生物利用度与生物等效性.ppt

七、生物利用度与生物等效性 生物利用度生物利用度生物利用度生物利用度(bioavailability,BA)是指药物吸收进是指药物吸收进入大循环的速度与程度。入大循环的速度与程度。生生物物利利用用度度可可分分绝绝对对生生物物利利用用度度与与相相对对生生物物利利用用度。度。绝绝对对生生物物利利用用度度是是以以静静脉脉注注射射制制剂剂为为参参比比标标准准,通通常用于原料药及新剂型的研究常用于原料药及新剂型的研究相相对对生生物物利利用用度度则则是是剂剂型型之之间间或或同同种种剂剂型型不不同同制制剂剂之之间间的的比比较较研研究究,一一般般是是以以吸吸收收最最好好的的剂剂型型或或制制剂剂为参比标准为参比标准。意义意义它它是是药药物物制制剂剂质质量量的的重重要要指指标标,是是新新药药开开发发与研究的基本内容与研究的基本内容药药典典及及部部颁颁标标准准收收载载的的药药物物,改改变变剂剂型型而而不不改改变变给给药药途途径径,测测定定生生物物利利用用度度有有更更重重要要的的意义意义,可以免作临床验证。可以免作临床验证。有有些些药药物物临临床床指指标标不不够够明明确确而而生生物物利利用用度度的测定更显重要的测定更显重要。AUC Tmax Cmax药药物物血血药药浓浓度度-时时间间曲曲线线下下的的面面积积AUC与与药药物物吸吸收收总量成正比总量成正比,因此它因此它代表药物吸收的程度代表药物吸收的程度。达峰时达峰时Tmax表示吸收的速度表示吸收的速度。而而峰峰浓浓度度Cmax是是与与治治疗疗效效果果及及毒毒性性水水平平有有关关的的参参数数,也也与与药药物物吸吸收收数数量量有有关关。Cmax太太大大,超超过过最最小小毒毒性性浓浓度度,则则能能导导致致中中毒毒。若若Cmax达达不不到到有有效效浓度浓度,则无治疗效果则无治疗效果生物等效性.在在相相同同实实验验条条件件下下,给给予予相相同同剂剂量量的的药药剂剂等等效效制制剂剂,它它们们吸吸收收的的速速度度与与程程度度没没有有明明显显差差别的产品叫别的产品叫生物等效生物等效产品。产品。当当吸吸收收速速度度的的差差别别没没有有临临床床上上的的意意义义时时,某某些些药药物物制制剂剂其其吸吸收收程程度度相相同同而而速速度度不不同同,也也可认为可认为生物等效生物等效。药剂等效性药剂等效性药剂等效性是指同一药物相同剂量制成同是指同一药物相同剂量制成同一剂型一剂型,但非活性成分不一定相同但非活性成分不一定相同,在含量、在含量、纯度、含量均匀度、崩解时间、溶出速率纯度、含量均匀度、崩解时间、溶出速率符合同一规定标准的制剂。符合同一规定标准的制剂。生物等效性与药剂等效性不同二者的主要区别药药剂剂等等效效性性没没有有反反映映药药物物制制剂剂在在体体内内的的情情况况生生物物利利用用度度或或生生物物等等效效性性的的研研究究,反反映映了了药药物物制制剂剂的的生生物物学学标标准准,对对临临床床疗疗效效提提供供直直接接的证明的证明目前实际要求进行生物利用度的药物主要有(1)新开发的药物产品新开发的药物产品,特别是口服制剂。特别是口服制剂。(2)改变剂型的产品改变剂型的产品(3)改变处方与工艺的产品改变处方与工艺的产品(仿制产品仿制产品)。以下几类药物,进行生物利用度研究更有必要1.预防与治疗严重疾病的药物预防与治疗严重疾病的药物2.治疗指数窄的药物治疗指数窄的药物3.水溶性低的药物水溶性低的药物4.溶解速度慢的药物溶解速度慢的药物5.有胃肠道中生物转化或在胃肠中不稳定的药物有胃肠道中生物转化或在胃肠中不稳定的药物 6.有特殊理化性质的药物有特殊理化性质的药物7.赋形剂比例高的产品赋形剂比例高的产品预防与治疗严重疾病的药物这类药物的质量对治疗效果影响较大这类药物的质量对治疗效果影响较大,生物利用度上的差别生物利用度上的差别,有时会带来严重有时会带来严重的后果。的后果。治疗指数窄的药物治疗指数治疗指数是是毒性浓度与有效浓度毒性浓度与有效浓度的比值的比值治疗指数窄的药物制剂如苯妥英治疗指数窄的药物制剂如苯妥英钠，若生物利用度不一致钠，若生物利用度不一致,过高可过高可能引起中毒能引起中毒,过低可能达不到治疗过低可能达不到治疗浓度浓度水溶性低的药物例如水溶解度低于例如水溶解度低于5mg/ml的的,此此类药物溶解少类药物溶解少,如果剂型设计不如果剂型设计不当或制剂处方设计不好当或制剂处方设计不好,均能影均能影响生物利用度。响生物利用度。溶解速度慢的药物溶解速度慢的药物溶解速度慢的药物,用用法定方法在法定方法在30min内溶解少于内溶解少于50%的药物。的药物。也就是在整个吸收过程中也就是在整个吸收过程中,溶解速溶解速度是限速步骤度是限速步骤,药物剂型因素对这药物剂型因素对这类药物制剂生物利用度有显著的类药物制剂生物利用度有显著的影响影响有胃肠道中生物转化或在胃肠中不稳定的药物。此类制剂若设计不好，常造成生物利此类制剂若设计不好，常造成生物利用度低用度低通常需包衣或制成特殊剂型通常需包衣或制成特殊剂型有特殊理化性质的药物如多晶型药物如多晶型药物,溶剂化物、粒度影响吸溶剂化物、粒度影响吸收的药物收的药物赋形剂比例高的产品如如赋形剂与活性成分之比为赋形剂与活性成分之比为5:1的的情况。情况。因为赋形剂多因为赋形剂多,有时对主药会产生一定有时对主药会产生一定的影响的影响免做生物等效性试验的药物有些国家市售非处方药物:其中包括维生素类的保健用品维生素类的保健用品;经经有有关关主主管管部部门门批批准准免免作作临临床床试试验验的的新的非处方复方制剂新的非处方复方制剂;长长期期使使用用后后安安全全系系数数大大的的处处方方药药物物转转变为非处方药物变为非处方药物评价(测定)生物利用度的方法.血药浓度法血药浓度法尿药浓度数据法尿药浓度数据法绝对生物利用度相对生物利用度梯形法积分法尿药浓度数据法（7个半衰期）生物利用度(生物等效性)的实验设计 研究对象研究对象试验制剂与标准参比制剂试验制剂与标准参比制剂分析方法的指标与要求分析方法的指标与要求单剂量给药计划单剂量给药计划单剂量试验结果处理单剂量试验结果处理生物利用度的计算生物利用度的计算多次给药计划多次给药计划结果处理结果处理结果统计分析结果统计分析研究对象一一般般在在人人体体内内进进行行。应应选选择择正正常常、健健康康的的自自愿愿受受试试者者,受受试试者者应应在在各各种种条条件件一一致致的的情情况况下下进进行行。(个个别毒性大的药物如抗癌药别毒性大的药物如抗癌药,可以采用动物可以采用动物)受受试试者者选选择择条条件件:年年龄龄一一般般1840岁岁,男男性性,体体重重为为标标准准体体重重,受受试试者者应应经经过过肝肝、肾肾功功能能及及心心电电图图等等项项检查检查,试验前停用一切药物试验前停用一切药物,试验期间试验期间,禁忌烟酒。禁忌烟酒。受受试试者者人人数数,可可考考虑虑12例例。国国外外一一般般用用24例例。新新药药研研究究到到底底选选用用多多少少例例,应应根根据据卫卫生生行行政政部部门门颁颁布布的的指导原则的规定确定指导原则的规定确定,不得随意制订。不得随意制订。试验制剂与标准参比制剂试试验验制制剂剂应应是是中中试试以以上上规规模模生生产产出出来来的的,国国外外规规定定为大生产批量的为大生产批量的10%或或10万片以上的规模。万片以上的规模。绝绝对对生生物物利利用用度度研研究究,需需选选择择静静脉脉注注射射剂剂作作为为标标准准参比制剂。参比制剂。相相对对生生物物利利用用度度或或生生物物等等效效性性的的研研究究,可可选选用用已已批批准准上上市市的的、质质量量优优良良的的同同类类剂剂型型或或相相关关剂剂型型产产品品为为参参比比制制剂剂。应应该该说说明明,上上述述已已批批准准上上市市系系指指国国内内经经批批准准上上市市与与国国外外产产品品经经我我国国卫卫生生部部门门批批准准在在我我国上市的产品国上市的产品分析方法的指标与要求测测定定方方法法要要求求专专属属性性强强、准准确确性性高高、精精密密、灵敏的分析方法。灵敏的分析方法。要要求求绝绝对对回回收收率率不不低低于于70%,日日内内、日日间间相相对对标标准准偏偏差差(RSD%)小小于于10%,浓浓度度很很低低(如如ng水平水平),也可小于也可小于15%或或20%并提供分析方法的最低检测浓度。并提供分析方法的最低检测浓度。单剂量给药计划如如试试验验制制剂剂与与参参比比制制剂剂两两种种进进行行比比较较则则采采用用双双处处理、两周期随机交叉试验设计理、两周期随机交叉试验设计两两周周期期间间称称洗洗净净期期,一一般般相相当当药药物物10个个半半衰衰期期,通通常常一周一周给给药药剂剂量量一一般般应应与与该该制制剂剂临临床床治治疗疗剂剂量量一一致致,且且被被试试验验制制剂剂与与标标准准制制剂剂总总剂剂量量应应相相等等。如如非非临临床床治治疗疗剂剂量量,应应提提供供剂剂量量设设置置的的足足够够依依据据。若若剂剂量量不不等等应说明原因应说明原因对对非非线线性性动动力力学学的的药药物物要要用用两两个个不不同同剂剂量量进进行行试试验验具体方案受受试试者者禁禁食食10h后后,早早晨晨空空腹腹时时以以200ml水水将将药吞服药吞服,服药后服药后4h时统一食谱的标准餐。时统一食谱的标准餐。整整个个采采样样时时间间至至少少35个个半半衰衰期期。如如果果药药物物半半衰衰期期未未知知,采采样样需需持持续续到到血血药药浓浓度度为为峰峰浓浓度的度的1/101/20。采样安排采样安排:根根据据预预试试验验结结果果进进行行,一一个个完完整整的的口口服服血血药药浓浓度度一一时时间间曲曲线线,应应包包括括吸吸收收相相、平平衡衡相相与与消除相。消除相。服服药药前前采采样样一一次次,吸吸收收相相与与平平衡衡相相各各采采样样3次次,消除相采样消除相采样48次次,总数总数1115次。次。对个别药物对个别药物,若采样次数较少若采样次数较少,应说明理由应说明理由单剂量试验结果处理列列出出试试验验制制剂剂与与标标准准参参比比制制剂剂每每一一个个受受试试的的血血药药浓浓度度与与时时间间的的原原始始数数据据,同同时时计计算算平平均值与标准差均值与标准差,列表并作图列表并作图计计算算每每受受试试者者生生物物利利用用度度或或生生物物等等效效性性有有关参数关参数,并求出平均值与标准差并求出平均值与标准差,列表列表AUCo-t用梯形法计算。用梯形法计算。T1/2=0.693/K。Cmax、Tmax通通过过实实验验数数据据直直接接求求出出,或或用用抛物线法求得。抛物线法求得。生物利用度的计算绝绝对对生生物物利利用用度度与与相相对对生生物物利利用用度度：用用药药时曲线下面积的数据进行计算时曲线下面积的数据进行计算。多次给药计划(多剂量给药计划 缓缓释释、控控释释制制剂剂除除进进行行单单剂剂量量试试验验外外,还还要要求求进进行行多次给药试验多次给药试验多多次次给给药药同同样样采采用用交交叉叉试试验验设设计计,洗洗净净期期一一周周,受受试试者者选选择择、人人数数、制制剂剂、分分析析方方法法等等研研究究条条件件与与单单剂量法相同剂量法相同,缓缓释释、控控释释制制剂剂按按设设计计要要求求给给药药(如如每每天天一一次次或或二二次次),若若参参比比制制剂剂为为普普通通速速释释制制剂剂,则则按按临临床床常常规规方方法给药法给药(如每天二次或三次如每天二次或三次)；具体方案连连服服一一定定时时间间，不不少少于于待待测测药药物物7个个半半衰衰期期后后,开开始始测测定定谷谷浓浓度度,至至少少测测三三次次,以以确确证证达达到到稳稳态态。达达稳稳态态后后至至少少要要测测定定一一个个剂剂量量间间隔隔的的血血药药浓浓度度-时时间间曲曲线线,特特别别要要注注意意测测定定给给药药前前(0时时间间)与与剂剂量量间间隔隔末末(时时间间)的的血血药药浓浓度度,其其他他采采样样时时间间可可参参考考单单剂剂量量实实验验安排安排,以便求得生物利用度以便求得生物利用度最最好好能能测测定定达达稳稳态态后后全全天天服服药药的的血血药药浓浓度度-时时间间曲曲线线,特特别别对对那那些些在在一一天天内内吸吸收收与与处处置置容容易易发发生生节节律律变化的药物变化的药物。多剂量试验的结果处理 实验数据整理与单剂量试验相同。实验数据整理与单剂量试验相同。然然后后计计算算每每一一个个受受试试者者生生物物利利用用度度或或生生物物等等效效性性有有关关参参数数,并并求求出出平平均均值值与与标标准准差差,列列表。表。平均稳态血药浓度结果统计分析 试试验验结结果果应应进进行行统统计计分分析析,并并作作出出判判断断。相相对对生生物物利利用用度度值值差差异异在在土土20时时,一一般般认认为为可以被接受。可以被接受。生生物物等等效效性性标标准准是是试试验验制制剂剂生生物物利利用用度度的的参参数数AUC平平均均值值的的90%可可信信限限,应应落落在在标标准准参参比比制制剂剂的的80-125%置置信信区区间间之之间间。Cmax则在则在70%-145之间之间。生物等效性统计分析统统计计分分析析宜宜采采用用方方差差分分析析、双双单单侧侧检检验验、置信区间、内叶斯分析置信区间、内叶斯分析等等由由于于AUC,因因不不呈呈正正态态分分布布,应应先先将将其其进进行行对对数转换数转换,才可进行方差分析。才可进行方差分析。方差分析 方差分析方差分析是检验差异的传统方法方差分析方差分析是检验差异的传统方法,且为其它方法的基础。且为其它方法的基础。方差分析的统计假设是方差分析的统计假设是:样品的随机化样品的随机化;方差齐性方差齐性;统计模型的可加性统计模型的可加性;残差的独立性和正态性。残差的独立性和正态性。在生物等效性评价中方差分析的基础是受试者的选择与分配应是随机的。受试者的选择与分配应是随机的。试验组与参比组的误差来源和影响因素试验组与参比组的误差来源和影响因素应当相等或至少相当。应当相等或至少相当。误差的作用具有可加性误差的作用具有可加性,如受试者、周期如受试者、周期间、药物间的作用应该具可加性间、药物间的作用应该具可加性,且上述作且上述作用之间无交互影响。用之间无交互影响。实验数据应是正态分布实验数据应是正态分布。若满足不了上述条件需采用其它措施如若满足不了上述条件需采用其它措施如数数据的对数转换据的对数转换以符合上述条件。以符合上述条件。许多生物学资料是非正态分布许多生物学资料是非正态分布,接近于对数接近于对数正态分布。由血药浓度数据计算出的正态分布。由血药浓度数据计算出的AUC和和Cmax趋于偏态分布趋于偏态分布,它们的变异随平均它们的变异随平均值增大而增大值增大而增大,对数转换后可改善这种情况对数转换后可改善这种情况,使其变异与平均值无关使其变异与平均值无关 方差分析方差分析用来检验试验组与参比组组内与用来检验试验组与参比组组内与组间差异组间差异,评价受试者、试验周期、制剂间评价受试者、试验周期、制剂间的变异和其它试验设计的变异。的变异和其它试验设计的变异。一般差异的显著性水平定为一般差异的显著性水平定为0.05。方差分析方差分析是显著性检验是显著性检验,不是等效性检验不是等效性检验。双单侧检验(two one-sided test)双单侧检验双单侧检验用于可信限检验用于可信限检验,确定试验制剂确定试验制剂与参比制剂生物利用度参数平均值的差异与参比制剂生物利用度参数平均值的差异是否在允许范围内是否在允许范围内。双单侧检验的假设为 分别为试验制剂与参分别为试验制剂与参比制剂比制剂AUC或或Cmax的对数均值的对数均值:r1为生物等效的低侧为生物等效的低侧界限界限,r2为高侧界限为高侧界限;如检验参数为如检验参数为AUC,则则r1=0.8,r2=1.25。检验统计量式中式中S为样本误差均方的为样本误差均方的平方根平方根,由方差分析结果由方差分析结果得到得到,n为样本人数为样本人数,t1和和t2均服从自由度均服从自由度的的t分分布布(均误差均方自由度均误差均方自由度),临界值为临界值为t1-a它可以查它可以查t单侧分位数表得到。单侧分位数表得到。当当t1t1-a,t2 t1-a同时成同时成立立,则拒绝则拒绝Ho,接受接受Hl,即即认为两制剂生物等效。认为两制剂生物等效。置信区间置信区间分析生物等效性分析中常用置信区间分析生物等效性分析中常用90%的置信区间分析的置信区间分析即为试验制剂的生物利用度有即为试验制剂的生物利用度有90的可能的可能性在此范围之间。性在此范围之间。公式体内外相关性研究 一旦这种关系建立后一旦这种关系建立后,就就可可能能用用体体外外试试验验代代替替体体内内试试验验,即即用用体体外外溶溶出出或或释释放放试试验验结结果果作作为为制制剂剂产产品品体体内内生生物利用度特性的指示物利用度特性的指示。同同时时,也也可可用用于于筛筛选选处处方方,保保证证制制剂剂产产品品体体内内外性能的一致性外性能的一致性 体内外相关性有三种情况 整个体外溶出、释放时间过程和整个体内整个体外溶出、释放时间过程和整个体内时间过程之间存在相关关系时间过程之间存在相关关系 体外溶出时间过程和体内时间过程的参数体外溶出时间过程和体内时间过程的参数之间存在相关关系。之间存在相关关系。单点相关单点相关 整个体外溶出、释放时间过程和整个体内时整个体外溶出、释放时间过程和整个体内时间过程之间存在相关关系间过程之间存在相关关系 具有这种相关关系具有这种相关关系其体外溶出曲线，和体其体外溶出曲线，和体内整个吸收曲线存在相关关系内整个吸收曲线存在相关关系,这是最高水这是最高水平的相关系。平的相关系。体内吸收曲线可通过体内吸收曲线可通过Wagner-Nelson法或法或Loo-Reegelman法求得。法求得。体外溶出时间过程和体内时间过程的参数之间存在相关关系。这一相关的方法主要是利用统计矩分析原理这一相关的方法主要是利用统计矩分析原理,可以可以将体外平均溶出时间和体内平均滞留时间或体内将体外平均溶出时间和体内平均滞留时间或体内平均溶出时间进行比较。平均溶出时间进行比较。如如:a：体外平均溶出时间对体内平均溶出时间：体外平均溶出时间对体内平均溶出时间B：体外平均溶出时间对体内平均滞留时间：体外平均溶出时间对体内平均滞留时间C：体外溶出速度常数对体内吸收速度常数：体外溶出速度常数对体内吸收速度常数为单点相关关系某一溶出时间点某一溶出时间点,如如T50%、T90%,和某一药动学和某一药动学参数如参数如AUC、Cmax或或tmax存在相关关系。可有存在相关关系。可有以下三种情况以下三种情况（1）某一特定时间点体外溶出量和体内药动学参数）某一特定时间点体外溶出量和体内药动学参数之间相关性。之间相关性。(2)体外溶出某一百分数所需时间与体内药动学参体外溶出某一百分数所需时间与体内药动学参数之间有相关性。数之间有相关性。(3体外溶出参数与体内药动学参数之间有相关体外溶出参数与体内药动学参数之间有相关性性某一特定时间点体外溶出量和体内药动学参数之间相关性如a:时间t时的溶出量对AUCB:时间t时的溶出量对CmaxC:时间t时的溶出量对平均滞留时间MRT体外溶出某一百分数所需时间与体内药动学参数之间有相关性。a:Tx%对对AUCb:Tx%又才又才Cmaxc:Tx%对对MRT体外溶出参数与体内药动学参数之间有相关性 a:溶出速度常数kd或K。对Cmax或AUCB:MDT体外对Cmax或AUC影响生物利用度的因素 剂型的影响剂型的影响药物在胃肠道内的代谢分解药物在胃肠道内的代谢分解肝脏首过作用肝脏首过作用受试者本身变易的影响受试者本身变易的影响剂型的影响 同同种种药药物物不不同同剂剂型型,生生物物利利用用度度往往往往不不同同。同同种种剂剂型型,由由于于处处工工艺艺不不同同,有有时时生生物物利利用用度度也不同也不同产产生生这这种种现现象象的的原原因因,主主要要剂剂型型的的性性质质与与处处方组成影响药物的吸收。方组成影响药物的吸收。这这个个问问题题是是当当前前某某些些产产品品质质量量存存在在的的主主要要问问题题,应应通通过过改改进进剂剂型型设设计计和和制制剂剂处处方方加加以以解决。解决。药物在胃肠道内的代谢分解 某某些些药药物物在在胃胃肠肠道道内内停停留留时时间间较较长长,易易受受胃胃肠肠内内微微生生物物或或酶酶的的作作用用而而发发生生代代谢谢分分解解,使使生物利用度降低。生物利用度降低。肝脏首过作用 心心得得安安、利利多多卡卡因因等等药药物物均均有有一一定定程程度度的的肝脏首过作用肝脏首过作用首首过过作作用用的的程程度度,可可以以用用药药物物口口服服或或静静注注后后得到的曲线下的面积来预测。得到的曲线下的面积来预测。受试者本身变易的影响 测测求求生生物物利利用用度度,应应进进行行交交叉叉试试验验,以以消消除除受受试试者者之之间药物清除率间药物清除率(KV)的变异。的变异。但但是是有有时时这这些些研研究究仍仍受受到到受受试试者者本本身身变变异异的的影影响响,也也就就是是同同一一受受试试者者对对同同次次数数所所给给药药物物消消除除作作用用不不完完全全相相同同,药药物物消消除除变变异异越越大大,F或或Fr估估算算的的标标准准差差也越大。也越大。为为了了减减少少个个体体自自身身差差异异性性的的影影响响,一一般般假假设设分分布布容容积积不不变变,而而校校正正消消除除速速度度常常数数或或半半期期的的差差别别。这这就就是半衰期校正法是半衰期校正法,研究目的及内容 临临床床前前进进行行药药物物动动力力学学研研究究,目目的的在在于于了了解解新新药药在在动动物物体体内内动动态态变变化化的的规规律律及及特特点点,给给临床合理用药提供参考临床合理用药提供参考;其其内内容容包包括括药药物物的的吸吸收收、分分布布、排排泄泄、蛋蛋白白结结合合等等。根根据据数数学学模模型型,求求算算重重要要的的药药物物动力学参数动力学参数 药物在生物样品中的分离与测定 建立一个专属性强、准确、重现性好、灵敏的测定方法(一一)专属性专属性(二二)重现性重现性.(三三)灵敏度灵敏度.(四四)标准曲线及回收率标准曲线及回收率(五五)分离及测定分离及测定专属性必必须须证证明明所所测测药药物物为为原原形形药药或或其其代代谢产物。谢产物。重现性用用RSD%表示表示药药物物加加入入生生物物样样品品中中反反复复测测定定的的相相对对标标准准偏偏差差,在在实实际际所所用用标标准准曲曲线线(至至少少四四个个浓浓度度)范范围围内内,日日内内变变异异系系数数争争取取达达到到5%以以内内,但但不不能越过能越过10%或或20%(ng水平水平)。.灵敏度一般以一般以ng(或或ug/ml)生物样品表示。生物样品表示。要求能测出要求能测出35个半衰期后的血药浓度个半衰期后的血药浓度或者能检测出或者能检测出Cmax的的1/10浓度。浓度。标准曲线及回收率1.要要指明药物的化学纯度指明药物的化学纯度。2.要要制制备备药药物物在在血血、尿尿、粪粪、胆胆汁汁及及组组织织匀匀浆浆等等中中的的标标准准曲曲线线,每每条条标标准准曲曲线线在在应应用用浓浓度度范范围围内内,最最少少包包含含四四个个药药物物浓浓度度;并并指指出出其其相关系数。相关系数。3、要要注注意意不不同同组组织织的的空空白白干干扰扰及及回回收收率率可可能不同能不同，绝对回收率低于，绝对回收率低于70。分离及测定1.根根据据实实验验室室条条件件,首首选选先先进进的的HPLC、GC等等分分离方法离方法,以及紫外、荧光以及紫外、荧光等测定方法等测定方法2.用用放放射射性性核核素素标标记记药药物物,在在用用前前要要进进行行纯纯度度检检查查,放放化化纯纯度度要要95%。定定位位标标记记要要指指明明标标记记位位置。尽量不用以曝射制备的非定位置。尽量不用以曝射制备的非定位3H标记物。标记物。3.放放射射免免疫疫法法和和酶酶标标免免疫疫法法具具有有一一定定特特异异性性,灵灵敏敏度度高高,但但原原药药与与其其代代谢谢产产物物或或内内源源性性物物质质常常有有交叉反应交叉反应,需提供证据需提供证据,说明其特异性。说明其特异性。4.生生物物检检定定法法常常能能反反映映药药效效学学本本质质,一一般般特特异异性性较较差差,最最好好用用特特异异性性高高的的方方法法予予以以对对比比、证证明明,否则要加以说明。否则要加以说明。动物选择与注意事项 必必须须采采用用成成年年、健健康康动动物物。常常用用动动物物为为大大鼠、小鼠、兔、豚鼠鼠、小鼠、兔、豚鼠,狗狗等。等。首首选选动动物物与与性性别别尽尽量量与与药药效效学学或或毒毒理理学学研研究所用动物一致。究所用动物一致。尽量在尽量在清醒状态清醒状态下进行。下进行。动物进实验室应饲养动物进实验室应饲养35d再开始实验。再开始实验。给给药药途途径径要要选选择择拟拟在在临临床床上上用用的的途途径径(如如有有特殊情况特殊情况,要加以说明要加以说明 药物动力学参数测定 血药浓度血药浓度-时间曲线时间曲线(药药-时曲线时曲线)药药-时曲线与数据处理时曲线与数据处理实验报告材料实验报告材料血药浓度-时间曲线1.给给药药后后取取血血时时间间应应注注意意到到下下列列三三个个相相的的时时间间点点分分布布,先做预试先做预试,摸索各自范围摸索各自范围,静静脉脉注注射射:分分布布相相、平平衡衡相相和和消消除除相相。血血管管外外给给药药,吸吸收收相相、平平衡衡相相和和消消除除相相。实实验验观观察察期期不不小小于于3个个半半衰期衰期2.口口服服给给药药,一一般般在在给给药药前前禁禁食食12h。研研究究口口服服给给药药,不宜选用兔和反刍动物如羊不宜选用兔和反刍动物如羊等。等。3.最最好好从从同同一一动动物物多多次次采采样样,尽尽量量避避免免用用多多只只动动物物合合并样品。并样品。4、剂剂量量的的选选择择：在在有有效效安安全全范范围围内内，要要选选择择三三种种剂剂量量药时曲线及数据处理1.要要提提出出描描述述血血-药药时时程程的的数数学学表表达达式式,并并确确定定其其参参数数,对线性房室模型对线性房室模型,一般要提供一般要提供:静静脉脉注注射射:T1/2()、T1/2(B)、k12、k21、K10、V、Cl、AUC.血管外给药血管外给药:Ka、Tl/2、Cl、AUC、V、Cmax、Tmax非非线线性性过过程程:常常以以Michaelis-Menten式式表表达达,要要提提供供Vm及及km值值。2.在在做做了了静静脉脉及及口口服服给给药药后后,可可计计算算原原料料药药的的绝绝对对生物利用度生物利用度。3.如用电子计算机处理数据如用电子计算机处理数据,应指出所用程序名称。应指出所用程序名称。实验报告材料1.每每只只动动物物、每每个个时时间间点点的的原原始始数数据据、均均数数及标准误或标准差。及标准误或标准差。2.比较曲线拟合计算值与观测值的符合程度。比较曲线拟合计算值与观测值的符合程度。药物的分布选用大鼠或小鼠做分布试验较为方便。选用大鼠或小鼠做分布试验较为方便。选选择择一一个个剂剂量量(一一般般以以治治疗疗剂剂量量为为宜宜)后后,、至至少少测测定定药药物物在在心心、肝肝、脾脾、肺肺、肾肾、胃胃肠肠道道、生生殖殖腺腺、脑脑、体体脂脂、骨骨髓髓肌肌等等组组织织的的分分布布。特特别别注注意意药药物物在靶器官在靶器官(包括药效学与毒理学包括药效学与毒理学)的分布。的分布。以以药药-时时曲曲线线作作参参考考,选选2-3个个时时间间点点分分别别代代表表分分布布相相(或或吸吸收收相相)、平平衡衡相相和和消消除除相相的的药药物物分分布布消消除除相相的的组组织织分分布布必必须须包包括括在在内内)。每每个个时时间间点点的的组组织织,必必须有须有至少至少5只动物的数据只动物的数据。药物的排泄1.尿和粪的药物排泄试验尿和粪的药物排泄试验 2.胆汁排泄胆汁排泄:1、尿和粪的药物排泄试验尿和粪的药物排泄试验要将动物放入代谢笼内要将动物放入代谢笼内,给药后不同时间间给药后不同时间间隔收集尿或粪全部样品。记录尿体积隔收集尿或粪全部样品。记录尿体积,混匀混匀,取一部分样品取一部分样品,测定药物浓度。尿、粪应每测定药物浓度。尿、粪应每隔一定时间收集隔一定时间收集1次次,以测定药物经此途径排以测定药物经此途径排泄的速度泄的速度 2、胆汁排泄、胆汁排泄一一般般用用大大鼠鼠在在麻麻醉醉下下作作胆胆管管插插管管引引流流;待待动动物物清清醒醒后后,以以各各种种途途径径给给药药,并并以以合合适适的的时时间间间间隔分段收集胆汁隔分段收集胆汁,进行药物测定。进行药物测定。药物与血浆蛋白的结合研研究究药药物物与与血血浆浆蛋蛋白白结结合合的的方方法法很很多多,如如平平衡衡透透析析法法、超超过过滤滤法法、分分配配平平衡衡法法、凝凝胶胶过滤法、光谱法过滤法、光谱法等等其其中中以以平平衡衡透透析析法法最最简简单单、经经济济,但但较较费费时时,一一般般约约需需24h方方达达平平衡衡,最最好好置置冷冷室室进进行行,以以免药物或蛋白质破坏。免药物或蛋白质破坏。其其它它方方法法各各有有优优缺缺点点,根根据据所所研研究究药药物物的的理理化性质及实验室条件化性质及实验室条件,均可供选择使用。均可供选择使用。血浆蛋白结合的百分数计算。如如按按各各种种透透析析法法进进行行实实验验,应应按按下下式式计计算算药药物与血浆蛋白结合的百分数。物与血浆蛋白结合的百分数。结结合合百百分分数数=1-（滤滤出出液液(自自由由形形)浓浓度度/总总浓浓度）度）100注意事项:(1)药药物物与与血血浆浆蛋蛋白白结结合合程程度度受受很很多多因因素素影影响响,如如血血浆浆pH、血血浆浆浓浓度度、药药物物浓浓度度等等。血血浆浆pH应应固固定定为为7.4,至至少少选选择择三三个个血血药药浓浓度度(包括有效浓度在内包括有效浓度在内)进行实验。进行实验。(2)必必须须证证明明药药物物与与半半透透膜膜本本身身有有无无结结合合,应应做对照予以校正。做对照予以校正。(3)可可被被血血浆浆转转化化的的药药物物,要要加加少少量量酶酶抑抑制制剂剂,以终止其转化。以终止其转化。总结通通过过全全面面实实验验观观察察,要要对对该该药药在在动动物物体体内内的的药代动力学特点做综合性论述。药代动力学特点做综合性论述。包包括括吸吸收收、分分布布、消消除除的的特特点点,自自尿尿、粪粪、胆胆汁汁的的排排泄泄情情况况,有有无无蛋蛋白白结结合合,结结合合百百分分数数,有有无无积积蓄蓄,在在什什么么器器官官或或组组织织积积蓄蓄,积积蓄蓄程程度度等。等。如如首首次次发发现现的的新新药药,应应对对药药物物的的主主要要去去向向做做探讨探讨,以免积蓄中毒。以免积蓄中毒。治疗药物监测在药物动力学中的应用治治疗疗药药物物监监测测（IDM)是是近近年年来来临临床床药药学学发发展展较较快快的的一一个个新新领领域域也也是是药药物物动动力力学学应应用用的一个方面。的一个方面。它它是是以以药药物物动动力力学学与与药药效效学学基基础础理理论论为为指指导导,借借助助先先进进分分析析技技术术与与电电子子计计算算机机手手段段检检测测血血药药浓浓度度,探探讨讨药药物物在在体体内内的的过过程程,使使给给药药方案个体化方案个体化,主要工作协助医师选择药物协助医师选择药物设计给药方案设计给药方案评价患者对药物治疗的反应评价患者对药物治疗的反应确定是否需要进行血药浓度测定确定是否需要进行血药浓度测定测定血液或其它体液中的药物浓度测定血液或其它体液中的药物浓度对血药浓度数据进行药物动力学评价对血药浓度数据进行药物动力学评价必要时重新调整给药方案必要时重新调整给药方案继续血药浓度监测继续血药浓度监测当患者由于其它因素导致治疗效果较差时，能够当患者由于其它因素导致治疗效果较差时，能够推荐特殊处理方法推荐特殊处理方法下列情况需进行治疗药物监测1、给予同一剂量后个体差异大的药物、给予同一剂量后个体差异大的药物2、具非线性动力学特征的药物、具非线性动力学特征的药物3、治疗指数小、毒性反应强的药物、治疗指数小、毒性反应强的药物4、毒性反应不易识别，用量不当或用量、毒性反应不易识别，用量不当或用量 不不足的临床反应难以识别的药物足的临床反应难以识别的药物5、患者胃肠道、肝、肾疾病，影响药物吸、患者胃肠道、肝、肾疾病，影响药物吸收、代谢、排泄收、代谢、排泄6、常规剂量下没有看到疗效，测血药浓度、常规剂量下没有看到疗效，测血药浓度有助于分析原因有助于分析原因7、常规剂量下出现毒性反应、常规剂量下出现毒性反应8、怀疑由于合并用药而出现的异常反应、怀疑由于合并用药而出现的异常反应9、诊断和外理药物过量或中毒、诊断和外理药物过量或中毒10、为确定新药的群体给药方案，进行临、为确定新药的群体给药方案，进行临床药动学研究床药动学研究建立灵敏的血药浓度或其他体液浓度的测定方法这这是是治治疗疗药药物物监监测测的的前前提提,若若方方法法不不准准,则则可可导导致致错错误误的的结结果果,常常用用的的方方法法有有高高效效液液相相.色色谱谱法法,荧荧光光偏偏振振免免疫疫法法、酶酶免免疫疫法法等等,其其中中以以高高效效液液相相色色谱谱法法与与荧光偏振免疫法为常用。荧光偏振免疫法为常用。在在测测定定一一个个药药物物的的血血药药浓浓度度时时,首首先先对对方方法法进进行行确确证证,测测定定三三个个浓浓度度的的回回收收率率及及相相对对标标准准偏偏差差RSD%,同同时时要要求求出出方方法法的的灵灵敏敏度度即即最最低低检检测测浓浓度度与与检检测测限。限。TDM与临床诊断在在治治疗疗过过程程中中,有有时时病病人人症症状状增增多多,是是病病情情加加重重还还是是药药物物中中毒毒需需诊诊断断清清楚楚,否否则则带带来来严严重重的效果的效果。某某癫癫痫痫病病人人,连连续续服服用用苯苯妥妥英英钠钠,发发作作仍仍不不能能控控制制,经经采采血血分分析析监监测测,患患者者苯苯妥妥英英钠钠血血药药浓浓度度 40mg/L,正正 常常 治治 疗疗 范范 围围 应应 为为 10-2Omg/mL,故故患患者者确确系系苯苯妥妥英英钠钠中中毒毒,于于是是停服苯妥英钠停服苯妥英钠,后症状缓解后症状缓解TDM与给药方案IDM的的核核心心是是个个体体化化给给药药,药药物物的的疗疗效效不不是是完完全全由由剂剂量量决定决定,而是由血药浓度决定的而是由血药浓度决定的,由由剂剂量量到到血血药药浓浓度度受受到到许许多多因因素素的的影影响响,尤尤其其是是病病人人的的生生理理、病病理理因因素素的的影影响响,因因此此要要根根据据病病人人情情况况用用药药即即个个体体化化给给药药。而而个个体体化化给给药药关关键键是是获获得得个个体体参参数数,多多次次采采血血可可以以求求出出病病人人药药动动力力学学参参数数,但但临临床床不不易易接接受受,近近年年来来关于关于群体药动学群体药动学的发展的发展,为这问题的解决提出办法为这问题的解决提出办法在在临临床床取取1-2个个点点,然然后后将将此此数数据据与与文文献献上上得得到到的的该该药药物物的的群群体体参参数数混混合合运运算算,即即可可得得到到个个体体的的药药动动学学参参数数,可可依依此计算给药剂量、间隔时间、制订个体给药方案。此计算给药剂量、间隔时间、制订个体给药方案。TDM与有效安全用药合合理理用用药药要要保保证证安安全全有有效效,治治疗疗药药物物监监测测是是保证某些药物安全有效的重要手段保证某些药物安全有效的重要手段,患患者者庆庆大大霉霉素素血血药药浓浓度度监监测测结结果果,庆庆大大霉霉素素有有效效血血药药浓浓度度为为118mg/L,血血药药浓浓度度过过高高将将会会带带来来严严重重毒毒副副反反应应,两两次次给给药药间间隔隔时时间间太太短短,会会使使血血药药浓浓度度升升高高，故故应应进进行行调调整整,避避免免了严重不良后果了严重不良后果 TDM与中毒急救TDM能能及及时时准准确确对对中中毒毒物物进进行行定定性性与与定定量量监监测测,有针对性地采取救治措施有针对性地采取救治措施,提高救治的成功率。提高救治的成功率。某某医医院院有有一一患患者者吞吞服服大大量量安安眠眠药药,但但具具体体药药名名不不详详,采采血血用用多多种种安安眠眠药药为为外外标标进进行行定定量量分分析析,速速可可眠眠呈呈阳阳性性反反应应,血血药药浓浓度度高高达达34mg/l,进进行行血血透透析析,再再次次采采取取血血进进行行.监监测测,