食品安全作业.ppt

食品中沙门氏菌检验食品中沙门氏菌检验GB 4789.4-2010GB 4789.4-2010食品安全国家标准食品安全国家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 沙门氏沙门氏菌检验菌检验检验仪器和材料检验仪器和材料1 1冰箱：冰箱：0044。2 2恒温培养箱：恒温培养箱：363611，4242。3 3显微镜：显微镜：1010100100。4 4高压灭菌器。高压灭菌器。5 5 超净工作台。超净工作台。6 6 均质器或灭菌乳钵。均质器或灭菌乳钵。7 7 架盘药物天平：架盘药物天平：0g0g500g,500g,精确度精确度0.5g0.5g。8 8 灭菌广口瓶：灭菌广口瓶：500mL500mL。9 9 灭菌锥形瓶：灭菌锥形瓶：500mL500mL、250mL250mL。10 10 灭菌吸管：灭菌吸管：10mL10mL（具（具0.1 mL0.1 mL刻度）。刻度）。11 11 天菌培养皿：天菌培养皿：90mm90mm。12 12 灭菌小试管：内径灭菌小试管：内径3mm3mm50mm50mm。13 13 灭菌毛细管。灭菌毛细管。检验使用的培养基和试剂检验使用的培养基和试剂1 1缓冲蛋白胨水缓冲蛋白胨水(BP)(BP)2 2氯化镁孔雀绿氯化镁孔雀绿(MM)(MM)增菌液增菌液3 3四硫酸钠煌绿四硫酸钠煌绿(TTB)(TTB)增菌液增菌液4 4亚硒酸盐胱氨酸亚硒酸盐胱氨酸(SC)(SC)增菌液增菌液5 5亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂(BS)(BS)6 6DHLDHL琼脂琼脂7 7HEHE琼脂：按琼脂：按GB/T 4789.28GB/T 4789.2820032003中中4.214.21规定。规定。8 8TSITSI琼脂琼脂9 9蛋白胨水、靛基质试剂蛋白胨水、靛基质试剂10 10 尿素琼脂尿素琼脂(pH7.2)(pH7.2)11 11 氨基酸脱羧酶试验培养基氨基酸脱羧酶试验培养基12 12 沙门氏菌因子血清：按沙门氏菌因子血清：按2626种用于初步分型；种用于初步分型；5757种用于进一种用于进一步分型；步分型；163163种用于详细分型。种用于详细分型。检验沙门氏菌的样品检验沙门氏菌的样品1 1 鲜猪肉、鲜牛肉；冻猪肉鲜猪肉、鲜牛肉；冻猪肉2 2 鲜牛奶、鲜鱼；冻鱼鲜牛奶、鲜鱼；冻鱼3 3 香肠、虾仁香肠、虾仁沙门氏菌检验具体流程沙门氏菌检验具体流程 检样检样 前增菌法前增菌法 直接增菌直接增菌法法 冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜鲜肉、鲜蛋、鲜乳及其它未经加工的食品乳及其它未经加工的食品 25g 25g BP 225mL BP 225mL 25g 25g 灭菌生理灭菌生理盐水盐水25mL 25mL 制成检样均质液制成检样均质液 （36361 1）一般一般 4 h 4 h，干蛋品，干蛋品 18 1824 h24 h10mL10mLMM(MM(或或TTB)100mLTTB)100mL 10mL10mLSC 100mLSC 100mL 检样均质液的半量检样均质液的半量MM(MM(或或TTB)100mLTTB)100mL 检样均质液的半量检样均质液的半量SC 100mL SC 100mL 42 18 42 1824 h 24 h （36361 1）18 1824 h 42 1824 h 42 1824 h 24 h （36361 1）18 1824 h24 h BS BS DHL(DHL(或或HEHE、WSWS、SS)SS)（36361 1）40 4048 h 48 h （36361 1）18 1824 h 24 h 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 TSITSI（斜面、底层、产气、（斜面、底层、产气、H H2 2S S）、蛋白胨水（靛基质）、尿素）、蛋白胨水（靛基质）、尿素（pH7.2pH7.2）、）、KCNKCN、赖氨酸、赖氨酸 H H2 2S S靛基质靛基质 H H2 2S S靛基质靛基质 H H2 2S S靛基质靛基质 非如左述的非如左述的 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸/各种反应结果各种反应结果 甘露醇、山梨醇甘露醇、山梨醇 ONPGONPG 沙门氏菌血清学实验沙门氏菌血清学实验 沙门氏菌血清学实验沙门氏菌血清学实验 非沙门氏菌非沙门氏菌 非沙门氏菌非沙门氏菌 报告报告检验沙门氏菌操作步骤检验沙门氏菌操作步骤 1 1、前增菌和增菌、前增菌和增菌 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无菌操作取菌操作取25g25g（mLmL），加在装有），加在装有225mL225mL缓冲蛋白胨水的缓冲蛋白胨水的500mL500mL广广口瓶内。固体食品可先应用均质器以口瓶内。固体食品可先应用均质器以80008000 10000r/min 10000r/min打碎打碎1min1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，于使乳化，于363611培养培养4h(4h(干蛋品培养干蛋品培养18h18h24h)24h)，移取，移取10mL10mL，转种于，转种于100mL100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于液内，于4242培养培养18h18h 24h 24h。同时，另取。同时，另取10mL10mL，转种于，转种于100mL100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于363611培养培养18h18h24h24h。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取各取25g(25mL)25g(25mL)加入灭菌生理盐水加入灭菌生理盐水25mL25mL，按前法做成检样匀液；，按前法做成检样匀液；取取25mL25mL，接种于，接种于100mL100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于增菌液内，于4242培养培养24h24h；另取；另取25mL25mL接种于接种于100mL100mL亚硒酸盐胱亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于氨酸增菌液内，于363611培养培养18h18h24h24h。2 2、分离、分离 取增菌液取增菌液1 1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHLDHL琼脂平板琼脂平板(或或HEHE琼脂平板、琼脂平板、WSWS或或SSSS琼脂平板琼脂平板)。两种增菌。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于液可同时划线接种在同一个平板上。于363611分别培养分别培养18h18h24h(DHL24h(DHL、HEHE、WSWS、SS)SS)或或40h40h48h(BS)48h(BS)，观察各个平，观察各个平板上生长的菌落。板上生长的菌落。3 3、生化试验、生化试验 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂、蛋白陈水种三糖铁琼脂、蛋白陈水(供做靛基质试验供做靛基质试验)、尿素琼脂、尿素琼脂(pH7.2)(pH7.2)、氰化钾、氰化钾(KCN)(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各及对照培养基各1 1管，于管，于363611培养培养18h18h24h24h，必要时，必要时可延长至可延长至48h48h，按生化反应初步鉴定表判定结果。按反应序，按生化反应初步鉴定表判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1A1、A2A2和和B1B1，其他，其他5 5种反种反应结果均可以排除。应结果均可以排除。沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性性琼脂平脂平板板沙沙门氏菌氏菌、沙沙门氏菌氏菌（即（即亚利桑那菌）利桑那菌）BSBS琼脂脂产硫化硫化氢菌落菌落为黑色黑色带有金属光有金属光泽，棕褐色或灰色，菌落周棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑培养基可呈黑色或棕色；有些菌株不色或棕色；有些菌株不产生硫化生硫化氢，形，形成灰成灰绿色的菌落，周色的菌落，周围培养基不培养基不变黑色黑色带有金属光有金属光泽DHLDHL琼脂脂无色半透明，无色半透明，产硫化硫化氢菌落中心菌落中心带黑黑色或几乎全黑色色或几乎全黑色乳糖乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与阳性或阴性的菌株与亚属属、相同；乳相同；乳糖阳性的菌株糖阳性的菌株为粉粉红色，中心色，中心带黑色黑色HEHE琼脂脂WSWS琼脂脂蓝绿色或色或蓝色；多数菌株色；多数菌株产硫化硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色菌落中心黑色或几乎全黑色乳糖阳性的菌株乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑黄色，中心黑色或几乎全黑色；乳糖色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性阳性或阴性的菌株或阴性的菌株为蓝绿色或色或蓝色，色，中心黑色或几乎全黑色中心黑色或几乎全黑色SSSS琼脂脂无色半透明，无色半透明，产硫化硫化氢菌株，有的菌菌株，有的菌落中心落中心带黑色，但不如以上培养基明黑色，但不如以上培养基明显乳糖乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与阳性或阴性的菌株与亚属属、相同；乳相同；乳糖阳性的菌株糖阳性的菌株为粉粉红色，中心黑色，中心黑色，但中心无黑色形成色，但中心无黑色形成时与大与大肠埃希氏菌不能区埃希氏菌不能区别肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 斜斜面面底底层产气气硫化硫化氢可能的菌属和种可能的菌属和种/沙沙门氏菌属、弗氏菌属、弗劳地氏地氏柠檬酸檬酸杆菌、杆菌、变形杆菌属、形杆菌属、缓慢慢爱德德华氏菌氏菌/沙沙门氏菌氏菌、弗、弗劳地氏地氏柠檬酸檬酸杆菌、普通杆菌、普通变形杆菌形杆菌沙沙门氏菌属、大氏菌属、大肠埃希氏菌、埃希氏菌、蜂蜂窝哈夫尼哈夫尼亚菌、摩根氏菌，菌、摩根氏菌，普普罗菲登斯菌属菲登斯菌属伤寒沙寒沙门氏菌，氏菌，鸡沙沙门氏菌、氏菌、志志贺氏菌属、大氏菌属、大肠埃希氏菌、埃希氏菌、蜂蜂窝哈夫尼哈夫尼亚菌、摩根氏菌，菌、摩根氏菌，普普罗菲登斯菌属菲登斯菌属/大大肠埃希氏菌、埃希氏菌、肠杆菌属、克杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗劳地氏地氏柠檬酸杆菌檬酸杆菌注：阳性；阴性；注：阳性；阴性；/多数阳性，少数阴性多数阳性，少数阴性肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 反反应序序号号硫化硫化氢（H H2 2S S）靛基靛基质pH7.2pH7.2尿尿素素氰化化钾（KCNKCN）赖氨酸脱氨酸脱羧酶判定判定结果果A1A1沙沙门氏菌属氏菌属A2A2沙沙门氏菌属（少氏菌属（少见）缓慢慢爱、德、德华氏菌氏菌A3A3弗弗劳地氏地氏柠檬酸杆菌、奇檬酸杆菌、奇异、异、变形杆菌形杆菌A4A4普通普通变形杆菌形杆菌B1B1沙沙门氏菌属、大氏菌属、大肠埃希氏埃希氏菌、甲型副菌、甲型副伤寒沙寒沙门氏菌氏菌大大肠埃希氏菌、志埃希氏菌、志贺氏菌氏菌属属B2B2大大肠埃希氏菌、大埃希氏菌、大肠埃希埃希氏菌、志氏菌、志贺氏菌属氏菌属B3B3/克雷伯氏菌族各属阴沟克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆菌、弗杆菌、弗劳地氏地氏柠檬酸杆菌檬酸杆菌B4B4/摩根氏菌，普摩根氏菌，普罗菲登斯菌菲登斯菌属属注注1 1：三糖：三糖铁琼脂底脂底层均均产酸，不酸，不产气者可排除；斜面气者可排除；斜面产酸与酸与产气与否均不限。气与否均不限。注注2 2：KCNKCN和和赖氨酸可氨酸可选作其中一作其中一项，但不能判定，但不能判定结果果时，仍需，仍需补做另一做另一项。注注3 3：表示阳性；表示阴性；：表示阳性；表示阴性；/表示多数阳性，少数阴性。表示多数阳性，少数阴性。沙门氏菌检验沙门氏菌检验几点注意几点注意冷冷冻冻样样品品解解冻冻需需在在4545以以下下，有有自自动动调调温温器器自自控控的的水水浴浴锅锅内内不不断搅拌进行断搅拌进行15min15min或在或在2-82-8，1818小时内软化。小时内软化。为为保保证证检检验验的的准准确确性性，必必须须在在选选择择性性培培养养基基上上挑挑取取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。进进行行生生化化反反应应时时，应应以以纯纯培培养养物物进进行行试试验验，如如出出现现血血清清学学阳阳性性，而而生生化化反反应应特特征征不不符符合合时时，应应对对接接种种物物进进行行纯纯化化，用用纯纯化化后后的的培养物重新进行生化试验。培养物重新进行生化试验。测试中应同时接种阳性对照菌株。测试中应同时接种阳性对照菌株。食品中金黄色葡萄球菌的检测食品中金黄色葡萄球菌的检测1 1、增菌培养法、增菌培养法1.11.1检样处理：无菌操作取样检样处理：无菌操作取样25g25g（mLmL）加入）加入225mL225mL灭菌生理盐水，灭菌生理盐水，固体样品研磨或均质制成混悬液。固体样品研磨或均质制成混悬液。1.21.2增菌及分离培养：吸取增菌及分离培养：吸取5mL5mL上述混悬液，接种于上述混悬液，接种于7.5%7.5%氯化钠氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL50mL培养基内，培养基内，363611培养培养24h24h，转种血平板和转种血平板和BPBP平板，平板，363611培养培养24h24h，挑取血平板上金，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶实验。实验。2.1 2.1 梯度稀释转种梯度稀释转种BPBP平板平板 吸取上述吸取上述1 1：1010混悬液，进行混悬液，进行1010倍第次稀释，根据样品倍第次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL1mL，分别加入三块，分别加入三块BPBP平板，平板，每个平板接种量分别为每个平板接种量分别为0.3mL0.3mL、0.3mL0.3mL、0.4mL0.4mL，然后用灭菌涂，然后用灭菌涂布器涂布整个平板，如水分多不易吸收，可将平板放在布器涂布整个平板，如水分多不易吸收，可将平板放在363611h11h，等水分蒸发后反转平皿置，等水分蒸发后反转平皿置363611培养。培养。2 2、直接计数方法、直接计数方法2.22.2转种血平板转种血平板 在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑色菌落，并从在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑色菌落，并从中任选五个菌落，分别接种血平板，中任选五个菌落，分别接种血平板，于于363611培养培养24h24h后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养方法。后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养方法。2.3 2.3 菌落计数菌落计数 将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以乘以血浆凝固酶阳性数，除以5 5，再乘以稀释倍数，即可求，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。出每克样品中金黄色葡萄球菌数。流流程程三法特点及适用性：三法特点及适用性：第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数食品中金黄色葡萄球菌的计数第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。食品中金黄色葡萄球菌的计数。GB 4789.10-2010GB 4789.10-2010食品安全国家标准食品安全国家标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 金黄色葡金黄色葡萄球菌检验萄球菌检验GB 4789.10-2010GB 4789.10-2010第第一一法法金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌定定性性检检验验GB 4789.10-2010GB 4789.10-2010第二法第二法 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 Baird-ParkerBaird-Parker平板计数平板计数GB 4789.10-2010GB 4789.10-2010第第三三法法 金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌M MP PN N计计数数后面内容直接删除就行后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用主要经营：网络软件设计、图文设计制作、主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！到让客户满意！致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPTPPT设计、计划书、策划案、学习课件、各设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求类模板等方方面面，打造全网一站式需求The user can demonstrate on a projector The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a and make it into a film to be used in a wider fieldwider field