5 mi
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